本文關(guān)鍵詞：EV71-2A突變質(zhì)粒的構(gòu)建及體內(nèi)外功能初探

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【摘要】：目的構(gòu)建pc DNA3.1-EV71-2A的突變質(zhì)粒(EV71-2Amut),并對其功能進行檢測,為進一步研究腸道病毒71型(Enterovirus type 71,EV71)2A蛋白酶的活性位點及其生物學(xué)功能奠定實驗基礎(chǔ)。方法利用聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)定點誘變技術(shù),定點突變編碼EV71-2A第21His、39Asp和110Cys氨基酸的位點,構(gòu)建EV71-2Amut,并測序鑒定。將所構(gòu)建突變質(zhì)粒與巨細胞病毒(Cytomegalovirus,CMV)啟動子介導(dǎo)的真核細胞熒光素酶報告基因(pRL-CMV)共轉(zhuǎn)染人橫紋肌肉瘤細胞(RD細胞),通過觀察轉(zhuǎn)染組的EV71-2Apro和EV71-2Amut對pRL-CMV熒光強度的影響,判斷突變質(zhì)粒的細胞內(nèi)酶活性。將EV71-2Apro或EV71-2Amut質(zhì)粒轉(zhuǎn)染BALB/c小鼠股四頭肌,用RT-PCR檢測局部相應(yīng)質(zhì)粒的mRNA水平,并觀察局部肌肉組織的病理變化。結(jié)果構(gòu)建的突變質(zhì)粒EV71-2Amut經(jīng)測序及比對,結(jié)果與預(yù)計突變位點一致;在細胞學(xué)水平檢測到的pRL-CMV熒光強度,EV71-2Amut組比EV71-2Apro組顯著增高(P0.05);小鼠股四頭肌注射局部均檢出EV71-2Apro和EV71-2Amut的mRNA表達,且與EV71-2Apro組相比,EV71-2Amut注射組的肌肉組織的肌肉凝固性壞死、炎癥反應(yīng)病理損傷較輕。結(jié)論成功構(gòu)建了突變的EV71-2Amut質(zhì)粒,為研究EV71-2A蛋白酶的生物學(xué)功能奠定了實驗基礎(chǔ)。
【作者單位】： 北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系;山西醫(yī)科大學(xué)汾陽學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗系病原生物學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 腸道病毒型 突變質(zhì)粒 構(gòu)建 序列分析 生物學(xué)效應(yīng)
【分類號】：R373
【正文快照】： 腸道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)是引起手足口病的重要病原體。幾十年來該病在亞太地區(qū)廣泛流行,尤其在中國大陸和臺灣地區(qū)。大多數(shù)患者癥狀輕微,主要以發(fā)熱,手、足及口腔黏膜等部位皰疹為特征;少數(shù)嚴重患者還出現(xiàn)腦炎、無菌性腦膜炎、神經(jīng)源性肺水腫等癥狀,甚至可致嬰幼兒，

本文編號：1041483