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腦膠質(zhì)瘤中NDRG2表達(dá)下調(diào)機(jī)制研究
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本站編輯：admin 日期： 2010-09-09 20:59 點擊：次
【中文摘要】:
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【中文摘要】人NDRG2(N-myc downstream regulated gene 2)基因是本研究組用錨定引物PCR方法從正常人腦cDNA文庫中克隆得到的一個新基因,基因庫登錄號為AF159092,之后在腦膠質(zhì)瘤和瘤旁組織的消減雜交中,抑癌基因組又克隆到該基因。NDRG2為NDRG基因家族成員之一,且該基因家族成員的氨基酸組成在從低等生物到高等生物的進(jìn)化中有相當(dāng)高的保守性,提示該基因家族在細(xì)胞的生命過程中起著重要作用。而目前對于NDRG2結(jié)構(gòu)和功能的研究尚處于初步階段。我們研究小組發(fā)現(xiàn),將該基因轉(zhuǎn)染入某些腫瘤細(xì)胞系后具有抑制細(xì)胞增殖的功能,且發(fā)現(xiàn)該基因在膠質(zhì)瘤、肺癌和肝癌等十余種腫瘤組織中的表達(dá)低于相應(yīng)的癌旁組織,因此目前觀點認(rèn)為NDRG2可能是抑癌基因,但具體作用機(jī)制尚不清楚。本實驗首先采用實時定量PCR技術(shù)檢測膠質(zhì)瘤中NDRG2的表達(dá),發(fā)現(xiàn)NDRG2表達(dá)水平明顯低于瘤旁組織,進(jìn)一步采用BSP技術(shù)檢測膠質(zhì)瘤組織和細(xì)胞系中NDRG2啟動子區(qū)CpG島甲基化狀態(tài),分析NDRG2啟動子甲基化與基因表達(dá)的關(guān)系。因PI3K通路是膠質(zhì)瘤中異常活躍的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路之一,AKT和PKC是其下游分子。有研究表明NDRG2是AKT、PKC的底物,本實驗檢測了膠質(zhì)瘤中PI3K、AKT2、PKC-αmRNA表達(dá),在mRNA水平探討它們與NDRG2表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果發(fā)現(xiàn),腦膠質(zhì)瘤中NDRG2 mRNA表達(dá)低于瘤旁組織,且隨膠質(zhì)瘤惡性程度增高,NDRG2表達(dá)逐漸減少;膠質(zhì)瘤組織NDRG2啟動子區(qū)甲基化陽性率顯著多于瘤旁組織,且甲基化陽性的Ⅳ級膠質(zhì)瘤多于Ⅲ級、Ⅱ級膠質(zhì)瘤;病理分級間甲基化陽性位點數(shù)目有差異,其中Ⅳ級與Ⅲ級間有顯著性差異;檢測的32個CpG位點中正向序列的前16個CpG位點發(fā)生甲基化的頻率顯著高于后16個CpG位點;細(xì)胞系中,U251發(fā)生了甲基化,SHG44未發(fā)生甲基化。說明NDRG2的表達(dá)降低可能參與了膠質(zhì)瘤的發(fā)生和發(fā)展。NDRG2啟動子區(qū)的甲基化可能是導(dǎo)致NDRG2表達(dá)下調(diào)進(jìn)而促使膠質(zhì)瘤發(fā)生惡性演變的原因之一。另外,對膠質(zhì)瘤中PI3K、AKT2、PKC-αmRNA表達(dá)量的檢測發(fā)現(xiàn)PKC-αmRNA表達(dá)高于瘤旁組織,余無明顯差異,且上述蛋白激酶在mRNA表達(dá)量方面未發(fā)現(xiàn)與NDRG2有相關(guān)性,還需在蛋白質(zhì)水平進(jìn)一步探討它們之間的關(guān)系。
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