本文關(guān)鍵詞：并發(fā)神經(jīng)病論文，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

ADC病人HIV

分享到： 本站編輯：admin 日期： 2010-09-08 21:45 點擊：次

【中文摘要】:

 相關(guān)并發(fā)神經(jīng)病論文

【中文摘要】目的影響ADC發(fā)病的主要因素有HIV-1病毒的致病性、機(jī)體的神經(jīng)易感性及免疫抑制的水平。研究表明大腦及腦脊液中HIV病毒載量與ADC的發(fā)生并非總是有關(guān),這說明ADC的發(fā)生可能與HIV本身的基因及生物學(xué)活性有關(guān)。鑒于HIV-1gp120在病毒與宿主細(xì)胞結(jié)合和融合中發(fā)揮不可替代的作用,本研究的第一部分?jǐn)M通過對來源于2例ADC病人各6個組織的共60株HIV-1gp120序列進(jìn)行基因多樣性與生物學(xué)活性位點分析,對HIV-1gp120基因多樣性和生物學(xué)活性與ADC發(fā)病的關(guān)系作出初步判斷。HIV-1致ADC發(fā)病的機(jī)制尚不清楚,但可以肯定的是它可以通過刺激膠質(zhì)細(xì)胞或巨噬細(xì)胞分泌細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β引起神經(jīng)元細(xì)胞損傷。鑒于HIV-1病毒載量與ADC的發(fā)生并非總是有關(guān),本研究的第二部分?jǐn)M通過分析不同病人不同組織來源基因不完全相同的HIV-1gp120誘導(dǎo)細(xì)胞分泌TNF-α、IL-1β的能力,來探討HIV-1gp120基因差異是否與其刺激細(xì)胞分泌TNF-α、IL-1β的能力有關(guān),從而為ADC闡述發(fā)病機(jī)制提出新觀點,為ADC的預(yù)防與控制提供新思路。方法1.以HIV-1B標(biāo)準(zhǔn)株HXB2 gp120基因序列基因組DNA序列作為模板,應(yīng)用Primer 5.0軟件設(shè)計引物,巢式PCR法擴(kuò)增源自兩例ADC病人共12個不同組織的HIV-1gp120序列,PCR產(chǎn)物經(jīng)TA克隆后,轉(zhuǎn)化至大腸桿菌DH5α,經(jīng)藍(lán)白斑、氨芐青霉素篩選及測序后,每個部位選取5個HIV-1gp120陽性克隆進(jìn)行序列分析。通過對來自于兩例ADC病人不同組織的HIV-1gp120序列分別進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育樹、ds／dn比值、糖基化位點、V3環(huán)關(guān)鍵位點氨基酸等分析,以探討HIV-1gp120與ADC發(fā)病的關(guān)系。2.隨機(jī)選取源自兩例ADC病人外周組織、中樞神經(jīng)組織的HIV-1gp120克隆各一個(共4個克隆),PCR擴(kuò)增gp120基因,經(jīng)TA克隆、藍(lán)白斑及氨芐青霉素篩選,提取陽性質(zhì)粒,雙酶切后的gp120片段與經(jīng)過同樣雙酶切的逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體MSCV-IRES-GFP連接,轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,氨芐青霉素篩選HIV-1gp120陽性表達(dá)載體,經(jīng)雙酶切和測序證實。然后將逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體與pUMVC、pCMV-VSV-G共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,免疫熒光顯微鏡觀察逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的表達(dá)、免疫組化實驗檢測HIV-1gp120的表達(dá)。收獲免疫熒光檢測陽性的重組逆轉(zhuǎn)錄病毒懸液,經(jīng)逐孔稀釋法測定其感染滴度,然后感染U87細(xì)胞,熒光顯微鏡檢測重組逆轉(zhuǎn)錄病毒蛋白的表達(dá),免疫組化實驗檢測HIV-1gp120的表達(dá),ELISA法測定細(xì)胞上清中TNF-α、IL-1β的含量,SPSS軟件分析測定結(jié)果。結(jié)果1.獲得了來源于兩例ADC病人各6個組織共60個HIV-1gp120陽性克隆,并經(jīng)測序證實,BLAST分析均為HIV-1Bgp120序列。2.構(gòu)建了每例ADC病人來源的各6個組織共30個HIV-1gp120基因克隆的系統(tǒng)發(fā)育樹,由系統(tǒng)發(fā)育樹可見,不同組織來源的HIV-1gp120基因位于不同的系統(tǒng)發(fā)育樹進(jìn)化枝上,不同組織來源的HIV-1gp120基因克隆也可以存在交叉現(xiàn)象。3.與HIV-1B標(biāo)準(zhǔn)株HXB2 gp120相比,第一例ADC病人來源的HIV-1gp120其各自的ds／dn=1.1744±0.0348(p＜0.001)；第二例病人體內(nèi)來源的所有HIV-1gp120基因序列的ds／dn=0.8222±0.2086(p＜0.001)；兩個病例來源的HIV-1gp120基因序列的ds／dn具有顯著性差別(p＜0.001)。4.以HIV-1B標(biāo)準(zhǔn)株HXB2gp120的糖基化位點為標(biāo)準(zhǔn),第一例ADC病人來源HIV-1gp120序列糖基化位點相對比較保守,第二例ADC病人來源的HIV-1gp120序列糖基化位點變異較大。5.根據(jù)現(xiàn)有的資料,可以預(yù)測感染兩例ADC病人大腦組織的HIV-1病毒均為CCR5受體使用型、巨噬細(xì)胞嗜性、非合胞體誘導(dǎo)型毒株。6.構(gòu)建了4個HIV-1包膜糖蛋白gp120的逆轉(zhuǎn)錄表達(dá)載體A1/MIG、B1/ MIG.A2/MIG.B2/MIG,雙酶切鑒定目的片段和載體分別為1.44kb和6.8kb,并經(jīng)測序證實。對四個表達(dá)載體中的HIV-1gp120進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)四株HIV-1gp120序列存在基因差異,其中A1／MIG的V3環(huán)序列與其他三株序列差異較大。7.熒光顯微鏡觀察結(jié)果顯示共轉(zhuǎn)染MSCV-IRES-GFP.pUMVC及pCMV-VSV-G的293T細(xì)胞及感染重組逆轉(zhuǎn)錄病毒的U87細(xì)胞中均有綠色熒光信號產(chǎn)生。逐孔稀釋法測定重組逆轉(zhuǎn)錄病毒的滴度約為106／ml。8免疫組化實驗顯示轉(zhuǎn)染A1/MIG、B1/MIG、A2/MIG、B2/MIG表達(dá)載體的293T細(xì)胞及感染HIV-1gp120陽性重組逆轉(zhuǎn)錄病毒的U87細(xì)胞中均有HIV-1gp120陽性細(xì)胞出現(xiàn)。9.ELISA測定重組逆轉(zhuǎn)錄病毒感染細(xì)胞上清中TNF-α、IL-1β含量,發(fā)現(xiàn)HIV-1gpl20陽性重組逆轉(zhuǎn)錄病毒誘導(dǎo)細(xì)胞分泌的TNF-α、IL-1β量高于HIV-1 gpl20陰性重組逆轉(zhuǎn)錄病毒(p＜0.001)；第一例ADC病人外周組織來源的HIV-1gpl20誘導(dǎo)細(xì)胞分泌TNF-α、IL-1β的量高于其它3個組織來源的HIV-1gpl20(p<0.001),而其他3個組織來源的HIV-1gp120誘導(dǎo)分泌的TNF-α、IL-1β的量差別無統(tǒng)計學(xué)意義(p＞0.10)。結(jié)論1.HIV-1 gp120的基因多樣性和生物學(xué)活性位點改變與ADC的發(fā)病機(jī)制可能存在一定關(guān)系。2.HIV.1gp120能增強(qiáng)膠質(zhì)細(xì)胞分泌TNF-α、IL-1β的能力。3.HIV-1gp120基因序列尤其是V3環(huán)序列能影響其刺激膠質(zhì)細(xì)胞分泌TNF-α、IL-1β的能力,CCR5受體使用型的HIV-1gp120誘導(dǎo)細(xì)胞分泌TNF-α、IL-1β的能力高于非CCR5受體使用型的HIV-1gp120。

【簡要目錄】:快速索取本篇簡要目錄>>> 【我要投稿】

【全文提供】:快速索取本篇論文全文>>> 【論文輔導(dǎo)】

本文出自：

本文TAGS：

上一篇：Aβ在脾陰虛糖尿病腦病大鼠腦組織的表達(dá)及滋補(bǔ)脾陰方藥作用機(jī)制 下一篇：大鼠慢性酒精中毒性周圍神經(jīng)病的自由飲模型及藥物干預(yù)

　　 　　

  本文關(guān)鍵詞：并發(fā)神經(jīng)病論文，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：129318