為了解枇杷有色體特異番茄紅素β-環(huán)化酶基因（CYC-B）的序列及表達特點,本研究以‘大五星’（紅肉）和‘川農(nóng)1-5-9’（白肉）枇杷為材料,采用同源克隆法,從枇杷果實中克隆了類胡蘿卜素生物合成途徑中關(guān)鍵酶基因之一（CYC-B的c DNA全長序列）,運用生物學(xué)軟件對該序列及推導(dǎo)的氨基酸序列進行相關(guān)生物信息學(xué)分析,同時利用熒光定量PCR技術(shù)探究CYC-B基因在枇杷果實不同發(fā)育時期的表達模式。結(jié)果顯示,該基因全長1 579 bp,具有1 491 bp的完整開放閱讀框,編碼496個氨基酸。氨基酸同源性分析表明,該基因編碼的氨基酸序列與白梨（XP₀09377819.1）和蘋果（Malus domestica） CYC-B基因（XP₀08361015.1）的同源性分別高達98%和97%,由此推測這個基因?qū)儆阼凌薈YC-B基因（EjCYC-B）。熒光定量PCR分析結(jié)果表明,隨著枇杷果實的發(fā)育,EjCYC-B的表達量明顯增加,且不同發(fā)育階段EjCYC-B基因的表達存在顯著變化;其中,在果皮和果肉中的表達分別在黃熟期和成熟期達到最高峰。因此可以推測,EjCYC... 

【文章來源】：基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2020,39(11)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

植物CYC-B氨基酸序列系統(tǒng)進化樹

參考張玲等(2013)的分類方法，根據(jù)花后枇杷果實的生長以及果皮著色變化，將枇杷分為未轉(zhuǎn)色期、轉(zhuǎn)色期、褪綠期、黃熟期和成熟期五個不同發(fā)育階段(圖6)，并將果實分為果皮、果肉后經(jīng)液氮速凍后于-80℃超低溫冰箱保存?zhèn)溆谩?.2.1 枇杷總RNA的提取及c DNA的克隆

根據(jù)蛋白理化性質(zhì)分析結(jié)果顯示，該蛋白分子量為56.24 k D，理論等電點為8.81，帶正電荷(Arg+Lys)及帶負電荷(Asp+Glu)的殘基總數(shù)分別為60、53，不穩(wěn)定系數(shù)(Instability index)為50.26，屬不穩(wěn)定蛋白。親水性/疏水性分析結(jié)果表明，該蛋白最大親水性氨基酸值分別位于多肽鏈5號、228號及230號位，為-2.822；最大疏水性氨基酸值位于多肽鏈461號位，為2.444。該蛋白的總平均親水性(GRAVY)為-0.181。因此，它屬于親水性蛋白。圖2‘大五星’和‘川農(nóng)1-5-9’枇杷CYC-B基因氨基酸序列比對

【參考文獻】：
期刊論文
[1]枇杷果實類胡蘿卜素研究進展[J]. 劉小洪,孫海艷,陳薇薇,郭啟高,李曉林,梁國魯.  果樹學(xué)報. 2016(07)
[2]Characterization of Carotenoid Accumulation and Carotenogenic Gene Expression During Fruit Development in Yellow and White Loquat Fruit[J]. ZHANG Ling,ZHANG Zhike,ZHENG Tingting,WEI Weilin,ZHU Yunmei,GAO Yongshun,YANG Xianghui,LIN Shunquan.  Horticultural Plant Journal. 2016(01)
[3]園藝植物中類胡蘿卜素合成與調(diào)控的研究進展[J]. 高慧君,明家琪,張雅娟,徐娟.  園藝學(xué)報. 2015(09)
[4]枇杷果實成熟過程中果肉細胞質(zhì)體的發(fā)育與果肉顏色的變化[J]. 鄭婷婷,魏偉淋,何業(yè)華,楊向暉,林順權(quán).  果樹學(xué)報. 2015(04)
[5]枇杷DXR基因的克隆及其在果實成熟過程中的表達分析[J]. 張玲,林順權(quán),胡又厘,鄭婷婷,楊向暉.  果樹學(xué)報. 2013(04)
[6]植物類胡蘿卜素生物合成相關(guān)基因的表達調(diào)控及其在植物基因工程中的應(yīng)用[J]. 王玉萍,劉慶昌,翟紅.  分子植物育種. 2006(01)
[7]枇杷的營養(yǎng)及功能成分研究進展[J]. 張玉,王建清.  食品科學(xué). 2005(09)

博士論文
[1]紅肉和白肉枇杷果實類胡蘿卜素差異積累機制研究[D]. 傅秀敏.浙江大學(xué) 2013



本文編號：3535464