為篩選鐵皮石斛(Dendrobiumofficinale)花總RNA提取方法,對8種提取方法進(jìn)行了比較研究,包括改良CTAB-LiCl法(M1)、改良CTAB-異丙醇法(M2)、改良SDS-LiCl法(M3)、改良SDS-異丙醇法(M4)、多糖多酚植物RNA提取試劑盒法(M5)、柱式植物RNAout 2.0試劑盒法(M6)、RNAprep Pure多糖多酚植物總RNA提取試劑盒法(M7)和Biospin多糖多酚植物總RNA提取試劑盒法(M8)。結(jié)果表明,以M4和M5提取的總RNA帶型清晰,完整性好,A260 nm/A280 nm為1.8～2.0,A260 nm/A230 nm大于2.0,RNA產(chǎn)率分別為(159.45±1.45)和(170.84±3.53)μg/g。利用M4、M5提取霍山石斛、金釵石斛、鼓槌石斛和美花石斛花的總RNA,樣品的完整性、濃度和純度均符合質(zhì)量要求。以M4、M5提取的鐵皮石斛總RNA為模板,擴(kuò)增Actin基因片段,擴(kuò)增產(chǎn)物大小與預(yù)期一致且條帶單一。這說明M4、M5方法操作簡便,結(jié)果重復(fù)性好,能夠較好地提取石斛屬植物花的總RNA。

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 試驗(yàn)材料
    1.2 儀器和試劑
    1.3 花的總RNA提取方法
    1.4 RNA質(zhì)量濃度檢測
    1.5 RT-PCR檢測
    1.6 其他石斛屬植物總RNA提取
2 結(jié)果和分析
    2.1 總RNA完整性檢測
    2.2 總RNA濃度與純度的檢測
    2.3 內(nèi)參基因的RT-PCR擴(kuò)增
    2.4 石斛屬植物RNA的提取
3 結(jié)論和討論



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