優(yōu)化了重組茶樹咖啡酰輔酶A–O–甲基轉(zhuǎn)移酶基因（CCoAOMT）在大腸桿菌中的表達(dá),采用Ni–NTA親和層析柱對重組蛋白進(jìn)行純化。以表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）為底物,進(jìn)行體外酶促反應(yīng),采用HPLC測定反應(yīng)產(chǎn)物EGCG3"Me的生成量。結(jié)果表明,CCoAOMT在E.coliBL21中能夠高效表達(dá),最優(yōu)條件為誘導(dǎo)溫度37℃,誘導(dǎo)時間4 h,異丙基–β–D–硫代半乳糖苷（IPTG）濃度0.5 mmol/L;重組蛋白經(jīng)Ni–NTA親和層析柱梯度洗脫達(dá)到了較好的純化效果;重組酶在體外能夠催化EGCG,合成EGCG3"Me,底物EGCG最佳濃度為0.05 mmol/L,最適溫度為37℃,最適pH值為4。 

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 重組表達(dá)載體的構(gòu)建
        1.2.2 原核表達(dá)條件的優(yōu)化及蛋白純化
        1.2.3 酶促反應(yīng)條件優(yōu)化
2 結(jié)果與分析
    2.1 p ET–28a–CCo AOMT重組質(zhì)粒的鑒定
    2.2 重組茶樹p ET–28a–CCo AOMT的誘導(dǎo)表達(dá)
    2.3 重組蛋白CCo AOMT的純化
    2.4 酶促產(chǎn)物的HPLC分析
    2.5 不同酶促反應(yīng)條件下的產(chǎn)物生成量
3 結(jié)論與討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3731755