為探討RcCNGC2在蓖麻耐鹽中的作用,以通蓖5號(hào)葉片為材料,克隆獲得環(huán)核苷酸門(mén)控離子通道RcCNGC2完整編碼區(qū)序列（CDS）,并對(duì)該序列進(jìn)行序列比對(duì)、蛋白結(jié)構(gòu)分析,構(gòu)建多元表達(dá)載體,分析了在鹽脅迫下蓖麻RcCNGC2基因根、莖、葉組織中6個(gè)時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)量變化。結(jié)果顯示,RcCNGC2 CDS長(zhǎng)度為2 148 bp,編碼715個(gè)氨基酸,蛋白分子量為34.15 ku,等電點(diǎn)為9.96,存在5個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域。氨基酸序列一致性分析表明,RcCNGC2與橡膠樹(shù)一致性最高,達(dá)89.15%。qRT-PCR分析結(jié)果顯示,NaCl處理后RcCNGC2表達(dá)量在根中上調(diào)且差異顯著,在莖、葉中隨NaCl處理時(shí)間延長(zhǎng)而顯著減少。綜上,RcCNGC2在蓖麻受到鹽脅迫時(shí)起重要信號(hào)傳導(dǎo)作用。 

【文章來(lái)源】：華北農(nóng)學(xué)報(bào). 2020,35(04)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

蓖麻RcCNGC2基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物

經(jīng)測(cè)序?yàn)殛?yáng)性菌液擴(kuò)搖,提取質(zhì)粒后,應(yīng)用限制性內(nèi)切酶SmaⅠ和XbaⅠ將該質(zhì)粒與表達(dá)載體pCG-3300進(jìn)行雙酶切,T4連接酶連接酶切產(chǎn)物,轉(zhuǎn)化到大腸桿菌感受態(tài)Top10細(xì)胞中,通過(guò)Kan抗性篩選陽(yáng)性菌,擴(kuò)搖后提質(zhì)粒,進(jìn)行重組質(zhì)粒PCR鑒定和雙酶切鑒定,瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果(圖7)顯示,重組質(zhì)粒約為108 681 bp且明顯大于酶切后表達(dá)載體電泳條帶,酶切后目的片段大小與RcCNGC2序列大小一致,植物表達(dá)載體構(gòu)建成功。圖3 RcCNGC2蛋白保守區(qū)預(yù)測(cè)

RcCNGC2蛋白保守區(qū)預(yù)測(cè)

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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本文編號(hào)：3578960