為探索棉花GhMADS43基因在莖尖和花分生組織發(fā)育過程中的機理,從棉花中克隆了MADS-box家族中GhMADS43基因,并對該基因進行表達分析和酵母自激活分析,以期利用酵母雙雜交篩選GhMADS43的互作蛋白質。對棉花中GhMADS43基因進行克隆及組織特異性表達分析,結果顯示,GhMADS43基因全長696 bp,編碼231個氨基酸,與其他植物中編碼FUL蛋白的基因親緣關系相近。由特異性表達分析可得,GhMADS43基因在根和頂芽中表達量較高;對2種不同果枝材料進行不同頂芽發(fā)育時期的表達分析表明,該基因在無限果枝材料中棉所50五葉期和六葉期的表達量顯著高于一式果枝材料早鈴1號。將該基因構建到酵母誘餌載體pGBKT7,得到pGBKT7-GhMADS43誘餌表達載體。重組質粒轉化酵母Y2HGold菌株后,在SD/-Trp平板上生長良好,表明重組誘餌質粒表達產(chǎn)物對酵母細胞無毒性,在SD/-Trp/X-α-Gal平板上長出白色菌落變藍。利用不同濃度的3-AT對其進行篩選發(fā)現(xiàn),該基因不能在三缺培養(yǎng)基SD/-Trp/-His/-Ade中生長,表明該基因不具有自激活活性。構建好誘餌表達載體后,... 

【文章來源】：華北農(nóng)學報. 2020,35(06)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

GhMADS43基因克隆(A)與蛋白進化樹分析(B)

組織特異性表達模式分析得出,GhMADS43基因在棉花的根和頂芽中優(yōu)勢表達,在成熟的花、纖維和胚珠中表達量顯著降低(圖2-A)。選取一式果枝早熟棉早鈴1號和無限果枝早熟棉材料中棉所50從四葉展平時期至七葉展平時期的莖尖分生組織樣品進行表達分析。結果表明,從五葉期開始GhMADS43基因在無限果枝中棉所50中的表達量高于一式果枝早鈴1號,隨著取樣時間的推移,在中棉所50的六葉期和七葉期,GhMADS43基因的表達量顯著高于早鈴1號(圖2-B)。2.3 GhMADS43基因誘餌載體的構建和鑒定

將上述構建好的誘餌載體和陽性對照pGBKT7-53分別轉化至酵母菌株Y2HGold 中,待生長3～5 d后挑取2 mm左右的酵母單克隆在SD/-Trp缺陷培養(yǎng)基中培養(yǎng)過夜,并進行菌液PCR,PCR產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測。結果如圖(圖4-A)所示,誘餌重組質粒和陽性對照質粒轉化后酵母菌落PCR產(chǎn)物條帶大小與目標基因大小一致,說明重組誘餌質粒載體pGBKT7-GhMADS43和陽性對照質粒pGBKT7-53轉化酵母成功。缺陷固體培養(yǎng)結果表明,轉有重組誘餌載體在SD/-Trp平板上和轉有對照的平板上菌落密集程度相似,生長正常,菌落大小均介于2～3 mm(圖4-B)。重組誘餌質粒pGBKT7-GhMADS43和陽性對照質粒pGBKT7-53的菌液過夜培養(yǎng)后,OD600的檢測值分別為1.002和1.121,均超過標準值0.8,說明重組誘餌蛋白對酵母菌Y2HGold 生長無毒性,可進行自激活活性檢測。圖4 誘餌載體轉化酵母PCR檢測(A)和毒性檢測(B)

【參考文獻】：
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