目的:本研究旨在探索長鏈非編碼RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)與廣州地區(qū)采集的細顆粒物(Fine particulate matter,PM_2.5)誘發(fā)大鼠肺泡巨噬細胞(NR8383)和SD大鼠的炎癥反應間調控關系。方法:第一部分:采集廣州地區(qū)的PM_2.5暴露于NR8383細胞誘發(fā)炎癥建立炎癥模型。用CCK8法檢測不同染毒時間、染毒濃度下的細胞存活率。細胞因子抗體芯片篩選出主要的炎性因子,RT-q PCR、ELISA進行驗證。通過lncRNA高通量測序篩選與RT-q PCR驗證出差異顯著的lncRNAs。通過胞漿胞核亞細胞定位實驗確定lncRNAs在細胞中的分布情況并確定lncRNA AABR07005593.1作為研究的目的lncRNA。使用RNAi技術構建細胞轉染lncRNA AABR07005593.1的loss-of-function體系,轉染聯(lián)合PM_2.5暴露染毒,觀察炎性因子的表達水平。通過lncRNA高通量測序、目的lncRNA功能實驗及KEGG數(shù)據庫分析,我們預測目的lncR...

【文章頁數(shù)】：104 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
第一部分 lncRNA AABR07005593.1在PM_2.5誘導NR8383 細胞炎癥反應中的作用
    1.材料與方法
        1.1 主要實驗材料
        1.2 主要設備
        1.3 顆粒物的采集與處理
        1.4 細胞培養(yǎng)
        1.5 制備PM_2.5工作液
        1.6 細胞存活率的檢測
        1.7 細胞因子抗體芯片篩選炎性因子
        1.8 RT-qPCR及 ELISA驗證炎性因子的表達水平
        1.9 NR8383 細胞暴露PM_2.5后轉錄組測序及分析
        1.10 胞漿胞核亞細胞定位實驗
        1.11 lncRNAAABR07005593.1 功能驗證實驗
        1.12 NF-ΚB通路阻斷實驗
        1.13 ChIRP-MS實驗
        1.14 統(tǒng)計學處理
    2 結果
        2.1 PM_2.5對細胞存活率的影響
        2.2 細胞因子抗體芯片篩選炎性因子
        2.3 RT-qPCR及 ELISA驗證炎性因子的表達水平
            2.3.1 RT-qPCR驗證炎性因子的轉錄水平
            2.3.2 ELISA驗證炎性因子的蛋白水平
        2.4 NR8383 細胞暴露于PM_2.5后轉錄組測序及分析
        2.5 胞漿胞核亞細胞定位實驗
        2.6 lncRNA AABR07005593.1 功能驗證實驗
        2.7 NF-ΚB通路阻斷實驗
        2.8 ChIRP-MS實驗
    3 討論
第二部分:PM_2.5誘導SD大鼠產生炎性反應及l(fā)ncRNA AABR07005593.1的表達情況
    1 材料與方法
        1.1 主要實驗材料與設備
        1.2 實驗動物
        1.3 PM_2.5顆粒的采集與處理
        1.4 大鼠分組及染毒方式
        1.5 大鼠觀察與處理
        1.6 血常規(guī)指標檢測
        1.7 臟器觀察
        1.8 大鼠肺組織細胞因子抗體芯片及RT-qPCR結果
            1.8.1 細胞因子抗體芯片篩選炎性因子
            1.8.2 RT-qPCR驗證炎性芯片結果
        1.9 RT-qPCR驗證目的lncRNA AABR07005593.1 的表達
        1.10 統(tǒng)計學描述
    2 結果
        2.1 大鼠的一般情況
        2.2 各組大鼠體質量變化
        2.3 各組SD大鼠周圍血血常規(guī)指標比較結果
        2.5 各組大鼠臟器系數(shù)比較
        2.6 各組大鼠肺組織病理學檢查結果
        2.7 大鼠肺組織細胞因子抗體芯片及RT-qPCR結果
        2.8 RT-qPCR驗證目的lncRNA AABR07005593.1 的表達
    3 討論
參考文獻
附錄
綜述 大氣細顆粒物(PM_2.5)致呼吸系統(tǒng)疾病的作用機制研究進展
    參考文獻
致謝
個人簡歷
攻讀學位期間發(fā)表的學術論文



本文編號：3968237