利用分子生物學(xué)手段,對青杄PwHAP5及其擬南芥同源基因AtHAP5的下游調(diào)控基因進行探究,旨在豐富青杄以及擬南芥中HAP5轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。通過轉(zhuǎn)錄激活活性分析,發(fā)現(xiàn)PwHAP5和AtHAP5均無轉(zhuǎn)錄激活活性。兩個酵母單雜交體系(pHis2和pAbAi體系酵母單雜交實驗)顯示A37、HSFA2啟動子全長、只含有CCAAT box的區(qū)域均不能與PwHAP5和AtHAP5直接結(jié)合。EMSA試驗結(jié)果表明,AtHAP5與A37和HSFA2啟動子在體外不能直接結(jié)合;單(雙)熒光素酶試驗結(jié)果表明,AtHAP5對HSFA2具有負調(diào)控作用,但對A37表達無影響。通過RT-qPCR試驗檢測在異源過表達OE-PwHAP5植株中預(yù)測靶基因的表達量,結(jié)果顯示A37與HSFA2相對表達量均無顯著變化,而在同源過表達植株OE-AtHAP5中,HSFA2的相對表達量下降。這些結(jié)果顯示AtHAP5在體內(nèi)負調(diào)控HSFA2表達,而PwHAP5在進化上與AtHAP5的功能存在差異。

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
2 結(jié)果與分析
    2.1 轉(zhuǎn)錄激活活性分析
    2.2 酵母單雜交試驗
        2.2.1 pHis2體系酵母單雜交
        2.2.2 pAbAi體系酵母單雜交
    2.3 原核蛋白誘導(dǎo)純化與EMSA試驗
    2.4 熒光素酶試驗
    2.5 基因水平驗證調(diào)控作用
        2.5.1 AtHAP5各株系中AtHAP5、HSFA2、A37的表達
        2.5.2 PwHAP5各株系中PwHAP5、HSFA2、A37的表達
3 討論
4 結(jié)論



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