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巴西橡膠樹橡膠轉移酶激活因子HbRTA的克

發(fā)布時間:2022-01-13 21:30
  為深入了解天然橡膠次生代謝生物合成過程,本研究從橡膠樹膠乳中分離得到一個橡膠轉移酶激活因子基因HbRTA,并對其進行了克隆、表達、定位以及生物學分析。結果表明,HbRTA的基因組序列為3 632 bp,含有7個外顯子和6個內含子,其開放閱讀框(ORF)為774 bp,編碼蛋白含257個氨基酸,分子量為29.38 kD,理論等電點為8.57。酵母實驗及亞細胞定位表明,HbRTA蛋白沒有轉錄激活活性,且定位在細胞質中。實時熒光定量PCR分析發(fā)現,HbRTA在葉片、雌花、雄花、膠乳、樹皮中均表達,其中膠乳表達量高于其它組織,并且膠乳中該基因的表達受割膠、茉莉酸(JA)和乙烯利(ET)刺激的影響。綜合分析結果推測:HbRTA的表達可能與巴西橡膠樹橡膠生物合成及膠乳產量有關。 

【文章來源】:分子植物育種. 2020,18(23)北大核心CSCD

【文章頁數】:8 頁

【部分圖文】:

巴西橡膠樹橡膠轉移酶激活因子HbRTA的克


Hb RTA基因的核苷酸序列和推測氨基酸序列

蛋白,疏水性,親水性,β轉變


圖3 橡膠樹Hb RTA蛋白與其他植物同源蛋白的系統(tǒng)進化樹采用SOPMA (http://pbil.ibcp.fr/)軟件對Hb RTA蛋白進行二級結構在線預測,結果顯示該蛋白有136個α-螺旋(α-helix)、29個延伸帶(Extended strand)、11個β轉變(β-turn)、81個無規(guī)則卷曲構成,占比分別為α-螺旋(52.92%)、延伸帶(11.28%)、β轉變(4.28%)、無規(guī)則卷曲(31.52%)。通過SWISS-MO-DEL軟件在線分析其二級結構(圖4 B),所得結果與二級結構預測基本一致,進一步驗證了Hb RTA結構的正確性。

細胞,酵母,質粒,轉錄因子


酵母實驗結果顯示:已轉入陽性對照Hb NAC24轉錄因子、p GBKT7-Hb RTA以及陰性對照p GBKT7質粒的酵母Y2HGold均能在缺陷培養(yǎng)基SD/-Trp上生長,表明成功構建誘餌表達載體,質粒已經順利轉入Y2HGold酵母感受態(tài)細胞中。攜帶p GBKT7-HbRTA和陰性對照p GBKT7質粒的酵母Y2HGold在三缺培養(yǎng)基SD/-Trp/-Ade/-His上不能正常生長,而陽性對照攜帶Hb NAC24轉錄因子質粒的酵母能夠正常生長并且變藍(圖6),表明Hb RTA編碼的蛋白沒有自激活活性。1.5 Hb RTA基因的表達

【參考文獻】:
期刊論文
[1]巴西橡膠樹橡膠生物合成關鍵基因REF,SRPP,HRT1和HRT2的表達分析[J]. 王藝航,康桂娟,黎瑜,覃懷德,曾日中.  基因組學與應用生物學. 2018(09)
[2]我國天然橡膠產業(yè)發(fā)展概況及現狀分析[J]. 金華斌,田維敏,史敏晶.  熱帶農業(yè)科學. 2017(05)
[3]巴西橡膠樹HbNAC24基因克隆和表達分析[J]. 康桂娟,黎瑜,曾日中.  西北植物學報. 2014(12)
[4]應用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選橡膠延長因子REF的互作蛋白[J]. 曾日中,李先昆,聶智毅,代龍軍,黎瑜,段翠芳.  熱帶亞熱帶植物學報. 2011(05)
[5]一種提取橡膠樹葉中總DNA的方法[J]. 安澤偉,黃華.  植物生理學通訊. 2005(04)

碩士論文
[1]巴西橡膠樹小橡膠粒子蛋白SRPP互作蛋白的研究[D]. 王藝航.海南大學 2018
[2]橡膠樹橡膠延伸因子HbREF3的基因克隆與表達研究[D]. 孫麗娜.海南大學 2016



本文編號:3587170

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