本文關(guān)鍵詞：福建省科委基金，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

血管緊張素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)是已知內(nèi)源性升壓物質(zhì)中作用最強(qiáng)的激素之一，在高血壓發(fā)病中起著重要作用。AngⅡ的絕大多數(shù)生物學(xué)作用是由Ⅰ型受體(AT1R)介導(dǎo)的［1］。1994年Bonnardeaux等［2］發(fā)現(xiàn)在高血壓患者中AT1R基因C1166等位基因頻率高于正常者。目前國(guó)內(nèi)有關(guān)研究不多，樣本數(shù)均較少，結(jié)論不一［3，4］，我們對(duì)福建地區(qū)人群進(jìn)行了研究，報(bào)告如下。

1　對(duì)象與方法

1.1　對(duì)象　均為福建地區(qū)漢族人。其中原發(fā)性高血壓患者120例，來(lái)自本院心內(nèi)科，高血壓按WHO診斷標(biāo)準(zhǔn)，排除冠心病、糖尿病及繼發(fā)性高血壓，高血壓家族史定義為父母或同胞兄弟姐妹中至少有1位患高血壓病。86名正常人來(lái)自健康體檢者，排除高血壓病等。
1.2　方法
1.2.1　測(cè)定部分臨床指標(biāo)　測(cè)定血壓、身高、體重、空腹血糖(Glu)、總膽固醇(TCH)及甘油三酯(TG)濃度。
1.2.2　飽和鹽析法提取基因組DNA。
1.2.3　目的片段擴(kuò)增　PCR引物序列為［5］：上游5′-ATA-ATGTAAGCTCATCCACC；下游5′-GAGATTGCATTTCT-GTCAGT。PCR反應(yīng)總體積30 μl，其中DNA模板約100 ng，dNTP 200 μmol/L,上下游引物各20 pmol,10×緩沖液3 μl,MgCl2 2.0 mmol/L,Taq酶1 U。PCR反應(yīng)設(shè)置為93 ℃預(yù)變性3 min后，93℃變性40 s，55 ℃退火50 s，72 ℃延伸1 min,共35個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸10 min。擴(kuò)增產(chǎn)物用1.7%瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，紫外燈下檢測(cè)。
1.2.4　基因型的判斷　取6 μl PCR產(chǎn)物，DdeⅠ內(nèi)切酶(Promega公司)6U，10×緩沖液1.5 μl,滅菌的去離子雙蒸水6.9 μl,反應(yīng)總體積15 μl.在37℃酶切4 h。產(chǎn)物用2%瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，，紫外燈下檢測(cè)。Marker采用100 bp的DNA 1adder(MBI公司)。
1.2.5　統(tǒng)計(jì)學(xué)分析　用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件處理。正常組與對(duì)照組臨床指標(biāo)的比較采用ANOVA檢驗(yàn)，基因型及基因頻率比較用χ2檢驗(yàn)。

2　結(jié)果

2.1　原發(fā)性高血壓組與正常組臨床指標(biāo)比較　高血壓組除收縮壓、舒張壓顯著高于對(duì)照組，年齡、體重指數(shù)、空腹血糖、TCH、TG兩組間差異無(wú)顯著性，見(jiàn)表1。

表1　臨床各項(xiàng)指標(biāo)在高血壓組和對(duì)照組中的比較

項(xiàng)目 對(duì)照組 原發(fā)性高血壓組

例數(shù) 86 120

年齡(歲) 49.47± 9.59 53.36± 10.12

性別(男/女) 54/ 32 66/ 54

體重指數(shù)(kg/m2) 23.08± 2.74 24.91± 3.22

血糖(mmol/L) 5.02± 0.48 5.08± 0.64

總膽固醇(mmol/L) 4.96± 1.01 5.18± 0.82

甘油三酯(mmol/L) 1.59± 1.05 2.02± 1.04

收縮壓(mmHg) 120.48± 10.36 169.15± 28.36*　*

舒張壓(mmHg) 76.27± 8.44 97.98± 16.15*　*

　　**：與對(duì)照組比較P＜0.01

2.2　EH患者與正常人AT1R基因多態(tài)性比較　共擴(kuò)增成功116例EH患者和86名正常人DNA標(biāo)本。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物為360 bp片段，若擴(kuò)增片段中存在A1166→C堿基替換，則產(chǎn)生DdeⅠ切點(diǎn)，經(jīng)酶切后產(chǎn)生220 bp和140 bp左右的2個(gè)片段，因此AA基因型只有1個(gè)片段，AC基因型有3個(gè)片段，CC基因型有2個(gè)片段。檢測(cè)的所有標(biāo)本中均未發(fā)現(xiàn)CC純合子，見(jiàn)圖1。

圖1　DdelⅠ內(nèi)切酶檢測(cè)的AT1 R基因型

　　高血壓組與正常組AT1R基因型和C1166等位基因頻率比較：EH患者AC基因型頻率顯著高于正常對(duì)照組，P＜0.01；C1166等位基因頻率也高于正常對(duì)照組，P＜0.05。所檢測(cè)的116位EH患者中，73例有高血壓家族史，43例無(wú)高血壓家族史。有家族史EH組AC基因型及C1166等位基因頻率不僅比正常對(duì)照組高，P＜0.01，而且也高于無(wú)家族史EH組，P＜0.05，見(jiàn)表2。
2.3　高血壓組與正常對(duì)照組C1166等位基因頻率比較(性別分組)　女性高血壓患者中C1166等位基因頻率顯著高于女性正常對(duì)照組，P＜0.05；男性高血壓患者與男性正常對(duì)照組間C1166等位頻率差異無(wú)顯著性，見(jiàn)表3。

表2　EH組與對(duì)照組AT1R基因型及等位基因頻率比較

組別 例數(shù) 基因型頻率 等位基因頻率

AA AC CC A C

對(duì)照組 86 81(0.942) 5(0.058) 0 167(0.971) 5(0.029)

EH組 116 95(0.819) 21(0.181)a 0 211(0.909) 21(0.091)b

　無(wú)家族史 43 40(0.930) 3(0.070) 0 83(0.965) 3(0.035)

　有家族史 73 55(0.753) 18(0.247)c,e 0 128(0.877) 18(0.123)d,f

　　a:χ2=6.65,與對(duì)照組比較P＜0.01；b:χ2=6.19,與對(duì)照組比較P＜0.05；c:χ2=11.33,與對(duì)照組比較P＜0.01;d:χ2=10.45,與對(duì)照組比較P＜0.01；e:χ2=5.71,與無(wú)高血壓家族史EH患者比較P＜0.05；f:χ2=5.14,與無(wú)高血壓家族史EH患者比較P＜0.05

表3　等位基因頻率在不同性別EH組和對(duì)照中的分布

等位基因 等位基因頻率

男性 女性

對(duì)照組(n＝54) EH(n＝64) 對(duì)照組(n＝32) EH(n＝52)

A 105(0.972) 120(0.938) 62(0.969) 91(0.875)

C 　　3(0.028) 　　8(0.072) 　2(0.031) 　13(0.125)*

　　* χ2=4.28,與女性對(duì)照組比較P＜0.05

2.4　中國(guó)漢族人與歐洲白人［5］的AT1R各基因型頻率比較　中國(guó)漢族人AC、CC基因型頻率比Bonnardeaux所檢測(cè)的歐洲白人相應(yīng)基因型頻率低，P＜0.01，見(jiàn)表4。

表4　白種人與中國(guó)漢族人AT1R基因型頻率比較

種族 例數(shù) 基因型頻率 χ2 P值

AA AC CC

漢族人 　86 81(0.942) 　　5(0.058) 0

歐洲白人 298 153(0.513) 121(0.406) 24(0.081) 51.84 ＜0.01

3　討論

　　中國(guó)福建漢族人群的研究結(jié)果證明了AT1R基因A1166C多態(tài)性與EH的關(guān)系，高血壓病患者C1166等位基因頻率明顯高于正常人。我們檢測(cè)到的正常漢族人的AC及CC基因型頻率明顯低于Bonnardeaux所檢測(cè)的歐洲白人相應(yīng)基因型頻率，反映了不同種族基因頻率存在差異。
　　我們將EH患者按有無(wú)高血壓病家族史分為兩組進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)有高血壓病家族史的EH患者AC基因型頻率以及C等位基因頻率高于無(wú)家族史的EH患者，這可能與有高血壓病家族史的患者遺傳易感性增高有關(guān)。將EH組按性別分組后，發(fā)現(xiàn)女性EH患者C等位基因頻率高于女性正常對(duì)照組，而男性EH患者與男性正常組間C1166等位基因頻率沒(méi)有差異。這個(gè)結(jié)果同Triet［6］的研究結(jié)論相似，我們認(rèn)為C1166等位基因可能是女性高血壓病的一個(gè)易感基因。
　　我們研究的結(jié)果提示AT1R基因可能是中國(guó)人高血壓病的相關(guān)基因之一

基金資助：福建省科委基金(No.98A061)
作者單位：林從容（350005　福州，福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院福建省高血壓研究所）
吳可貴（350005　福州，福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院福建省高血壓研究所）
謝良地（350005　福州，福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院福建省高血壓研究所）
葉瓊（350005　福州，福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院福建省高血壓研究所）

參考文獻(xiàn)

1，Smith RD.Timmermans PBMWN.Human angiotensin receptor subtypes.Curr Opin Nephrol Hypertens,1994,3∶112-122.
2，Bonnardeaux A,Davies E,Jeunemaitre X,et al.Angiotensin Ⅱ type Ⅰ receptor gene polymorphisms in human essential hypertension.Hypertension,1994,24∶63-69.
3，項(xiàng)坤三，鄭泰山，孫多奇，等.Ⅰ型血管緊張素Ⅱ受體基因多態(tài)性與中國(guó)人冠心病、高血壓及糖尿病的關(guān)系.中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志，1998，15∶9-12.
4，樊紅，李少英，顧維娟，等.血管緊張素Ⅱ的Ⅰ型受體與原發(fā)性高血壓的相關(guān)性研究.中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志，1998，15∶101-103.
5，Katsuya T,Koite G,Yee TW,et al.Association of angiotensinogen T235 variant with increased risk of coronary heart disease.Lancet,1995,345∶1600-1603.
6，Triet L,Blanc H,Ruidavet JB,et al.Gene polymorphisms of the renin angiotensin system in relation to hypertension and parental history of myocardial infarction and stroke:the pegase study.J Hypertens,1998,16∶37-44

  本文關(guān)鍵詞：福建省科委基金，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。