本文關(guān)鍵詞：四川省科委科研基金，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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?９３?

?實驗研究?

黃芪甲苷對人皮膚成纖維細(xì)胞增殖和凋亡的影響

王曦石鈺Ｃ．Ｖｉｅｎｎｅｔ李利Ｐ．Ｈｕｍｂｅｒｔ

探討黃芪甲苷對體外培養(yǎng)的有皺紋、無皺紋中老年人皮膚成纖維細(xì)胞生物學(xué)特性

【摘要】目的

的影響。為黃芪甲苷用于延緩皮膚衰老和皺紋形成提供細(xì)胞水平的客觀依據(jù)，為進(jìn)一步探討皮膚衰老機制和開發(fā)抗衰老護(hù)膚品提供新思路。方法體外培養(yǎng)中年人眼角皺紋與眼角無皺紋皮膚深處成纖維細(xì)胞；老年人面頰皮膚成纖維細(xì)胞。加入不同濃度的黃芪甲苷，干預(yù)２４、７２、１２０ｈ后，檢測黃芪甲苷對這３例皮膚成纖維細(xì)胞系增殖活性、Ｉ型膠原蛋白、Ⅲ型膠原蛋白、彈性蛋白合成和凋亡率的影響。結(jié)果黃芪甲苷在較低濃度（５～２０／－ｇ／ｍ１）時可促進(jìn)皺紋和無皺紋皮膚成纖維細(xì)胞增殖，促進(jìn)皺紋、無皺紋和老年皮膚成纖維細(xì)胞Ｉ型膠原蛋白合成，降低皺紋和無皺紋皮膚成纖維細(xì)胞凋亡率（Ｐ＜Ｏ．０１）。結(jié)論芪甲苷在較低濃度時具有改善皺紋和非皺紋皮膚成纖維細(xì)胞生物學(xué)特性的作用。

【關(guān)鍵詞】黃芪甲苷；

成纖維細(xì)胞；

黃

細(xì)胞培養(yǎng)；增殖；凋亡

Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆａｓｔｒａｇａｌｏｓｉｄｅｗｒｉｎｋｌｅｉｎｖｉｔｒｏ

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［Ａｂｓｔｒａｃｔ］０ｂｊｅｃｔｉｖｅ

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ｍａｎｓｋｉｎｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ（ＨＳＦｂ），ｗｉｔｈａｎｄｗｉｔｈｏｕｔｗｒｉｎｋｌｅ，ｉｎｖｉｔｒｏ，ｔｏｐｒｏｖｉｄｅｃｅｌｌｕｌａｒ１ａｂｏｒａｔｏｒｉａｌｅｖｉｄｅｎｃｅｆｏｒａｐｐｌｙｉｎｇａｓｔｒａｇａｌｏｓｉｄｅｉｎｏｒｄｅｒ

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（Ｐ＜Ｏ．０１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ

［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］

ｏｆｓｋｉｎｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓｗｉｔｈａｎｄｗｉｔｈｏｕｔｗｒｉｎｋｌｅｉｎｖｉｔｒｏ．

Ａｓｔｒａｇａｌｏｓｉｄｅ；

Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ；

Ｃｅｌｌｃｕｌｔｕｒｅ；Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ；

Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ

皮膚成纖維細(xì)胞衰老及生物學(xué)特性改變是導(dǎo)致皮膚老化皺紋出現(xiàn)的重要原因。黃芪為豆科植物膜莢黃芪或內(nèi)蒙黃芪的干燥根，其活性成分具有延緩衰老的作用。黃芪甲苷是黃芪的主要有效單體成分，但關(guān)于黃芪甲苷抗衰老的實驗研究很少，我們通過體外培養(yǎng)人皮膚成纖維細(xì)胞，觀察黃芪甲苷對體

外培養(yǎng)的有皺紋、無皺紋和老年皮膚成纖維細(xì)胞生物學(xué)特性的影響，為黃芪甲苷用于延緩皮膚衰老及皺紋的形成提供實驗依據(jù)。

材料與方法

一、材料

１．主要試劑及設(shè)備：新生小牛血清，ＤＭＥＭ培養(yǎng)液、混合膠原酶（Ｇｉｂｃｃ，美國）；四甲基偶氮唑鹽（ＭＴＴ，Ｓｅｒｖａ公司）；兔抗人工型膠原抗體、兔抗人Ⅲ型膠原抗體、小鼠抗人彈性蛋白抗體、小鼠抗人波形蛋白抗體、即用型ＳＡＢＣ試劑盒，均購自武漢博

士德；細(xì)胞凋亡試劑盒（北京中山）；黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)品

基金項目：四川省科委科研基金資助項目（編號：０２ｓｙ０２９—１４９）作者單位：６１００４１成都，四川大學(xué)華西醫(yī)院皮膚性病科［王曦（Ｅ—ｍａｉｌ：ｘｉｅｒｗａｎｇ＠１２６．ｃｏｒｎ）、石鈺、李利］；ＬａｂｏｒａｔｏｉｒｅｄＩｎｇｅｎｉｅｒｉｅ

ｅｔ

ｄｅ

Ｂｉｏｔｏｇｉｅ

Ｃｕｔａｎｅｅｓ，ＵＦＲＭｅｄｅｃｉｎｅ—Ｐｈａｒｍａｃｉｅ，２５０３０Ｂｅｓａｎｃｏｎ，

Ｆｒａｎｃｅ（Ｃ．Ｖｉｅｎｎｅｔ，，Ｐ．Ｈｕｍｂｅｒｔ）

通訊作者：李利，６１００４１成都，四川Ｉ大學(xué)華西醫(yī)院皮膚性病科

（Ｅ—ｍａｉｌ：ｌｉｅｒｙｉｎｇ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｒｎ）

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（中國藥品生物制品檢定所）；二氧化碳孵箱；ＴＥ２０００一Ｕ倒置生物顯微鏡（Ｎｉｋｏｎ）；流式細(xì)胞儀（Ｃｏｕｌｔｅｒ，美國）。

２．標(biāo)本來源：中年男性眼角皺紋皮膚１例（４７歲），中年男性眼角無皺紋皮膚１例（３９歲），老年男性面頰皮膚１例（７５歲）。均來源于我院皮膚科門診手術(shù)室。

二、方法

１．建立人皮膚成纖維細(xì)胞系：皮膚標(biāo)本用膠原酶消化、分離成纖維細(xì)胞，置ＣＯ。孵箱中培養(yǎng)并傳代，建立３例人皮膚成纖維細(xì)胞系，實驗用３～６代細(xì)胞。

２．制備黃芪甲苷液體：�。埃保琰S芪甲苷溶于

ｌ

ｍｌ二甲基亞砜（ＤＭＳＯ），配成濃度為ｉ００ｍｇ／ｍｌ

的貯存液，臨用時用ＤＭＥＭ培養(yǎng)液倍比稀釋，使其終濃度分別為２０（０．０２％ＤＭＳＯ）、１０（ｏ．０１％ＤＭ—ＳＯ）、５肛ｇ／ｍｌ（０．００５％ＤＭＳＯ，其濃度≤１％時，對細(xì)胞增殖的影響與細(xì)胞對照組比較無差異）。

３．細(xì)胞鑒定：（１）形態(tài)學(xué)觀察：將成纖維細(xì)胞用０．２５％胰酶消化，制成單細(xì)胞懸液，接種于含蓋玻片的６孔板中，置ＣＯ：孵箱培養(yǎng)１～２ｄ，待細(xì)胞長成單層，取出長有細(xì)胞的蓋玻片，９５％乙醇固定，ＨＥ染色，鏡下對比觀察細(xì)胞的形態(tài)特征。（２）免疫組織化學(xué)鑒定：取上述細(xì)胞爬片，９５％乙醇固定，免疫組織化學(xué)測定細(xì)胞工型膠原蛋白、Ⅲ型膠原蛋白，波形蛋白和角蛋白表達(dá)的情況。

４．ＭＴＴ法測成纖維細(xì)胞增殖：制備單細(xì)胞懸液，接種于９６孑Ｌ板上。分別加入黃芪甲苷２０、１０、５肚ｇ／ｍｌ，同時根據(jù)ＤＭＳＯ的濃度做相應(yīng)溶劑對照，每例細(xì)胞的每一藥物濃度孑Ｌ及相應(yīng)溶劑對照孔均做４復(fù)孔。另做１孔不加細(xì)胞，只加培養(yǎng)液和中藥（比色時用此孔調(diào)零）。共做３塊培養(yǎng)板。培養(yǎng)２４、７２、

１２０

ｈ時各取出１塊培養(yǎng)板，ＭＴＴ法檢測各孔光吸

收值（Ａ５７０ｎｍ）。

５．膠原蛋白和彈性蛋白測定：根據(jù)ＭＴＴ法檢測結(jié)果，選擇１個作用最明顯的黃芪甲苷濃度。將細(xì)胞接種于２４孔板中，每例細(xì)胞分２組，１組加黃芪甲苷，濃度１０／，ｇ／ｍｌ，另１組用相應(yīng)濃度的ＤＭ—ＳＯ（０．０１％）作溶劑對照，每組均做３復(fù)孔。共做３塊培養(yǎng)板。培養(yǎng)２４、７２、１２０ｈ時各取出１塊培養(yǎng)板，免疫組織化學(xué)法測工型膠原蛋白、Ⅲ型膠原蛋白和彈性蛋白合成。．

６．細(xì)胞凋亡檢測：依據(jù)ＭＴＴ法檢測結(jié)果，結(jié)合免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果選擇１個作用最明顯的黃芪

甲苷濃度和時間。將細(xì)胞接種于６孔板中。每例細(xì)胞分兩組，１組加入黃芪甲苷，濃度為１０ｕｇ／ｍｌ，另１組用相應(yīng)濃度的ＤＭＳＯ（ｏ．０１％）作溶劑對照，每組１孑Ｌ，共接種２塊板。ＣＯ。培養(yǎng)箱中培養(yǎng)７２ｈ，１

塊板用于流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率，１塊板用于

細(xì)胞凋亡試劑盒檢測細(xì)胞凋亡小體。

７．計算機圖像分析：采用Ｉｍａｇｅ—ＰｒｏＰｌｕｓ專業(yè)圖像分析軟件系統(tǒng)（ＭｅｄｉａＣｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ，美國），對免疫組織化學(xué)標(biāo)本的結(jié)果進(jìn)行定量分析。本實驗選取指標(biāo)為平均吸光度口矗］。

８．統(tǒng)計學(xué)處理：因為每例細(xì)胞的每一藥物濃度孔及相應(yīng)溶劑對照孔均為復(fù)孔，檢測結(jié)果取平均值。用ｔ檢驗比較黃芪甲苷組和ＤＭＳＯ組增殖的

Ａ㈣…蛋白表達(dá)的平均吸光度；７２檢驗分析黃芪甲

苷組和ＤＭＳＯ組的凋亡率。統(tǒng)計處理應(yīng)用ＳＰＳＳｌｌ．０軟件。

結(jié)

果

一、３例皮膚成纖維細(xì)胞系鑒定

ＨＥ染色，光鏡下觀察可見皮膚成纖維細(xì)胞呈多角形或長梭形，胞漿豐富，胞核較大。免疫組織化學(xué)鑒定結(jié)果顯示：３例成纖維細(xì)胞工型膠原蛋白、Ⅲ型膠原蛋白、波形蛋白表達(dá)均為陽性，角蛋白表達(dá)為陰性（圖１～４）。

二、黃芪甲苷對３例皮膚成纖維細(xì)胞系增殖的影響

１．皺紋皮膚成纖維細(xì)胞：黃芪甲苷濃度為２０ｇｇ／ｍｌ，培養(yǎng)２４ｈ細(xì)胞增殖抑制，７２、１２０ｈ細(xì)胞增殖促進(jìn)。黃芪甲苷濃度為１０ｔｔｇ／ｍｌ，培養(yǎng)２４ｈ細(xì)胞增殖與ＤＭＳＯ組比較無差異，７２、１２０ｈ表現(xiàn)為增殖促進(jìn)；黃芪甲苷濃度為５ｕｇ／ｍｌ，培養(yǎng)２４、７２ｈ細(xì)胞增殖與ＤＭＳＯ組比較無差異，１２０ｈ表現(xiàn)為增殖促

進(jìn)。

２．非皺紋皮膚成纖維細(xì)胞：黃芪甲苷濃度為２０ｇｇ／ｍｌ，培養(yǎng)２４ｈ細(xì)胞增殖與ＤＭＳＯ組比較無差

異，７２、１２０ｈ表現(xiàn)為增殖促進(jìn)。黃芪甲苷濃度為１０

ｕｇ／ｍｌ時，培養(yǎng)２４ｈ細(xì)胞增殖與ＤＭＳＯ組比較無

差異，７２、１２０ｈ表現(xiàn)增殖促進(jìn)；黃芪甲苷濃度為５

ｕｇ／ｍｌ，培養(yǎng)２４ｈ細(xì)胞增殖與對照組比較無差異；

７２、１２０

ｈ表現(xiàn)為增殖促進(jìn)。

３．老年成纖維細(xì)胞：該實驗未發(fā)現(xiàn)黃芪甲苷對老年皮膚成纖維細(xì)胞的增殖有影響（Ｐ＞０．０５，表

１）。

根據(jù)上述結(jié)果，黃芪甲苷濃度為２０／，ｇ／ｍｌ時，

史堡醫(yī)堂差堂羞查苤壺！�。�！生！旦筮�。■唧�；翅ｇ！也』叢型壘！墜！墜墾�。∽鴫�！』！堡；！�。。。。。海。�！盟！：；

對皺紋皮膚成纖維細(xì)胞的增殖有一定的抑制作用；黃芪甲苷濃度為５弘ｇ／ｍｌ時，對皺紋皮膚成纖維細(xì)胞的促增殖作用時間較遲；黃芪甲苷濃度為１０ｔｔｇ／ｍｌ時，對皺紋與非皺紋皮膚成纖維細(xì)胞促增殖作用時間一致，均為７２、１２０ｈ。故做免疫組織化學(xué)時，我們選用黃芪甲苷的濃度為１０ｔｕｇ／ｍｌ用于正式實驗。

三、黃芪甲苷對３例皮膚成纖維細(xì)胞系膠原蛋白和彈性蛋白合成的影響

選用黃芪甲苷濃度１０”ｇ／ｍｌ，用免疫組織化學(xué)法分別檢測３例皮膚成纖維細(xì)胞系膠原蛋白（Ｉ型、Ⅲ型）、彈性蛋白的合成（表２，圖５～７）。

１．皺紋皮膚成纖維細(xì)胞：黃芪甲苷作用２４、７２、

１２０

異。黃芪甲苷作用２４ｈ后，細(xì)胞Ｉ型膠原蛋白表達(dá)與ＤＭＳＯ組比較無差異；作用７２、１２０ｈ后，細(xì)胞Ｉ型膠原蛋白表達(dá)增加。黃芪甲苷作用２４、７２、１２０

ｈ

后，細(xì)胞Ⅲ型膠原蛋白表達(dá)與ＤＭＳＯ組比較均無差異。

２．非皺紋皮膚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)２４、７２、１２０

ｈ

后，黃芪組與ＤＭＳ０組比較，細(xì)胞彈性蛋白表達(dá)無差異。培養(yǎng)２４ｈ后，黃芪組細(xì)胞Ｉ型膠原蛋白表達(dá)與ＤＭＳＯ組比較無差異；培養(yǎng)７２、１２０ｈ后，細(xì)胞Ｉ型膠原蛋白表達(dá)增加。培養(yǎng)２４、７２、１２０ｈ后，細(xì)胞Ⅲ型膠原蛋白表達(dá)與ＤＭＳＯ組比較無差異。

３．老年皮膚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)２４、７２、１２０ｈ后，黃芪組與ＤＭＳＯ組比較，細(xì)胞彈性蛋白表達(dá)無差

異。

ｈ后，細(xì)胞彈性蛋白表達(dá)與ＤＭＳＯ組比較無差

表１不同濃度黃芪甲苷對３例皮膚成纖維細(xì)胞系增殖的影響（Ａ。。。，孑±ｓ）

Ｔａｂ

１

Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆａｓｔｒａｇａｌｏｓｉｄｅ

ａｔ

ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｏｓａｇｅｓ

ｏｎ

ｔｈｅｇｒｏｗｔｈ

ａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｔｈｒｅｅｓｋｉｎｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ（Ａ５７０。。，ｚ－－＋－ｓ）

＊示與ＤＭＳＯ組比較Ｐ＜０．０５；＊＊示與ＤＭＳＯ組比較Ｐ＜ｏ．Ｏｌ

表２黃芪甲苷（１０／，ｇ／ｍ１）對３例皮膚成纖維細(xì)胞系蛋白合成的影響（Ａｓ，ｏ。。）

Ｔａｂ２

Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆａｓｔｒａｇａｌｏｓｉｄｅ

ｏｎ

ｐｒｏｔｅｉｎｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｔｈｒｅｅｓｋｉｎｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ（Ａ５７。。）

＊示與ＤＭＳＯ組比較Ｐ＜０．０５；＊＊示與ＤＭＳＯ組比較Ｐ＜０．０１

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Ｉ型膠原蛋白陽性（ＳＡＢＣ染色，×ｉｏｏ）圖２Ⅲ型膠原蛋白陽性（ＳＡＢＣ染色，×１００）圖３波形蛋白陽性（ＳＡＢＣ

染色×１００）圖４角蛋白表達(dá)陰性（ＳＡＢＣ染色，×１００）圖５皺紋皮膚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)１２０ｈ后Ｉ型膠原表達(dá)（ＳＡＢＣ染色，×１００）ａ．黃芪組ｂ．ＤＭＳＯ組圖６無皺紋皮膚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)１２０ｈ后Ｉ型膠原表達(dá)（ＳＡＢＣ染色，×１００）ａ．黃芪組ｂ．ＤＭＳＯ組圖７老年皮膚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)１２０ｈ后Ｉ型膠原的表達(dá)（ＳＡＢＣ染色，×１００）ａ．黃芪組ｂ．ＤＭＳＯ組圖８皺紋皮膚成纖維細(xì)胞內(nèi)的凋亡小體（箭頭所示為凋亡小體，ＴＵＮＥＬ染色，×３００）

圖１

Ｆｉｇ

１

ＩｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｓｔａｉｎｉｎｇｏｆＦｉｇ

３

ｃｏｌｌａｇｅｎｔｙｐｅＩ（ＳＡＢＣ，×１００）．

ｒｅａｃｔｉｏｎ

Ｆｉｇ

２Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ

Ｆｉｇ

４

Ｎｅｇａｔｉｖｅ

ｓｔａｉｎｉｎｇｏｆｃｏｌｌａｇｅｎ

ｔｙｐｅⅢ（ＳＡＢＣ，×１００）．

ＳＡＢＣ，×ｌ００）．

Ｆｉｇ５

Ｐｏｓｔｉｖｅ

ｏｆｖｉｍｅｎｔｉｎ（ＳＡＢＣ，×１００）．Ｉ

ｉｎｓｋｉｎ

ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓｗｉｔｈｗｒｉｎｋｌｅ

ｏｆｃｏｌｌａｇｅｎ

ｒｅａｃｔｉｏｎ

ｏｆｋｅｒａｔｉｎ（

Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

ｏｆｃｏｌｌａｇｅｎｔｙｐｅ

ａｆｔｅｒｃｕｌｔｕｒｅｆｏｒ１２０

ｈｏｕｒｓ（ＳＡＢＣ，×

１００）：ａ．Ｒａｄｉｘａｓｔｒａｇａｌｉｇｒｏｕｐ．ａｆｔｅｒｃｕｌｔｕｒｅｆｏｒｔｙｐｅＦｉｇ８

１２０ｓｋｉｎ

ｂ．ＤＭＳＯｇｒｏｕｐ．Ｆｉｇ６

Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｔｙｐｅ

ＴｉｎｓｋｉｎｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓｗｉｔｈｏｕｔｗｒｉｎｋｌｅＦｉｇ７

Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

ｏｆ

ｃｏｌｌａｇｅｎ、

ｈｏｕｒｓ（ＳＡＢＣ，×１００）：ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ

ｉｎｓｋｉｎ

ａ．Ｒａｄｉｘａｓｔｒａｇａｌｉｇｒｏｕｐ．ｂ．ＤＭＳＯ

ｇｒｏｕｐ．ａｓｔｒａｇａｌｉ

Ｉｉｎｓｅｎｉｏｒａｆｔｅｒｃｕｌｔｕｒｅｆｏｒ１２０ｈｏｕｒｓ（ＳＡＢＣ，×１００）：ａ．Ｒａｄｉｘ

ｂｙ

ｇｒｏｕｐ．ｈ．ＤＭＳＯｇｒｏｕｐ．

Ａｐｏｐｔｏｔｉｃｂｏｄｙ

ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓｗｉｔｈｗｒｉｎｋｌｅ（ｓｈｏｗｅｄａｒｒｏｗｈｅａｄ，ＴＵＮＥＬ，×３００）．

培養(yǎng)２４、７２ｈ后，黃芪組細(xì)胞工型膠原蛋白表達(dá)與ＤＭＳＯ組比較無差異；培養(yǎng)１２０ｈ后，細(xì)胞工型膠原表達(dá)增加。培養(yǎng)２４、７２、１２０ｈ后，細(xì)胞Ⅲ型膠原蛋白表達(dá)與ＤＭＳＯ組比較無差異。黃芪甲苷濃度為

１０

胞系內(nèi)均可見固縮深染的凋亡小體（圖８）。流式細(xì)

胞儀檢測細(xì)胞凋亡率，發(fā)現(xiàn)黃芪』苷濃度為１０

弘ｇ／ｍｌ時，培養(yǎng)１２０ｈ，皺紋皮膚成纖維細(xì)胞凋亡率由６９．２％下降到２６．３％（Ｐ＜ｏ．０１）；非皺紋皮膚成纖維細(xì)胞凋亡率由６７．３％下降到２８．８％（Ｐ％０．０１）；老年皮膚成纖維細(xì)胞凋亡率改變無統(tǒng)計學(xué)意義（Ｐ＞ｏ．０５）。

討

論

ｔｕｇ／ｍｌ時，３例細(xì)胞系在培養(yǎng)１２０ｈ后，均出現(xiàn)增

殖促進(jìn)、工型膠原蛋白合成增加，可以認(rèn)為培養(yǎng)１２０ｈ后黃芪甲苷對細(xì)胞作用明顯，故選用１２０ｈ作為檢測細(xì)胞凋亡的時問點。

四、黃芪甲苷對３例皮膚成纖維細(xì)胞系凋亡的影響

細(xì)胞凋亡試劑盒原位染色，３例皮膚成纖維細(xì)

隨著年齡增長，皮膚逐漸老化，皮膚衰老反映在

細(xì)胞水平即為細(xì)胞衰老。成纖維細(xì)胞是皮膚真皮中

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的主體細(xì)胞成分，它出現(xiàn)不可逆的生長抑制和選擇性、特異性的基因表達(dá)及功能變化，是培養(yǎng)二倍體成纖維細(xì)胞衰老的重要特征［３］。大量研究證明，成纖維細(xì)胞是皺紋形成過程中最主要的效應(yīng)細(xì)胞，其生物學(xué)特性改變包括：細(xì)胞問隙期阻滯Ｈ］，增殖能力降低；膠原蛋白合成降低［５３；表達(dá)的彈性蛋白變性、彈性纖維減少［６３；細(xì)胞凋亡率增加［４１；細(xì)胞表面ＴＧＦ一｜３受體減少［７３；合成抗氧化酶的能力下降凹１；線粒體ＤＮＡ突變ｐ３等。由于衰老皮膚成纖維細(xì)胞出現(xiàn)了一系列生物學(xué)特性改變，人們試圖通過改善其生物學(xué)特性以延緩皮膚衰老和皺紋形成。

黃芪始載于《本經(jīng)》，是古今常用的一種滋補上品。黃芪甲苷為我國有自主知識產(chǎn)權(quán)的一種黃芪皂甙類單體成分，是黃芪制劑中的主要有效成分。現(xiàn)代藥理學(xué)研究證明，黃芪可延長人胎肺二倍體細(xì)胞

的自然衰老過程，使其衰老壽命從原來６１代延長至８８～９８代，１０ｐｔｇ／ｍｌ的黃芪甙可維持小鼠腹腔巨噬細(xì)胞生長達(dá)２０

ｄＬｌ…。有學(xué)者實驗發(fā)現(xiàn)，黃芪甲苷可

抗皮膚表皮細(xì)胞衰老［１“。

本實驗采用膠原酶消化培養(yǎng)法，選用第３～６代皮膚成纖維細(xì)胞，細(xì)胞生物活性已趨穩(wěn)定，且可兼顧其遺傳特性，細(xì)胞數(shù)量也達(dá)到實驗所需口２Ｉ。黃芪皂甲苷最適濃度選擇由１００／ｔｇ／ｍｌ（Ｏ．１％ＤＭＳＯ）倍比稀釋至３．１２５ｐ．ｇ／ｍｌ（０．００３１２５％ＤＭＳＯ），統(tǒng)計結(jié)果顯示，黃芪甲苷濃度為１２．５、６．２５、３．１２５／，ｇ／ｍｌ時，對細(xì)胞增殖的影響與ＤＭＳＯ組、細(xì)胞對照組比較均有促進(jìn)作用；黃芪甲苷濃度為≥２５Ｆｇ／ｍｌ時，對細(xì)胞增殖的影響與ＤＭＳＯ組、細(xì)胞對照組比較均有毒性作用。黃芪甲苷濃度為＜３．１２５“ｇ／ｍｌ時，對細(xì)胞增殖的影響與ＤＭＳＯ組、細(xì)胞對

照組比較均無差異。預(yù)實驗同時顯示，ＤＭＳＯ組與細(xì)胞對照組比較無差異。故正式實驗時選用黃芪甲苷濃度２０、１０、５／－ｇ／ｍｌ。本實驗的結(jié)果顯示，黃芪甲苷在較低濃度（５～２０Ｆｇ／ｍ１）時，可明顯促進(jìn)非皺紋和皺紋皮膚成纖維細(xì)胞的增殖，濃度在１０ｐｔｇ／ｍｌ時作用最明顯。

皮膚膠原蛋白具有不同的類型，工、Ⅲ型主要分布在皮膚真皮層，以Ｉ型膠原蛋白為主，Ⅲ型膠原蛋白較少。年輕時膠原蛋白含量較豐富，當(dāng)皮膚衰老時，膠原蛋白含量逐漸降低，是皮膚出現(xiàn)皺紋的主要

原因之一。本實驗顯示，黃芪甲苷濃度為１０ｔｔｇ／ｍｌ時，可促進(jìn)皺紋、非皺紋和老年皮膚成纖維細(xì)胞工型膠原蛋白表達(dá)，其中１２０ｈ時作用最明顯。提示一定濃度的黃芪甲苷可以促進(jìn)皮膚膠原蛋白合成，延

緩皺紋的出現(xiàn)，改善皺紋程度。環(huán)境因素引起和促進(jìn)細(xì)胞凋亡發(fā)生，可能是其誘發(fā)皮膚衰老的原因之一，該實驗中黃芪甲苷濃度為１０／ｔｇ／ｍｌ，作用１２０

ｈ

后，皺紋和非皺紋皮膚成纖維細(xì)胞凋亡率均明顯下降（Ｐ＜ｏ．０１）。由此可推測，黃芪甲苷可能通過降低人皮膚成纖維細(xì)胞的凋亡率，延緩皮膚衰老。

參

考文獻(xiàn)

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