為調(diào)查廣東省國(guó)蘭病毒病發(fā)生情況,采用雙抗體夾心-酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(double sandwich enzyme-linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)法對(duì)采集自廣州市、汕頭市和韶關(guān)市蘭花主產(chǎn)區(qū)的53份具有典型病毒病癥狀的國(guó)蘭葉片進(jìn)行檢測(cè),選取35份病葉應(yīng)用RT-PCR技術(shù)對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證,并基于cp基因序列對(duì)檢測(cè)到的病毒進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析。DAS-ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示,53份病葉中有44份檢出病毒,總檢出率為83.02%;其中,有14份僅檢出建蘭花葉病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV),有19份僅檢出齒蘭環(huán)斑病毒(Odontolossum ring spot virus,ORSV),有11份檢出CymMV和ORSV復(fù)合侵染,檢出率分別為26.42%、35.85%和20.75%。RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,35份病葉中有30份檢出病毒,總檢出率為85.71%;其中,有21份僅檢出CymMV,有6份僅檢出ORSV,有4份檢出CymMV和ORSV復(fù)合侵染,檢出率分別為60.00%、17.14%和11.43%,但未檢測(cè)到其它病毒。...

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圖1采集的疑似感染病毒病國(guó)蘭代表性葉片

供試植物：本氏煙草Nicotianabenthamiana由本實(shí)驗(yàn)室保存并提供，于16h光照（25℃）/8h黑暗（20℃）、相對(duì)濕度50%～80%的培養(yǎng)室中培養(yǎng)。健康的無病毒國(guó)蘭葉片采集自廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院環(huán)境園藝研究所蘭花種質(zhì)資源圃組培脫毒苗。試劑：DAS-ELISA試劑盒....

圖3基于CP氨基酸序列以鄰接法構(gòu)建CymMV各分離物的系統(tǒng)進(jìn)化樹

系統(tǒng)進(jìn)化分析顯示，35個(gè)CymMV分離物可聚類為3個(gè)類群Ⅲ、Ⅲ和Ⅲ（圖3）。類群Ⅲ又可分為亞群A和B，本研究獲得的CymMV分離物ZC29與新加坡、日本、韓國(guó)、印度和中國(guó)的CymMV分離物聚類于亞群A；另外4個(gè)CymMV分離物ZC17、ZC23、GZV013和GZV015的親緣關(guān)....

圖2廣東省國(guó)蘭病樣中CymMV和ORSV的RT-PCR檢測(cè)結(jié)果

選取35份疑似病樣進(jìn)行CymMV、ORSV、CMV、CaCV和BaRMV的RT-PCR檢測(cè)，結(jié)果顯示，除CymMV和ORSV外，未檢測(cè)到其它病毒。35份樣品中擴(kuò)增出與CymMV目標(biāo)片段一致的780bp特異性條帶的樣品有25個(gè)，包括ST-6、ZC-30、ZC-29、ZC-28、Z....

圖4基于CP氨基酸序列以鄰接法構(gòu)建ORSV各分離物的系統(tǒng)進(jìn)化樹

系統(tǒng)進(jìn)化分析結(jié)果顯示，43個(gè)ORSV分離物可聚類為2個(gè)類群Ⅲ和Ⅲ（圖4）。本研究的6個(gè)ORSV分離物WY002、GZV009、GZV005、GZV006、WY003和ZC005與來自中國(guó)、韓國(guó)、印度尼西亞和德國(guó)等國(guó)家的ORSV分離物被聚類在Ⅲ類群，且Ⅲ類群中ORSV分離物的寄主包....

本文編號(hào)：3906570