【目的】研究運用基于高通量測序的技術檢測梨樹病毒,為梨樹病毒的檢測提供新方法�！痉椒ā坑�2014年、2017年、2018年4月中旬采集庫爾勒香梨花朵若干,分別進行轉(zhuǎn)錄組測序,將得到的序列經(jīng)過轉(zhuǎn)錄本拼接、層次聚類和基因功能注釋,篩選出注釋為植物病毒的序列作為候選病毒序列。利用RT-PCR方法檢測隨機采集的香梨枝條樣品,驗證高通量測序結(jié)果的可靠性。【結(jié)果】根據(jù)3組轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)的生物信息學分析結(jié)果,分別對注釋為來源于植物病毒的66、202和921條基因序列進行分析。3種梨樹中已報道的病毒,分別是蘋果莖痘病毒、蘋果莖溝病毒和蘋果褪綠葉斑病毒,以及梨樹中未報道的蕓薹黃化病毒。采用設計的特異性引物,通過RT-PCR技術對篩選出的4種病毒進行擴增驗證,結(jié)果擴增出蘋果莖痘病毒和蘋果莖溝病毒的目的片段。【結(jié)論】高通量測序技術可作為檢測梨樹病毒的一種快速、有效手段。

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圖1RT-PCR擴增的電泳圖

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