[目的]建立解淀粉芽孢桿菌TF28特異性活菌分子定量技術。[方法]基于TF28特有基因設計q PCR引物,建立菌株特異性q PCR技術;優(yōu)化PMA處理條件,建立PMA-q PCR定量TF28活菌技術,對其特異性、靈敏性與可靠性進行檢測。[結果]建立的q PCR技術對菌株TF28具有特異性。優(yōu)化的PMA處理條件為:PMA終濃度150μmol/L、暗培養(yǎng)10 min、光照20 min,在此條件下,可封閉106cfu/m L以下死菌基因組DNA;建立的PMA-q PCR技術特異性強,靈敏度高,最低檢測限102cfu/m L;線性關系好,R2=0.997;在菌濃度103cfu/m L～107cfu/m L范圍內(nèi)重復性好,CT值變異系數(shù)小于2%,與平板活菌計數(shù)比較,差異不顯著。[結論]建立的PMA-q PCR技術對TF28具有特異性,能夠對菌濃度103cfu/m L～107cfu/m L活菌進行定量。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 實驗材料
        1.1.2 試劑
        1.1.3 儀器
        1.1.4 培養(yǎng)基
    1.2 方法
        1.2.1 引物設計及特異性檢測
        1.2.2 常規(guī)PCR和q PCR方法的建立
        1.2.3 PMA處理條件優(yōu)化
        1.2.4 PMA-q PCR靈敏性與穩(wěn)定性及與平板計數(shù)法的比較
        1.2.5 數(shù)據(jù)處理
2 結果與分析
    2.1 引物設計與特異性檢測
    2.2 PMA處理條件優(yōu)化
    2.3 PMA-q PCR靈敏性與穩(wěn)定性及其與平板計數(shù)法的比較
3 討論
4 結論



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