發(fā)布時間：2022-01-08 04:47

　　甘藍夜蛾核型多角體病毒（Mamestra brassicae multiple nucleopolyhedrovirus,簡稱為MbMNPV）屬于桿狀病毒科,是一株能感染多種鱗翅目害蟲的廣譜病毒,但決定其廣譜性的機制尚不清楚。桿狀病毒DNA解旋酶（helicase）基因除了參與DNA復(fù)制以外,被發(fā)現(xiàn)還具有決定桿狀病毒宿主域的功能。MbMNPV具有兩個DNA解旋酶基因,解旋酶（helicase）和解旋酶2（helicase 2,或hel-2）。為了確定MbMNPV的解旋酶2是否具有擴大病毒宿主域的功能,將該基因在大腸桿菌中進行原核表達,結(jié)果顯示該蛋白只能以包涵體的形式進行表達,并不能形成可溶性表達產(chǎn)物,未來要想檢測該基因是否具有提高病毒宿主域的功能,要進一步優(yōu)化表達條件,使hel-2蛋白能夠可溶性表達。 

【文章來源】：生物化工. 2020,6(03)

【文章頁數(shù)】：4 頁

【部分圖文】：

hel-2基因PCR擴增產(chǎn)物

對該PCR產(chǎn)物和pET28a載體分別用Not I/Xho I進行雙酶切，對酶切后的產(chǎn)物DNA凝膠電泳和切膠回收后，進行酶連轉(zhuǎn)化，對轉(zhuǎn)化平板上的單菌落抽提質(zhì)粒，使用Not I/Xho I進行雙酶切驗證。結(jié)果如圖2所示，載體片段大小和外源目的片段大�。�1 368 bp）與預(yù)期一致，表明hel-2基因片段已經(jīng)連入表達載體pET-28a，將酶連產(chǎn)物送到測序公司進行測序驗證，結(jié)果顯示序列正確無誤。2.2 Hel-2蛋白誘導(dǎo)條件摸索

在誘導(dǎo)溫度37℃、0.4 mmol/L的IPTG濃度下，檢測了不同誘導(dǎo)時間對Hel-2蛋白表達的影響，收集IPTG誘導(dǎo)不同時間的BL21菌體，超聲破碎菌體后分別收集沉淀與上清，使用SDS-PAGE檢測，結(jié)果如圖3所示。誘導(dǎo)后1 h開始，可以在沉淀中檢測到目的蛋白表達，與預(yù)期大小一致，隨著誘導(dǎo)時間的增加，還是只能在沉淀中檢測到目的蛋白表達，而上清液中沒有檢測到目的蛋白表達。為了增加蛋白的可溶性表達，決定嘗試低溫誘導(dǎo)的方式，誘導(dǎo)溫度18℃，誘導(dǎo)時間為16 h，在不同IPTG濃度下進行誘導(dǎo)，收集不同IPTG誘導(dǎo)濃度的菌體，超聲破碎菌體后分別收集沉淀與上清，使用SDS-PAGE檢測，結(jié)果如圖4所示。低溫誘導(dǎo)的Hel-2蛋白還是只在沉淀里表達，在上清里面沒有檢測到目的蛋白，但與37℃誘導(dǎo)條件相比，沉淀中的目的蛋白生成總量有所降低。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]一種用昆蟲病毒研發(fā)高效安全的新型生物農(nóng)藥正在全面推廣——中國科學(xué)院廣譜高效昆蟲桿狀病毒殺蟲劑的研制和應(yīng)用[J]. 張忠信.  科技促進發(fā)展. 2016(01)
[2]家蠶核型多角體病毒多角體的快速提取方法[J]. 李俊,屈達才,邱靖蕓.  廣西蠶業(yè). 2011(01)



本文編號：3575916