【目的】基于香蕉細(xì)菌性枯萎病病原（Ralstonia solanacearum）2號(hào)生理小種的特異保守引物和LAMP技術(shù)建立一種實(shí)時(shí)熒光定性檢測(cè)方法,解決常規(guī)PCR定性檢測(cè)特異性低、靈敏度低、耗時(shí)長(zhǎng)等問(wèn)題,實(shí)現(xiàn)在1 h內(nèi)能進(jìn)行準(zhǔn)確高效的定性檢測(cè),為加強(qiáng)該病害防控檢測(cè)和檢疫工作提供技術(shù)支持�！痉椒ā看_定被測(cè)基因靶序列,利用Primer軟件設(shè)計(jì)兩對(duì)內(nèi)外引物。由兩對(duì)引物、具有鏈置換特性的DNA聚合酶、模板DNA、甜菜堿、Mg₂SO₄、反應(yīng)緩沖液、熒光染料等組成LAMP反應(yīng)體系,采用不必在反應(yīng)完開管蓋檢測(cè)的實(shí)時(shí)熒光LAMP方法,針對(duì)該方法對(duì)于樣品DNA定性檢測(cè)的靈敏度、特異性及可重復(fù)性進(jìn)行試驗(yàn)。【結(jié)果】設(shè)計(jì)的引物能順利擴(kuò)增目標(biāo)基因,實(shí)時(shí)熒光LAMP檢測(cè)體系對(duì)于香蕉細(xì)菌性枯萎病病原生理2號(hào)小種有良好的靈敏度、特異性,該方法可重復(fù)性強(qiáng),靈敏度比普通PCR高10倍以上。【結(jié)論】香蕉細(xì)菌性枯萎病菌熒光LAMP檢測(cè)體系檢測(cè)特異性強(qiáng)、靈敏度高、耗時(shí)短、不易污染,效果較好。 

【文章來(lái)源】：廣東農(nóng)業(yè)科學(xué). 2020,47(05)

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【部分圖文】：

實(shí)時(shí)熒光LAMP對(duì)RS2及其近似種特異性檢測(cè)結(jié)果

重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果(圖3)表明,除陰性對(duì)照與空白對(duì)照外,樣品組4個(gè)重復(fù)實(shí)驗(yàn)體系的檢測(cè)結(jié)果都能出現(xiàn)“S”型曲線,說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)所建立的方法對(duì)RS2的DNA檢測(cè)具有較高的重復(fù)性,結(jié)果穩(wěn)定性好,實(shí)驗(yàn)方法可靠。圖3 實(shí)時(shí)熒光LAMP對(duì)RS2重復(fù)性檢測(cè)結(jié)果

實(shí)時(shí)熒光LAMP對(duì)RS2重復(fù)性檢測(cè)結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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