發(fā)布時(shí)間：2024-03-23 03:45

　　【目的】為優(yōu)選酶法制備牛骨膠原蛋白肽的工藝條件,明確堿性蛋白酶制備骨膠原蛋白肽在不同分子量大小下的抗氧化活性.【方法】以牛骨為原料,以肽提取率為指標(biāo),采用木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶、胰蛋白酶篩選骨膠原蛋白肽制備過程中酶解效果最優(yōu)的酶,通過單因素和響應(yīng)面試驗(yàn)對(duì)酶添加量、酶解時(shí)間、pH值和酶解溫度進(jìn)行優(yōu)化.采用超濾法按分子量大小進(jìn)行分離分段,通過還原力、2,2-聯(lián)苯基-1-苦基肼基(2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl,DPPH)自由基、超氧陰離子自由基、羥自由基清除率測定評(píng)價(jià)各組分肽的抗氧化活性.【結(jié)果】制備牛骨膠原蛋白肽酶解效果最優(yōu)的酶為堿性蛋白酶,其最佳酶解工藝為酶添加量3.0%、酶解時(shí)間5.0 h、pH值9.0、酶解溫度50.4℃,在此條件下肽提取率為12.45%.通過超濾得到3種不同分子量的肽組分,即組分Ⅰ(M>10 ku)、組分Ⅱ(10 ku<M<3 ku)和組分Ⅲ(M<3 ku),分子量越小的組分抗氧化活性越強(qiáng),且各組分的抗氧化性與質(zhì)量濃度呈劑量-效應(yīng)關(guān)系.【結(jié)論】研究結(jié)果為牛骨膠原蛋白肽制備及抗氧化組分利用提供了依據(jù).

【文章頁數(shù)】：10 頁

【部分圖文】：

圖1各蛋白酶酶解效果比較

由圖1可知,不同蛋白酶對(duì)骨膠原蛋白的酶解效果差異顯著,這可能由于不同蛋白酶作用位點(diǎn)不同.經(jīng)過方差顯著性分析表明,在相同酶濃度和相同酶活力條件下,堿性蛋白酶的多肽提取率均較高.因此認(rèn)為,堿性蛋白酶為骨膠原蛋白肽制備過程中酶解效果最優(yōu)的酶.2.2單因素試驗(yàn)結(jié)果

圖2單因素試驗(yàn)結(jié)果

圖2-D表明,當(dāng)溫度在30～45℃范圍,多肽提取率隨溫度的上升而增大(P<0.05),在50℃時(shí)達(dá)最大值11.71%之后;隨著溫度的逐漸升高,多肽提取率開始下降.這可能是由于溫度升高使酶發(fā)生了部分變性,從而抑制了反應(yīng)的進(jìn)行.2.3響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果

圖3不同分子量對(duì)DPPH自由基清除能力的影響

由圖3可知,所有組分清除DPPH自由基的能力隨著各自濃度的升高而增強(qiáng).在濃度為5mg/mL時(shí),DPPH自由基抑制順序?yàn)?組分Ⅲ>組分Ⅱ>組分Ⅰ>酶解液,清除率分別為(48.90±1.73)%,(44.99±1.47)%,(38.56±1.59)%和(25.52±1.19)%.結(jié)....

圖4不同分子量對(duì)超氧陰離子自由基清除能力的影響

超氧陰離子是人體內(nèi)產(chǎn)生的一種活性氧自由基,過多的超氧陰離子將會(huì)損傷細(xì)胞、破壞人類機(jī)體生理功能[20].由圖5可見,超氧陰離子的清除能力隨著濃度的升高而增大,與其他抗氧化指標(biāo)相同,在組分Ⅲ(M<3ku)時(shí)具有最好清除效果.結(jié)果表明,水解產(chǎn)物分級(jí)的超氧陰離子清除率值明顯高于原始酶解....

本文編號(hào)：3935407