節(jié)球藻毒素是泡沫節(jié)球藻的次級代謝產(chǎn)物,廣泛分布于藍藻水華爆發(fā)水域,能損害魚類免疫系統(tǒng),影響魚類正常的生理機能,對魚類生存造成危害。本研究選用藻食性鯉科鯽魚(Carassius auratus)為材料,采用離體細胞培養(yǎng)體外誘導(dǎo)方法,通過流式細胞儀凋亡率測定、共聚焦激光顯微鏡和透射電鏡細胞結(jié)構(gòu)觀察、瓊脂糖凝膠電泳DNA-Ladder檢測技術(shù)研究節(jié)球藻毒素對魚體免疫細胞的毒效應(yīng)。在此基礎(chǔ)上,深入研究了節(jié)球藻毒素對鯽魚淋巴細胞毒性的分子機理。 共聚焦激光顯微鏡實驗結(jié)果表明,空白組細胞核質(zhì)呈現(xiàn)出均勻的熒光,節(jié)球藻毒素誘導(dǎo)組的細胞則表現(xiàn)為顆粒狀熒光碎片。透射電鏡實驗結(jié)果展示了節(jié)球藻毒素暴露后的鯽魚淋巴細胞呈現(xiàn)的典型細胞凋亡形態(tài)學(xué)特征,處理組細胞漿內(nèi)空泡增多,細胞胞質(zhì)濃縮,胞核染色質(zhì)發(fā)生凝集等現(xiàn)象,對照組細胞則表現(xiàn)為細胞形態(tài)規(guī)則,核染色質(zhì)分布均勻。瓊脂糖凝膠電泳實驗和流式細胞儀檢測結(jié)果均顯·示,節(jié)球藻毒素可誘導(dǎo)細胞DNA片段化,分別出現(xiàn)典型的細胞凋亡特征DNA-Ladder和亞二倍體峰；1、5、10、100μg/L節(jié)球藻毒素處理12h后,淋巴細胞凋亡率分別達到15.76%、17.36%、20.34%...

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
插圖和附表清單
目錄
第一章 藻毒素對魚的毒效應(yīng)研究進展
    1.1 藻毒素的污染化學(xué)特征
    1.2 藻毒素對魚類的生態(tài)毒效應(yīng)
        1.2.1 肝腎毒性
        1.2.2 免疫毒性
        1.2.3 發(fā)育生殖毒性
        1.2.4 遺傳毒性
    1.3 天然抗氧化劑介導(dǎo)的解毒機理研究
        1.3.1 藻毒素介導(dǎo)的細胞氧化應(yīng)激作用
        1.3.2 槲皮素
        1.3.3 原花青素
        1.3.4 表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)
    1.4 本文研究目標和研究思路
        1.4.1 研究目標
        1.4.2 研究思路
第二章 節(jié)球藻毒素誘導(dǎo)鯽魚淋巴細胞的凋亡毒效應(yīng)研究
    2.1 前言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 試劑和毒素
        2.2.2 試驗魚種
        2.2.3 試驗儀器
        2.2.4 淋巴細胞分離與誘導(dǎo)
        2.2.5 流式細胞儀檢測細胞凋亡率
        2.2.6 共聚焦激光顯微鏡觀察細胞凋亡
        2.2.7 透射電鏡觀察細胞凋亡
        2.2.8 DNA-Ladder檢測細胞凋亡
        2.2.9 數(shù)據(jù)分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 節(jié)球藻毒素誘導(dǎo)鯽魚淋巴細胞凋亡流式細胞儀檢測
        2.3.2 節(jié)球藻毒素誘導(dǎo)鯽魚淋巴細胞凋亡共聚焦激光顯微鏡觀察
        2.3.3 節(jié)球藻毒素誘導(dǎo)鯽魚淋巴細胞凋亡透射電鏡觀察
        2.3.4 節(jié)球藻毒素誘導(dǎo)鯽魚淋巴細胞凋亡DNA-Ladder檢測
    2.4 討論
    2.5 結(jié)論
第三章 節(jié)球藻毒素誘導(dǎo)鯽魚淋巴細胞凋亡的分子機理研究
    3.1 前言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 試劑和毒素
        3.2.2 試驗魚種
        3.2.3 試驗儀器
        3.2.4 淋巴細胞分離與誘導(dǎo)
        3.2.5 流式細胞儀檢測胞內(nèi)鈣離子變化規(guī)律
        3.2.6 流式細胞儀檢測胞內(nèi)ROS變化規(guī)律
        3.2.7 流式細胞儀檢測線粒體膜電位變化規(guī)律
        3.2.8 Caspase3/8/9活性測定
        3.2.9 Bax/Bcl-2基因表達測定
        3.2.10 Bax/Bcl-2蛋白表達測定
        3.2.12 數(shù)據(jù)分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 節(jié)球藻毒素對鯽魚淋巴細胞內(nèi)鈣離子的影響
        3.3.2 節(jié)球藻毒素對鯽魚淋巴細胞內(nèi)ROS的影響
        3.3.3 節(jié)球藻毒素對鯽魚淋巴細胞線粒體膜電位的影響
        3.3.4 節(jié)球藻毒素對鯽魚淋巴細胞內(nèi)Caspase-3/8/9活性的影響
        3.3.5 節(jié)球藻毒素對鯽魚淋巴細胞內(nèi)Bax/Bcl-2基因表達影響
        3.3.6 節(jié)球藻毒素對鯽魚淋巴細胞內(nèi)Bax/Bcl-2蛋白表達影響
    3.4 討論
    3.5 結(jié)論
第四章 EGCG對節(jié)球藻毒素誘導(dǎo)鯽魚淋巴細胞毒性的抑制作用研究
    4.1 前言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 試劑和毒素
        4.2.2 試驗魚種
        4.2.3 試驗儀器
        4.2.4 淋巴細胞分離與誘導(dǎo)
        4.2.5 流式細胞儀檢測胞內(nèi)ROS變化規(guī)律
        4.2.6 超氧化物歧化酶(SOD)WST-1法測定
        4.2.7 過氧化氫酶(CAT)活性測定
        4.2.8 微量還原型谷胱甘肽(GSH)測定
        4.2.9 微量丙二醛(MDA)測定試劑盒
        4.2.10 數(shù)據(jù)分析
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 EGCG對節(jié)球藻毒素誘導(dǎo)的鯽魚淋巴細胞內(nèi)ROS含量影響
        4.3.2 EGCG對節(jié)球藻毒素誘導(dǎo)的鯽魚淋巴細胞內(nèi)SOD活性影響
        4.3.3 EGCG對節(jié)球藻毒素誘導(dǎo)的鯽魚淋巴細胞內(nèi)CAT活性影響
        4.3.4 EGCG對節(jié)球藻毒素誘導(dǎo)的鯽魚淋巴細胞內(nèi)GSH含量影響
        4.3.5 EGCG對節(jié)球藻毒素誘導(dǎo)的鯽魚淋巴細胞內(nèi)MDA水平影響
    4.4 討論
    4.5 結(jié)論
第五章 EGCG對節(jié)球藻毒素誘導(dǎo)鯽魚淋巴細胞凋亡的抑制機理研究
    5.1 前言
    5.2 材料與方法
        5.2.1 試劑和毒素
        5.2.2 試驗魚種
        5.2.3 試驗儀器
        5.2.4 淋巴細胞分離與誘導(dǎo)
        5.2.5 流式細胞儀檢測線粒體膜電位變化規(guī)律
        5.2.6 流式細胞儀檢測細胞凋亡率
        5.2.7 Westem blot蛋白表達測定
        5.2.8 數(shù)據(jù)分析
    5.3 結(jié)果
        5.3.1 EGCG對節(jié)球藻毒素誘導(dǎo)的鯽魚淋巴細胞線粒體膜電位的影響
        5.3.2 EGCG對節(jié)球藻毒素誘導(dǎo)的鯽魚淋巴細胞凋亡率的影響
        5.3.3 EGCG對節(jié)球藻毒素誘導(dǎo)的鯽魚淋巴細胞內(nèi)bax/bcl-2蛋白表達的影響
        5.3.4 EGCG對節(jié)球藻毒素誘導(dǎo)的鯽魚淋巴細胞內(nèi)Caspase-3蛋白表達的影響
    5.4 討論
    5.5 結(jié)論
第六章 研究結(jié)論、創(chuàng)新點與展望
    6.1 研究結(jié)論
    6.2 創(chuàng)新點
    6.3 展望
參考文獻
作者簡歷



本文編號：3885051