本文選題：禽流感病毒　切入點(diǎn)：H7N9　出處：《華南農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：H7N9亞型流感感染病例于2013年2月19日在中國首次出現(xiàn),至今為止人感染H7N9亞型流感病毒出現(xiàn)了三波疫情,不僅給人們健康帶來威脅,也為我國養(yǎng)禽業(yè)造成了的巨大經(jīng)濟(jì)損失(WHO,2015),因此對(duì)H7N9亞型流感病毒的遺傳進(jìn)化關(guān)系及致病性進(jìn)行研究具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。為了解家禽H7N9亞型流感病毒的流行情況,本研究于2013年至2015年采集了8770個(gè)家禽拭子和環(huán)境樣品,共分離鑒定出28株H7N9亞型流感病毒,總分離率為0.32%。其中鴨源2株,環(huán)境2株,雞源24株;來自江蘇省的毒株2株,廣西的毒株1株,其它26株均分離自廣東�；钋萁灰资袌�(chǎng)24株,養(yǎng)殖場(chǎng)4株。為研究H7N9亞型流感病毒的遺傳進(jìn)化關(guān)系,本研究以禽源的28株病毒和人源的1株病毒作為研究對(duì)象,分析了毒株的遺傳演化規(guī)律。研究發(fā)現(xiàn),第三波疫情中的14株H7N9亞型流感病毒的HA和NA基因均由第二波疫情中的病毒進(jìn)化而來,且形成了兩個(gè)進(jìn)化分支,劃分為W3-a和W3-b分支,W3-a中的毒株主要分離自廣東東莞、廣州和惠州,該分支中的毒株和廣東、香港和廣西人源毒株位于同一進(jìn)化分支,具有較近的親緣關(guān)系,推測(cè)由第二波疫情中的本地毒株進(jìn)化而來。W3-b中的毒株主要分離自潮州和汕尾,該分支中的毒株與新疆、福建、貴州、江蘇人源或環(huán)境中的毒株在相同分支,具有較近的親緣關(guān)系,推測(cè)本分支的毒株完成了通過野鳥或人員流動(dòng)或家禽跨省調(diào)運(yùn)的傳播過程。第三波疫情中14株病毒的內(nèi)部基因分析結(jié)果表明,H7N9亞型流感病毒的內(nèi)部基因發(fā)生著進(jìn)化和重組,個(gè)別毒株發(fā)生了多元重組。對(duì)29株H7N9病毒基因主要氨基酸位點(diǎn)的分析結(jié)果表明,人源毒株GH074/2013在PB2基因編碼蛋白的第627個(gè)氨基酸位點(diǎn)為K,禽源毒株G1/2013在HA基因編碼蛋白的第227個(gè)氨基酸位點(diǎn)為Q,其它毒株均具有氨基酸位點(diǎn)PB2-627E、PB2-701D、HA-226L(H3 numbering)、NA-289R(N9 numbering)、M2-31N和HA裂解位點(diǎn)PEIPKGRG。三波疫情中H7N9亞型流感病毒的主要氨基酸位點(diǎn)并無顯著差異。為了了解H7N9病毒對(duì)雞的致病性情況,本研究選取了4株H7N9病毒做對(duì)SPF雞的致病性實(shí)驗(yàn)。研究結(jié)果表明,4株H7N9病毒對(duì)雞的致病力都很弱,感染4周齡SPF雞后,所有雞均未呈現(xiàn)明顯的臨床癥狀。僅在攻毒后第4d,G1組出現(xiàn)輕微采食量減少,其中有2只雞精神沉郁,但第6d又恢復(fù)正常。H7N9亞型流感病毒可以通過同居方式感染其他健康雞。選取的4株H7N9亞型流感病毒表現(xiàn)出不同的組織嗜性和在雞體內(nèi)的復(fù)制能力,G1毒株的組織嗜性和在雞體內(nèi)的復(fù)制能力稍強(qiáng),所有毒株在肺臟組織的復(fù)制能力強(qiáng)。病理切片結(jié)果表明,4株H7N9亞型流感病毒對(duì)雞的致病力弱,內(nèi)臟組織僅出現(xiàn)輕微病變,病變產(chǎn)生的嚴(yán)重程度依次為肺臟腎臟盲腸扁桃體肝臟脾臟。
[Abstract]:The H7N9 subtype influenza infection first appeared in China on February 19, 2013. So far, there have been three waves of human infection with H7N9 subtype influenza virus, which not only poses a threat to people's health. Therefore, it is of great practical significance to study the genetic and evolutionary relationship and pathogenicity of H7N9 subtype influenza virus. In order to understand the epidemic situation of H7N9 subtype influenza virus in poultry, In this study, 8770 poultry swabs and environmental samples were collected from 2013 to 2015, 28 strains of H7N9 subtype influenza virus were isolated and identified, the total isolation rate was 0.322.There were 2 strains of duck, 2 strains of environment, 24 strains of chicken and 2 strains of virus from Jiangsu Province. One strain was isolated from Guangxi, the other 26 strains were isolated from Guangdong, 24 strains in live poultry market and 4 strains in livestock farm. To study the genetic and evolutionary relationship of H7N9 subtype influenza virus, In this study, 28 strains of avian viruses and 1 strain of human viruses were used as research objects, and the genetic evolution of the virus strains was analyzed. The HA and na genes of 14 H7N9 subtype influenza viruses in the third wave were evolved from the viruses in the second wave and formed two evolutionary branches, W3-a and W3-b. The strains of W3-a and W3-b were mainly isolated from Dongguan, Guangdong Province. In Guangzhou and Huizhou, the virulent strains in this branch are closely related to those of Guangdong, Hong Kong and Guangxi, which are located in the same evolutionary branch. It is inferred that the strains from the local strains in the second wave of the epidemic are mainly isolated from Chaozhou and Shanwei, and the strains in this branch are in the same branch as those in Xinjiang, Fujian, Guizhou and Jiangsu. Have close kinship, The results of internal gene analysis of 14 strains of influenza virus in the third wave showed that the internal genes of H7N9 subtype influenza virus had evolved and recombined. The main amino acid loci of 29 strains of H7N9 virus were analyzed. The 627th amino acid locus of PB2 gene encoding protein in human strain GH074/2013 was K. the 227th amino acid locus of HA gene protein of avian strain G1 / 2013 was Q.Amino acid site PB2-627EN PB2-701D HA-226LH3 numbering NA-289RN9 numbering M2-31N and HA cleavage site PEIPKGRGG were found in all other strains. In order to understand the pathogenicity of H7N9 virus to chicken, there is no significant difference in the main amino acid loci of H7N9 subtype influenza virus in the three waves. In this study, four strains of H7N9 virus were selected to test the pathogenicity of SPF chicken. The results showed that the pathogenicity of H7N9 virus was very weak, and 4 weeks old SPF chickens were infected. No obvious clinical symptoms were found in all chickens. There was only a slight decrease in intake in group G 1 on the 4th day after drug attack, and 2 chickens were depressed in spirit. On the 6th day, however, the influenza virus returned to normal. H7N9 subtype influenza virus could infect other healthy chickens through cohabitation. The four strains of H7N9 subtype influenza virus showed different tissue tropism and replication ability in chicken. Sex and the ability to replicate in chickens is slightly stronger, The pathogenicity of the four strains of H7N9 subtype influenza virus to chicken was weak, and the visceral tissue was only slightly damaged. The severity of the lesion was followed by lung, kidney, cecum, tonsil, liver, spleen.
【學(xué)位授予單位】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S852.65

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