本文關(guān)鍵詞：ERCC1表達和p53突變狀態(tài)聯(lián)合預(yù)測HDACi增敏非小細胞肺癌中順鉑療效

  更多相關(guān)文章： HBVcAg-Mage A3融合蛋白 提純 表達 順鉑 組蛋白去乙酰化酶抑制劑 Panobinostat 非小細胞肺癌(NSCLC)細胞株 ERCC1 GOF突變型p53 ERCC1 NSCLC細胞株 順鉑 Panobinostat GOF突變型p53 ERCC1 NSCLC細胞株 順鉑 Panobinos

【摘要】：第一章非小細胞肺癌細胞株對順鉑及順鉑和Panobinostat聯(lián)合用藥的敏感性目的：在8個NSCLC細胞株中,檢測各個細胞株對順鉑以及順鉑和Panobinostat聯(lián)合用藥的敏感性。方法：在8個NSCLC細胞株中,首先通過qPCR和Western檢測ERCC1在各細胞株中的表達水平,然后分別用順鉑和順鉑聯(lián)合組蛋白去乙�；敢种苿�(Panobinostat)處理,通過對細胞生長的測量觀察不同細胞株對順鉑以及聯(lián)合用藥的敏感性。結(jié)果：在8個NSCLC細胞株中,我們檢測到在細胞株A549, HCC827, NCI-H23, NCI-H441和NCI-H1975中,ERCC1勻為低表達；而在另外三個細胞株NCI-H1299, NCI-H2172和PC-14中,ERCC1為高表達。8個細胞株中,除了A549以外的7個細胞株均對順鉑耐藥,與ERCC1的表達水平?jīng)]有顯著的相關(guān)性；而當(dāng)順鉑和組蛋白去乙�；敢种苿㏄anobinostat和順鉑聯(lián)用時,5個ERCC1低表達的細胞株中,4個細胞株均對聯(lián)合用藥敏感性顯著增高,而3個ERCC1高表達細胞株對聯(lián)合用藥仍表現(xiàn)為不敏感。結(jié)論：ERCC1的表達水平對于NSCLC細胞株對順鉑單藥的敏感性的預(yù)測并不明顯；Panobinostat可以增加ERCC1低表達NSCLC細胞株對順鉑的敏感性。第二章ERCC1表達水平和p53狀態(tài)對順鉑和Panobinostat聯(lián)合用藥療效的預(yù)測作用目的：研究NSCLC細胞株中ERCC1表達水平和p53狀態(tài)對順鉑和Panobinostat聯(lián)合用藥的預(yù)測性。方法：在ERCC1高表達的細胞株中進行ERCC1的敲低(Knockdown, KD)實驗,同時選取2個ERCC1低表達細胞株進行ERCC1的過表達來驗證ERCC1對順鉑和Panobinostat聯(lián)合用藥的預(yù)測性。通過敲低功能獲得型(Gain of function, GOF)突變的p53,以及在p53缺失的細胞株中過表達野生型及GOF p53來驗證p53狀態(tài)對順鉑和Panobinostat聯(lián)合用藥的預(yù)測作用。最后在PC-14細胞株中,同時敲低ERCC1及GOF p53,觀察細胞對順鉑和Panobinostat聯(lián)合用藥的敏感性的變化結(jié)果：在ERCC1高表達的細胞株NCI-H1299, NCI-H2172和PC-14中,敲低ERCC1可以增加NCI-H1299和NCI-H2172細胞株對順鉑和Panobinostat聯(lián)合用藥的敏感性。而在ERCC1低表達的細胞株HCC827和NCI-H23中,過表達ERCC1可以降低細胞對聯(lián)合用藥的敏感性。在攜帶GOF突變p53的細胞株NCI-H1975中敲低p53,在攜帶GOF突變p53和ERCC1高表達的PC-14細胞株中同時敲低ERCC1和p53可以增加細胞對聯(lián)合用藥的敏感性,而在野生型p53細胞株A549和HCC827中,則未觀察到該現(xiàn)象；相反的,我們在p53缺失的細胞株NCI-H2172中,過表達野生型p53可以增加細胞對聯(lián)合用藥的敏感性,而過表達GOF突變p53則可以逆轉(zhuǎn)該細胞中ERCC1敲低時細胞對聯(lián)合用藥敏感性的增加。結(jié)論：同時檢測ERCC1的表達水平和p53突變狀態(tài)可以預(yù)測NSCLC細胞株對順鉑和Panobinostat聯(lián)合用藥的敏感性。第三章Panobinostat可以增加順鉑誘導(dǎo)的細胞凋亡目的：進一步探討Panobinostat對順鉑增敏作用的機制,從而深入了解ERCC1和p53預(yù)測NSCLC細胞株對兩藥聯(lián)用的分子生物學(xué)基礎(chǔ)。方法：通過qPCR檢測p21的表達,western blot檢測p53,磷酸化p53,cleaved-PARP的蛋白水平的表達,以及流式細胞儀檢測細胞凋亡水平。結(jié)果：在A549,HCC827和NCI-H23等三個ERCC1低表達以及不攜帶GOF突變型p53的細胞株中,聯(lián)合應(yīng)用Panobinostat較單用順鉑時細胞內(nèi)磷酸化p53,p21和cleaved-PARP表達均顯著升高,流式細胞儀檢測PI/Annexin V顯示細胞凋亡顯著增高；而在攜帶GOF突變型p53的細胞株NCI-H1975和PC-14中,只能檢測到磷酸化p53的增高,而不能檢測到p21,cleaved-PARP等表達增高。在ERCC1低表達的NCI-H1975細胞株中,敲低GOF突變型p53后我們檢測到cleaved-PARP表達增高以及流式細胞儀檢測到凋亡細胞顯著增加；在ERCC1高表達并且攜帶有GOF突變型p53的細胞株P(guān)C-14中,同時敲低ERCC1和GOF突變型p53時,也成功檢測到細胞凋亡的顯著增加。結(jié)論：Panobinostat可以通過增加順鉑誘導(dǎo)的細胞凋亡來增敏順鉑在NSCLC細胞株中的敏感性。實驗?zāi)康模簶?gòu)建pET28a-HBVcAg-Mage A3質(zhì)粒,并進行HBVcAg-Mage A3融合蛋白的表達和提純。實驗方法：構(gòu)建pET28a-HBVcAg-Mage A3質(zhì)粒,摸索HBVcAg-Mage A3融合蛋白的表達條件和純化方法。實驗結(jié)果：pET28a-HBVcAg-Mage A3質(zhì)粒構(gòu)建成功,HBVcAg-Mage A3融合蛋白的誘導(dǎo)表達優(yōu)化后條件為細菌OD值搖至1.3-1.5左右,IPTG濃度1.0mM,10mM葡萄糖和100μg/mL Kan的LB液體培養(yǎng)基,再在23℃下?lián)u床140rpm搖17小時,收菌并在冰上超聲破碎菌體后SDS-page膠證實融合蛋白為內(nèi)涵體,再用鎳柱純化和超濾脫鹽。SDS-Page膠及BCA法測定提純蛋白濃度。
【關(guān)鍵詞】：HBVcAg-Mage A3融合蛋白 提純 表達 順鉑 組蛋白去乙�；敢种苿� Panobinostat 非小細胞肺癌(NSCLC)細胞株 ERCC1 GOF突變型p53 ERCC1 NSCLC細胞株 順鉑 Panobinostat GOF突變型p53 ERCC1 NSCLC細胞株 順鉑 Panobinostat
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 英文縮略詞表6-7
• 第一部分 ERCC1表達和p53突變狀態(tài)聯(lián)合預(yù)測HDACi增敏非小細胞肺癌中順鉑療效7-68
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-15
• 第一章 非小細胞肺癌細胞株對順鉑及順鉑和Panobinostat聯(lián)合用藥的敏感性15-30
• 材料和方法15-18
• 1. 材料15-17
• 2. 方法17-18
• 結(jié)果18-24
• 討論24-26
• 參考文獻26-30
• 第二章 ERCC1表達水平和p53狀態(tài)對順鉑和Panobinostat聯(lián)合用藥療效的預(yù)測作用30-44
• 材料和方法30-34
• 1. 材料30-31
• 2. 方法31-34
• 結(jié)果34-42
• 討論42-43
• 參考文獻43-44
• 第三章 Panobinostat可以促進順鉑誘導(dǎo)的細胞凋亡44-56
• 材料和方法44-47
• 1. 材料44-45
• 2. 方法45-47
• 結(jié)果47-52
• 討論52-54
• 參考文獻54-56
• 全文總結(jié)56-57
• 文獻綜述57-68
• 參考文獻62-68
• 第二部分 博士期間的其它工作HBVcAg-Mage A3融合蛋白的提取和純化68-96
• 中文摘要68
• Abstract68-70
• 前言70-71
• 實驗材料71-75
• 實驗方法75-79
• 實驗結(jié)果79-81
• 結(jié)論81-82
• 文獻綜述82-96
• 參考文獻90-96
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章96-97
• 致謝97

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 蔡敬怡;楊立恒;詹杉杉;;ERCC1缺陷造成的修復(fù)受損與衰老的關(guān)系[J];中國實用醫(yī)藥;2010年22期

2 楊艷;于廷和;;ERCC1與順鉑耐藥的研究進展[J];腫瘤;2007年12期

3 王慧敏;韓寶惠;;核苷酸切除修復(fù)基因ERCC1在肺癌中表達的意義[J];中國腫瘤;2009年08期

4 楊衿記;;ERCC1對接受卡鉑/吉西他濱化療的不可手術(shù)非小細胞肺癌男、女性患者生存期的影響[J];循證醫(yī)學(xué);2009年05期

5 崔同建;陳義乾;戴永美;蔣云林;陳崢;張桂楓;;大腸癌中醫(yī)證型與ERCC1基因多態(tài)性的相關(guān)研究[J];中國中西醫(yī)結(jié)合雜志;2012年05期

6 許英君;劉艷艷;姚志華;褚俊鋒;楊樹軍;;ercc1、rrm1基因在侵襲性非霍奇金淋巴瘤中的表達及臨床意義[J];腫瘤防治研究;2013年05期

7 宋勇;吳穎;申萍;;進展期非小細胞肺癌中ERCC1單核苷酸多態(tài)性與鉑類化療敏感性的Meta分析[J];循證醫(yī)學(xué);2009年02期

8 周憲;;ERCC1單核苷酸多態(tài)性與老年非小細胞肺癌放療療效的相關(guān)性[J];中國老年學(xué)雜志;2014年14期

9 張萌;劉巍;王淑琴;;ERCC1基因在食管癌中的研究進展[J];中國腫瘤;2009年03期

10 馮文;房瑜;楊成喜;;ERCC1在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達及意義[J];腫瘤基礎(chǔ)與臨床;2010年05期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 蔡樝;ERCC1表達和p53突變狀態(tài)聯(lián)合預(yù)測HDACi增敏非小細胞肺癌中順鉑療效[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2015年

2 祁玉娟;青海地區(qū)進展期胃癌ERCC1基因多態(tài)性、蛋白及mRNA表達與FOLFOX4化療的相關(guān)性研究[D];青海大學(xué);2014年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 周憲;ERCC1單核苷酸多態(tài)性與老年局部晚期非小細胞肺癌放療療效及預(yù)后的相關(guān)性研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2014年

2 蘇國蘭;ERCC1蛋白在非霍奇金淋巴瘤組織中的表達及其臨床意義[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2011年

3 陳瑞彬;非小細胞肺癌細胞株中ERCC1基因抑制模型的建立[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2012年

4 何貝;順鉑對人肺腺癌細胞ERCC1表達影響的相關(guān)性研究[D];皖南醫(yī)學(xué)院;2013年

5 江強;非小細胞肺癌ERCC1的檢測及表達與順鉑耐藥的相關(guān)性研究[D];南昌大學(xué);2011年

6 何林;大黃素下調(diào)ERCC1和Rad51對非小細胞肺癌增殖的影響及分子機制[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

7 王艷波;ERCC1在胃癌組織中的表達及其臨床意義[D];大連醫(yī)科大學(xué);2011年

8 劉增福;胃癌組織中ERCC1和TS的表達研究[D];泰山醫(yī)學(xué)院;2009年

9 閻慧娟;DNA修復(fù)基因-MGMT、ERCC1在胃癌及胃癌前病變中表達的意義[D];河南科技大學(xué);2011年

10 張靜;TUBB3、ERCC1和P-gp在卵巢癌中的表達及其臨床意義[D];承德醫(yī)學(xué)院;2014年

，

本文編號：573662