本文關鍵詞：HBV相關肝細胞肝癌診斷標志物的臨床價值探討

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【摘要】：研究背景和目的:肝細胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是世界范圍內(nèi)常見的惡性腫瘤之一,具有早期癥狀不明顯、發(fā)病率高以及預后差等特點,而慢性乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是HCC發(fā)生的最常見的危險因素。HCC的診斷主要依賴于影像學檢查、活檢以及血清學標志物甲胎蛋白(alpha feto-protein,AFP)的水平。但是目前HCC發(fā)生的風險人群數(shù)量龐大,基于當前中國的經(jīng)濟水平還很難普及常規(guī)的影像學檢查,而作為金標準的肝組織活檢是一個有創(chuàng)操作,取樣準確與否和并發(fā)癥發(fā)生風險取決于醫(yī)生的操作水平,并且不能用于顯著肝硬化患者。血清學標志物診斷HCC快速簡便而且成本低廉,然而AFP診斷效能不太滿意,蛋白芯片技術為發(fā)現(xiàn)新的診斷HCC的血清學標志物提供了便利。Wnt信號通路與細胞的增殖、分化、遷移、胚胎發(fā)育以及腫瘤發(fā)生密切相關,在多數(shù)腫瘤中均可發(fā)現(xiàn)Wnt信號通路的激活。Wnt通路分為經(jīng)典的Wnt通路和非經(jīng)典的Wnt通路。磷脂酰肌醇蛋白3(glypican-3,GPC-3)是硫酸肝素蛋白聚糖家族成員之一,該蛋白能與經(jīng)典和非經(jīng)典的Wnt通路作用而上調(diào)該信號通路的表達。許多研究評估了GPC-3診斷HCC的價值,但是各研究之間結論并不一致。分泌卷曲相關蛋白4(secreted frizzled related protein 4,s FRP-4)屬于分泌卷曲相關蛋白家族,該蛋白結構上存在一個潛在的Wnt結合位點,因此也被認為是Wnt通路的調(diào)控因子。研究發(fā)現(xiàn)s FRP-4能夠抑制Wnt信號通路,而且在許多腫瘤中s FRP-4啟動子區(qū)域存在高度甲基化。本研究首先將從循證醫(yī)學角度探討GPC-3在HCC中的診斷價值,并利用芯片篩選出候選的血清學標志物,然后在兩個獨立的臨床人群中進行評估。方法:第一部分:從循證醫(yī)學角度評估GPC-3診斷HCC的價值我們做的是診斷準確性的meta分析。納入的研究的標準為同時測量了研究對象為HCC的血清AFP和GPC-3水平的臨床研究;文獻檢索的范圍為EMBASE、Pubmed、Cochrane圖書館以及中國相關文獻數(shù)據(jù)庫等。入組的研究所提取的數(shù)據(jù)主要有研究的第一作者、國家、發(fā)表時間、病例基線情況、標志物的檢測方法、截斷值以及具體診斷數(shù)據(jù)等。納入研究質(zhì)量的研究根據(jù)的是Cochrane推薦的QUADAS量表,異質(zhì)性探討主要從閾值效應和非閾值效應兩方面進行。第二部分:蛋白質(zhì)芯片對血清學標志物的初篩初篩的16例患者來自于2013年到2014年之間在西南醫(yī)院感染科門診就診的病例,其中HCC患者8例,慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者4例,慢性乙型肝炎肝硬化患者4例。通過包含507個因子的蛋白質(zhì)芯片對16例患者進行篩查,對得到的數(shù)據(jù)進行分析并獲得差異表達的因子。第三部分:候選因子的臨床檢測與驗證我們分別納入了所有2013年3月至2014年2月以及2014年3月至2014年10月在西南醫(yī)院感染科就診且之前未接受抗腫瘤治療的HCC病例以及部分對照,按照時間劃分為兩個獨立人群(測試組和驗證組),使用第二部分得到的差異表達的因子的ELISA試劑盒在測試組中檢測,并于驗證組中驗證在測試組中具有診斷價值的候選標志物,并與AFP診斷HCC的價值最對比。第四部分:候選標志物在肝癌/癌旁組織的免疫組化使用包含30例HCC患者(每位患者均取癌及癌旁組織兩個點)的組織芯片,使用免疫組化檢測候選標志物在癌/癌旁組織的表達,并進行分析。結果:第一部分:GPC-3診斷HCC的循證醫(yī)學研究一共從543條文獻記錄中篩選并入組10篇研究,使用的是隨機效應模型。在10個研究中,GPC-3的合并敏感性和特異性分別為59.2%(95%CI:55.1%-63.1%)和84.8%(95%CI:82.0%-87.3%),DOR為17.988(95%CI:5.361-60.353);AFP的合并敏感性和特異性分別為51.9%(95%CI:47.7%-56.0%)和94.0%(95%CI:92.1%-95.6%),DOR為23.4(95%CI:10.291-53.207);在7個研究中,GPC-3聯(lián)合AFP的合并敏感性和特異性分別為77.3%(95%CI:73.2%-81%)和80.9%(95%CI:77.4%-84%),DOR為21.255(95%CI:8.699-51.932)。第二部分:候選標志物的芯片初篩在507個因子中,首先篩出了1個HCC中低表達的因子CCR-7和兩個HCC中高表達的因子FGF-23和NT-3,經(jīng)過分析剔除一個病例之后,又增加了9個在HCC中高表達的因子:s FRP-4、MIP-3 beta、IL-31 RA、PTX-3、insulysin/IDE、S100A10、MMP-2、P-selectin、IL-2 R alpha和RANK/TNFRSF11A。第三部分:候選標志物的臨床檢測與驗證本研究共檢測了CCR-7、FGF-23、NT-3和s FRP-4四個因子。在測試組中,僅有s FRP-4在HCC與非HCC之間存在顯著性差異(P0.001)。在驗證組中s FRP-4同樣表現(xiàn)出顯著性差異(P0.001)。測試組中s FRP-4和AFP的ROC曲線下面積(area under ROC,AUC)分別為0.847(95%CI:0.788-0.906)和0.857(95%CI:0.788-0.906),聯(lián)合診斷AUC為0.941(95%CI:0.908-0.975)。s FRP-4的敏感性和特異性分別為94%和60.5%(cut-off:46.37ng/m L),AFP的敏感性和特異性分別為75%和84.9%(cut-off:11.3ng/m L),聯(lián)合診斷的敏感性和特異性分別為79.2%和95.3%。驗證組中s FRP-4和AFP的AUC分別為0.891(95%CI:0.839,0.942)和0.850(95%CI:0.781-0.919),聯(lián)合診斷的AUC為0.932(95%CI:0.890-0.975)。s FRP-4的敏感性和特異性分別為78.6%和84.4%(cut-off:61.39ng/m L),AFP的敏感性和特異性分別為71.4%和97.4%(cut-off:13.5ng/m L),聯(lián)合診斷的敏感性和特異性分別為88.6%和89.6%。s FRP-4水平與AFP水平、血糖水平均不相關(P0.05)。第四部分:候選標志物的免疫組化芯片30例60份樣本中,陽性57份,陰性3份,陰性標本均為癌組織。所有患者s FRP-4在癌旁組織的染色均強于癌組織,且s FRP-4的染色有隨著癌細胞分化程度降低而變淡的趨勢。結論:本課題探討了GPC-3與s FRP-4診斷HBV相關HCC的臨床價值:一、GPC-3診斷HCC的價值與AFP相當,GPC-3與AFP聯(lián)合可提高診斷敏感性。二、s FRP-4在HCC人群中表達高于非HCC人群,其診斷HCC的價值與AFP類似,s FRP-4與AFP聯(lián)合可提高HCC診斷效率。三、s FRP-4在癌組織中的表達低于癌旁組織,且表達水平與分化程度有正相關的趨勢。
【關鍵詞】：肝細胞肝癌 血清學標志物 磷脂酰肌醇蛋白3 分泌卷曲相關蛋白4
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 英文摘要7-11
• 中文摘要11-14
• 第一章 前言14-16
• 第二章 GPC-3 對肝癌診斷的循證醫(yī)學研究16-28
• 2.1 方法16-18
• 2.2 結果18-25
• 2.3 討論25-27
• 2.4 小結27-28
• 第三章 候選血清學標志物的初篩28-43
• 3.1 研究對象和方法28-35
• 3.2 結果35-39
• 3.3 討論39-42
• 3.4 小結42-43
• 第四章 候選標志物的臨床大樣本檢測和驗證43-56
• 4.1 研究對象和方法43-45
• 4.2 結果45-52
• 4.3 討論52-55
• 4.4 小結55-56
• 第五章 sFRP-4 在HCC癌/癌旁組織的免疫組織化學染色56-66
• 5.1 研究對象和方法56-60
• 5.2 結果60-64
• 5.3 討論64-65
• 5.4 小結65-66
• 全文總結66-67
• 本研究的創(chuàng)新性和意義67-68
• 本研究的不足和下一步研究計劃68-69
• 參考文獻69-77
• 文獻綜述 HCC的診斷及治療相關進展77-100
• 參考文獻92-100
• 攻讀博士期間發(fā)表的論文100-101
• 致謝101

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 ;Diagnostic value of glypican-3 in serum and liver for primary hepatocellular carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2010年35期

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本文編號：530779