本文關(guān)鍵詞：組蛋白乙酰化介導(dǎo)孕期酒精暴露導(dǎo)致胎鼠心臟發(fā)育相關(guān)基因過表達的機制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分：孕期酒精暴露導(dǎo)致胎鼠組蛋白高乙�；鹦呐K發(fā)育相關(guān)基因過表達目的通過對孕鼠經(jīng)胃管服用酒精構(gòu)建孕期酒精暴露的模型,檢測酒精對乙�；M蛋白H3表達與胎鼠心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4、NKX2.5、 DHAND和EHAND表達及其啟動子區(qū)域乙�；M蛋白H3水平的影響。以此證實孕期酒精暴露可以引起胎鼠心臟組織組蛋白H3高乙�；�,進而引起心臟發(fā)育相關(guān)基因的過表達。方法1)建模：孕鼠在E7.5利用篩選劑量開始灌服56%酒精,在E14.5天收集胎鼠心臟標本,分別提取核蛋白及RNA,編號保存進行下一步實驗。2)分組：分為空白對照組(Blank組),酒精組(Alc組)及陰性對照組(DMSO組)。3)檢測指標及方法：比色法測定孕期酒精暴露后胎鼠心臟組織組蛋白4)乙�；�(HATs)的活性；Western免疫印跡(Western Blotting)法測定其組蛋白H3乙酰化的表達水平;實時熒光定量PCR (RT-Q-PCR)法測定胎鼠心臟的發(fā)育相關(guān)基因GATA4, NKX2.5, DHAND和EHAND表達量,以及染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)及RT-Q-PCR法測定上述的心臟發(fā)育相關(guān)特異基因啟動子區(qū)乙�；M蛋白H3(AcH3)的水平。結(jié)果1)孕期酒精暴露在E14.5時引起HATs酶活性明顯增高(P0.05)。2)A1c組乙�；M蛋白H3水平與Blank組及DMSO組相比,E14.5時表達量分別較兩組顯著升高(P0.05)。3)Alc組心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4, NKX2.5, DHAND和EHAND的mRNA水平與Blank組及DMSO組相比,E14.5時各基因的mRNA表達量分別較兩組顯著升高(P0.05)。4)A1c組心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4, NKX2.5, DHAND和EHAND啟動子區(qū)的AcH3水平與Blank組及DMSO組相比,E14.5時各基因的AcH3水平分別較兩組顯著升高(P0.05)。結(jié)論11孕期酒精暴露引起胎鼠心臟組織HATs酶活性升高。2)孕期酒精暴露致胎鼠心臟組織的組蛋白H3乙酰化水平升高,使AcH3表達增加。3)孕期酒精暴露致胎鼠心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4, NKX2.5, DHAND和EHAND的過表達。4)孕期酒精暴露致胎鼠心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4, NKX2.5, DHAND和EHAND啟動子區(qū)的AcH3的水平顯著增加。第二部分：Curcumin下調(diào)組蛋白乙�；侥孓D(zhuǎn)孕期酒精暴露導(dǎo)致心臟發(fā)育相關(guān)基因過表達目的在孕期酒精暴露的基礎(chǔ)上,給孕鼠同時腹腔注射HATs酶抑制劑Curcumin降低心臟組織的組蛋白H3乙�；�,觀察胎鼠心臟發(fā)育相關(guān)基因的表達水平,探討其能否逆轉(zhuǎn)孕期酒精暴露所引起的組蛋白H3高乙酰化導(dǎo)致的心臟相關(guān)基因的過表達。方法1)建模：孕鼠在E7.5利用篩選劑量開始腹腔注射Curcumin,同日灌服56%酒精,在E14.5天收集胎鼠心臟標本,分別提取核蛋白及RNA,編號保存以進行下一步實驗。2)分組：分為空白對照組(Blank組),酒精組(Alc組),陰性對照組(DMSO組),Curcumin組(Cur組)及Curcumin和酒精組(Alc和Cur組)。3)檢測指標及方法：比色法測定以上各組胎鼠心臟組織HATs酶的活性；Western Blotting法測定其組蛋白H3乙�；谋磉_水平；RT-Q-PCR法測定胎鼠心臟的發(fā)育相關(guān)基因GATA4, NKX2.5, DHAND和EHAND表達量,以及ChIP-RT-Q-PCR法測定上述的心臟發(fā)育相關(guān)基因啟動子區(qū)AcH3的水平。結(jié)果1)Cur組HATs酶活性在E14.5明顯低于各實驗組(P0.05),A1c和Cur組HATs酶活性和Blank組及DMSO組無顯著差異(P0.05)。2)Cur組乙�；M蛋白H3水平E14.5明顯低于各實驗組(P0.05),Alc和Cur組乙酰化組蛋白H3水平和Blank組及DMSO組無顯著差異(P0.05)。3)Cur組心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4, NKX2.5, DHAND和EHAND的mRNA水平明顯低于各實驗組(P0.05),A1c和Cur組心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4, Nkx2.5, DHAND和EHAND的mRNA水平和Blank組及DMSO組無顯著差異(P0.05)。4)Cur組心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4, NKX2.5, DHAND和EHAND啟動子區(qū)的AcH3水平明顯低于各實驗組(P0.05),Alc和Cur組心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4, NKX2.5, DHAND和EHAND啟動子區(qū)的AcH3水平和Blank組及DMSO組無顯著差異(P0.05)。結(jié)論1) Curcumin能夠逆轉(zhuǎn)孕期酒精暴露引起的HATs酶活性升高。2) Curcumin可以逆轉(zhuǎn)孕期酒精暴露引起的組蛋白H3乙�；缴�,致使AcH3表達基本正常。3) Curcumin能夠逆轉(zhuǎn)孕期酒精暴露所導(dǎo)致的基因GATA4, NKX2.5, DHAND和EHAND的過表達,使表達量恢復(fù)到接近正常水平。4) Curcumin可以逆轉(zhuǎn)孕期酒精暴露所致GATA4, NKX2.5, DHAND和EHAND啟動子區(qū)AcH3的高表達。第三部分SAHA上調(diào)組蛋白乙酰化水平加重孕期酒精暴露導(dǎo)致心臟特異發(fā)育相關(guān)基因過表達目的在孕期酒精暴露的基礎(chǔ)上,給孕鼠同時腹腔注射HDACs酶抑制劑SAHA提高心臟組織的組蛋白H3乙�；�,觀察胎鼠心臟相關(guān)發(fā)育相關(guān)基因的表達水平,探討其能否加重孕期酒精暴露所引起的組蛋白H3高乙�；瘜�(dǎo)致的心臟相關(guān)基因的過表達。方法1)建模：孕鼠在E7.5利用篩選劑量開始腹腔注射SAHA,同日灌服56%酒精,在E14.5天收集胎鼠心臟標本,分別提取核蛋白及RNA,編號保存以進行下一步實驗。2)分組：分為空白對照組(Blank組),酒精組(Alc組),陰性對照組(DMSO組),SAHA組及SAHA和酒精組(Alc和SAHA組)。3)檢測指標及方法：比色法測定以上各組胎鼠心臟組織的HATs酶活性；Western Blotting法測定組蛋白H3乙�；谋磉_水平；RT-Q-PCR法測定胎鼠心臟的發(fā)育相關(guān)基因GATA4, NKX2.5, DHAND和EHAND表達量,以及ChIP-RT-Q-PCR法測定上述的心臟發(fā)育相關(guān)基因啟動‘子區(qū)AcH3的水平。結(jié)果1)Alc和SAHA組HATs酶活性在E14.5明顯高于各實驗組(P0.05),SAHA組HATs酶活性和Alc組相比無顯著差異(P0.05)。2)A1 c和SAHA組乙�；M蛋白H3水平E14.5明顯高于各實驗組(P0.05),SAHA組乙酰化組蛋白H3水平和A1c組相比無顯著差異(P0.05)。3)Alc和SAHA組心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4, NKX2.5, DHAND和EHAND的mRNA水平明顯高于各實驗組(P0.05),SAHA組心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4, NKX2.5, DHAND和EHAND的mRNA水平和Alc組相比無顯著差異(P0.05)。4)A1c和SAHA組心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4, NKX2.5, DHAND和EHAND啟動子區(qū)的AcH3水平明顯高于各實驗組(P0.05),SAHA組心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4, NKX2.5, DHAND和EHAND啟動子區(qū)的AcH3水平和Alc組相比無顯著差異(P0.05)。結(jié)論1) SAHA能夠促進孕期酒精暴露引起的HATs酶活性升高。2) SAHA能夠促進孕期酒精暴露引起的組蛋白H3乙�；竭M一步升高,加重AcH3表達基本異常。3) SAHA能夠加重孕期酒精暴露所導(dǎo)致的基因GATA4, NKX2.5, DHAND和EHAND的過表達,其表達量較單純孕期酒精暴露進一步增加。4) SAHA能夠進一步加重孕期酒精暴露所致的基因GATA4, NKX2.5, DHAND和EHAND啟動子區(qū)的AcH3的表達水平,使其啟動子區(qū)的AeH3結(jié)合量明顯增多。第四部分JNK信號通路介導(dǎo)酒精致H9C2心肌細胞組蛋白H3乙�；险{(diào)引起心臟發(fā)育相關(guān)基因過表達目的H9C2心肌細胞在酒精干預(yù)的基礎(chǔ)上,予以JNK信號通路的特異性抑制劑SP600125阻斷其信號傳導(dǎo),觀察其對下游心臟發(fā)育相關(guān)基因及乙酰化水平的影響,探討JNK信號通路是否參與孕期酒精暴露所引起的組蛋白H3高乙�；瘜�(dǎo)致的心臟發(fā)育相關(guān)基因的表達異常,以此驗證JNK信號通路介導(dǎo)酒精暴露引起H9C2細胞組蛋白H3高乙�；瘜�(dǎo)致心臟發(fā)育相關(guān)基因的過表達通路的上游信號。方法1)劑量篩選：根據(jù)實驗室前期研究篩選出的酒精劑量處理H9C2細胞36小時后,加入不同濃度的SP600125阻斷JNK通路,采用MTT法測定各組的細胞生存率,篩選出SP600125的最適劑量。2)分組：分為空白對照組(Blank組),酒精組(Alc組),陰性對照組(DMSO組),SP組及酒精和SP組(A1c和SP組)。3)檢測指標及方法：比色法測定以上各組H9C2細胞的HATs酶活性；Western Blotting法測定其組蛋白H3乙酰化的表達水平；RT-Q-PCR法測定H9C2細胞的心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4, TBX5, DHAND和EHAND表達量,以及ChIP-RT-Q-PCR法測定上述的心臟發(fā)育相關(guān)基因啟動子區(qū)AcH3的水平。結(jié)果1)選用0μM、5μM、7.5μM及10μM SP600125處理H9C2細胞36小時后細胞生存率與對照組沒有差異(P0.05),15μm、20μM及25μM SP600125使細胞生存率降低21.2%、36.8%、50.2%(P0.05)。2)A1c組H9C2細胞的HATs酶活性和乙�；M蛋白H3水平明顯高于各實驗組(K0.05),Alc和SP組的HATs酶活性和乙�；M蛋白H3水平與Blank組、SP組及DMSO組相比無顯著差異(P0.05),SP組的HATs酶活性與Blank組及DMSO組相比無顯著差異(P0.05)。3)Alc組H9C2細胞心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4, DHAND和EHAND的mRNA水平明顯高于各實驗組(P0.05),Alc和SP組心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4, DHAND和EHAND的mRNA水平和Blank組、SP組及DMSO組相比無顯著差異(P0.05)。各組間TBX5的mRNA水平相比無顯著差異(P0.05)。4)Alc組H9C2細胞心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4, DHAND和EHAND啟動子區(qū)的AcH3水平明顯高于各實驗組(P0.05),Alc和SP組心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4, DHAND和EHAND啟動子區(qū)的AcH3水平和Blank組、SP組及DMSO組相比無顯著差異(P0.05)。各組間TBX5啟動子區(qū)的AcH3水平相比無顯著差異(P0.05)。結(jié)論1)SP600125干預(yù)H9C2心肌細胞最適劑量是15μM。2)JNK信號通路參與酒精對H9C2細胞的HATs酶活性和組蛋白H3乙�；降恼{(diào)節(jié)作用。3).INK信號通路參與酒精對H9C2細胞心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4,DHAND和EHAND的mRNA水平調(diào)節(jié)作用。4)JNK信號通路參與酒精對H9C2細胞心臟發(fā)育相關(guān)特異基因GATA4, DHAND和EHAND啟動子區(qū)AcH3表達水平的調(diào)節(jié)作用。
【關(guān)鍵詞】：孕期酒精暴露 HATS酶 組蛋白H3乙酰化 心臟發(fā)育相 關(guān)基因 Curcumin 組蛋白乙酰化酶抑制劑 孕期酒精暴露 心 臟發(fā)育相關(guān)基因 乙�；M蛋白H3 SAHA 組蛋白去乙�；敢种苿� 孕期酒精暴露 心臟 發(fā)育相關(guān)基因 乙酰化組蛋白H3 H9C2細胞 酒精 SP600125 心臟發(fā)育相關(guān)基因 乙�；M蛋白H3
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R714
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照6-9
• 摘要9-18
• 英文摘要18-29
• 前言29-35
• 參考文獻32-35
• 第一部分：孕期酒精暴露致胎鼠組蛋白高�；鹦呐K發(fā)育相關(guān)基因過表達35-73
• 1 材料與方法35-54
• 2 結(jié)果54-67
• 3 討論67-70
• 4 結(jié)論70
• 參考文獻70-73
• 第二部分 Curcumin上調(diào)組蛋白乙酰化水平逆轉(zhuǎn)孕期酒精暴露導(dǎo)致的心臟發(fā)育相關(guān)基因過表達73-88
• 1 材料與方法73-76
• 2 結(jié)果76-83
• 3 討論83-85
• 4 結(jié)論85
• 參考文獻85-88
• 第三部分 SAHA下調(diào)組蛋白乙�；郊又卦衅诰凭┞秾�(dǎo)致心臟發(fā)育相關(guān)基因過表達88-102
• 1 材料與方法88-91
• 2 結(jié)果91-98
• 3 討論98-100
• 4 結(jié)論100
• 參考文獻100-102
• 第四部分 JNK信號通路介導(dǎo)酒精致H9C2心肌細胞組蛋白H3乙�；险{(diào)引起心臟發(fā)育相關(guān)基因過表達102-124
• 1 材料與方法102-110
• 2 結(jié)果110-118
• 3 討論118-120
• 4 結(jié)論120
• 參考文獻120-124
• 全文總結(jié)124-127
• 1 全文小結(jié)124-125
• 2 倒新性與意義125
• 3 局限性125-126
• 4 展望126-127
• 文獻綜述127-145
• 參考文獻142-145
• 致謝145-147
• 攻讀學(xué)位期間論文發(fā)表情況147-148

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 劉蘭英,顧軍,湯建,馬澗泉;人類心臟發(fā)育相關(guān)基因的初步篩選[J];中國病理生理雜志;1999年09期

2 菲琳;;飲食、鍛煉和遺傳因素增強骨骼的作用[J];國外醫(yī)學(xué)情報;1996年02期

3 陸瓊瓊;王娟;趙慶順;李謹;;pitx2基因早期過量表達對斑馬魚牙齒生長發(fā)育相關(guān)基因的影響[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2013年01期

4 ;[J];;年期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 上官凌飛;王晨;曹雪;楊光;王西成;房經(jīng)貴;;葡萄花發(fā)育相關(guān)基因及成花途徑的預(yù)測[A];中國園藝學(xué)會2010年學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2010年

2 鄧宇翔;朱曉彤;王麗娜;王松波;束剛;江青艷;;不同品種雞胚胎期骨骼肌發(fā)育相關(guān)基因的表達模式[A];全國動物生理生化第十一次學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2010年

3 高燕;胡永紅;;牡丹花發(fā)育相關(guān)基因的克隆與分析[A];中國觀賞園藝研究進展2011[C];2011年

4 徐頌周;黃松明;陳榮華;;大鼠腎臟發(fā)育相關(guān)基因差減文庫的構(gòu)建及意義[A];中華醫(yī)學(xué)會第十四次全國兒科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 張維華;組蛋白乙�；閷�(dǎo)孕期酒精暴露導(dǎo)致胎鼠心臟發(fā)育相關(guān)基因過表達的機制[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

2 李繼剛;棉花生殖器官發(fā)育相關(guān)基因的克隆與表達研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2003年

3 魏繼承;白樺花期抑制性消減文庫的構(gòu)建及花發(fā)育相關(guān)基因的克隆[D];東北林業(yè)大學(xué);2006年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張艷琴;重花瓣甘藍型油菜的遺傳和花發(fā)育相關(guān)基因的表達研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

2 楚鷹;纖維發(fā)育相關(guān)基因的SNP研究與棉花蔗糖合酶基因片段的克隆及表達分析[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

3 鐘靈秀;鴨早期胚胎發(fā)育相關(guān)基因消減文庫的構(gòu)建與分析[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

4 李龍云;利用基因芯片技術(shù)篩選棉纖維發(fā)育相關(guān)基因[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2010年

5 周鵬;若干大黃魚性腺發(fā)育相關(guān)基因的克隆與表達[D];集美大學(xué);2009年

6 房棟;棉纖維初始發(fā)育相關(guān)基因及轉(zhuǎn)錄因子的克隆與鑒定[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

7 申艷麗;牛克隆胚發(fā)育相關(guān)基因啟動子區(qū)DNA甲基化模式比較研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

8 黃龍雨;棉纖維發(fā)育相關(guān)基因PI4K、TPS功能標記開發(fā)[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

9 王芹芹;陸地棉（Gossypium hirsutum L.）纖維發(fā)育相關(guān)基因表達譜分析[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

10 尹耐靖;Islet-1促MSCs心肌特化過程中早期發(fā)育相關(guān)基因啟動子區(qū)域DNA甲基化狀態(tài)分析[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2014年

  本文關(guān)鍵詞：組蛋白乙�；閷�(dǎo)孕期酒精暴露導(dǎo)致胎鼠心臟發(fā)育相關(guān)基因過表達的機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：484643