本文關(guān)鍵詞：RPS15A通過AKT調(diào)控細胞周期促進膠質(zhì)母細胞瘤細胞增殖、遷移的體內(nèi)和體外研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：本實驗旨在探究RPS15A基因與膠質(zhì)母細胞瘤細胞的增殖、遷移及成瘤有無相關(guān)性,以及與相關(guān)信號通路和細胞周期調(diào)節(jié)蛋白作用的分子機制,為膠質(zhì)母細胞瘤的診斷和預(yù)后提供一個新的生物學(xué)標志物并為膠質(zhì)母細胞瘤的基因靶向治療提供新思路。方法：采集膠質(zhì)母細胞瘤的臨床腫瘤組織樣本,通過實時定量PCR和Western Blot實驗檢測RPS15A在腫瘤組織和正常腦組織中的表達差異,用免疫組化實驗檢測RPS15A在腫瘤樣本中的表達量;在體外實驗中,我們選用人膠質(zhì)母細胞瘤細胞U87作為實驗細胞,通過慢病毒感染U87細胞建立shRPS15A基因低表達細胞株,用實時定量PCR及Western blot實驗證明慢病毒介導(dǎo)穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株的成功建立；采用MTT實驗檢測PLV-Ctr細胞和敲低RPS15A基因后U87細胞的細胞存活率；用流式細胞儀檢測PLV-Ctr細胞和敲低RPS15A基因后U87細胞的細胞周期,從而觀察RPS15A基因?qū)δz質(zhì)母細胞瘤細胞U87的細胞周期的影響;通過細胞劃痕實驗觀察RPS15A基因?qū)δz質(zhì)母細胞瘤細胞U87遷移情況的影響；通過Boyden小室實驗檢測PLV-Ctr細胞和敲低RPS15A基因后U87細胞中細胞運動情況從而明確RPS15A基因?qū)δz質(zhì)母細胞瘤細胞U87遷移的影響;在體內(nèi)試驗中,通過建立裸鼠種植瘤模型,我們觀測了RPS15A基因?qū)δz質(zhì)母細胞瘤U87細胞裸鼠種植瘤成瘤時間和大小的影響,通過免疫組化實驗檢測RPS15A基因在裸鼠種植瘤的腫瘤組織中的表達情況,進而從病理和組織學(xué)的角度考察RPS15A基因?qū)δz質(zhì)母細胞瘤U87細胞的體內(nèi)成瘤的作用;我們還通過Western blot檢測RPS15A基因?qū)毎芷诘鞍譖18INK4C和CDK4及磷酸化AKT的表達的影響以證實在RPS15A基因與AKT信號通路的關(guān)聯(lián),并通過AKT信號通路的的介導(dǎo)調(diào)控周期蛋白,明確RPS15A基因在膠質(zhì)母細胞瘤中的作用靶點。結(jié)果：在本研究中,我們通過Q-rtPCR和VWestern blot實驗檢測膠質(zhì)母細胞瘤臨床樣本中RPS15A基因的表達,結(jié)果表明相比于正常腦組織,膠質(zhì)母細胞瘤中RPS15A基因的mRNA及蛋白表達增高。同樣的,我們通過免疫組化檢測RPS15A基因在臨床腫瘤樣本中的表達情況,并分別從年齡、性別、組織分型及世界衛(wèi)生組織的分期評價RPS15A基因的表達情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn)當患者年齡大于50歲時,高表達RPS15A基因的例數(shù)為43例,占樣本數(shù)的71.7%,低表達RPS15A基因的例數(shù)為17例,占樣本數(shù)的28.3%；而患者年齡小于50歲時,高表達RPS15A基因的例數(shù)為47例,占樣本數(shù)的74.6%,低表達RPS15A基因的例數(shù)為16例,占樣本數(shù)的25.4%；在男性患者中,高表達RPS15A基因的例數(shù)為32例,占樣本數(shù)的64%,低表達RPS15A基因的例數(shù)為18例,占樣本數(shù)的36%；在女性患者中,高表達RPS15A基因的例數(shù)為58例,占樣本數(shù)的79.5%,低表達RPS15A基因的例數(shù)為15例,占樣本數(shù)的20.5%;在相關(guān)的組織學(xué)類型的調(diào)查中顯示,在星形細胞膠質(zhì)瘤中,高表達RPS15A基因的例數(shù)為9例,占樣本數(shù)的64.3%,低表達RPS15A基因的例數(shù)為5例,占樣本數(shù)的35.7%;在少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤中,高表達RPS15A基因的例數(shù)為6例,占樣本數(shù)的66.7%,低表達RPS15A基因的例數(shù)為3例,占樣本數(shù)的33.3%；在間變星型細胞瘤中,高表達RPS15A基因的例數(shù)為47例,占樣本數(shù)的78.3%,低表達RPS15A基因的例數(shù)為13例,占樣本數(shù)的21.7%；在膠質(zhì)母細胞瘤中,高表達RPS15A基因的例數(shù)為30例,占樣本數(shù)的75%,低表達RPS15A基因的例數(shù)為10例,占樣本數(shù)的25%；在WHO分期為Ⅰ和Ⅱ期的膠質(zhì)細胞瘤中,高表達RPS15A基因的例數(shù)為8例,占樣本數(shù)的34.8%,低表達RPS15A基因的例數(shù)為15例,占樣本數(shù)的65.2%;在WHO分期為Ⅲ和Ⅳ期的膠質(zhì)母細胞瘤中,高表達RPS15A基因的例數(shù)為84例,占樣本數(shù)的84%,低表達RPS15A基因的例數(shù)為16例,占樣本數(shù)的16%。綜上所述,與正常腦組織對比,RPS15A基因的表達量在膠質(zhì)母細胞瘤中明顯增高,并且通過臨床病例的統(tǒng)計發(fā)現(xiàn),在WHO分期Ⅲ和Ⅳ期的膠質(zhì)細胞瘤中,RPS15A基因的表達顯著增高,說明在惡性膠質(zhì)瘤的發(fā)展過程中,RPS15A基因可能扮演著重要的作用。另外,我們發(fā)現(xiàn)膠質(zhì)瘤患者的臨床病理特征和患者預(yù)后情況與RPS15A基因之間的可能存在相關(guān)性,高表達RPS15A基因的患者的預(yù)后相比于低表達RPS15A基因的患者的預(yù)后更差,這更加證明了RPS15A基因可以作為判斷患者預(yù)后的生物標志物之一。體外實驗中,我們首先在U87細胞中建立了由慢病毒介導(dǎo)的sh-RPS15A基因敲低細胞模型,并通過實時定量PCR證明了sh-RPS15A基因敲低細胞模型建立成功；我們通過MTT實驗檢測細胞的存活率,與PLV-Ctr細胞相比,敲低RPS15A基因的U87細胞的存活率明顯增高。我們通過細胞流式技術(shù)對細胞周期和細胞的增殖情況進行檢測,結(jié)果顯示與PLV-CTR組相比,敲低RPS15A基因的U87細胞的細胞周期發(fā)生變化,主要表現(xiàn)為G0/G1期阻滯；在細胞劃痕實驗中,我們發(fā)現(xiàn)與PLV-Ctr細胞相比,敲低RPS15A基因的U87細胞的遷移速度和數(shù)量明顯下降；在Boyden小室實驗中,我們同樣發(fā)現(xiàn)與PLV-Ctr細胞相比,敲低RPS15A基因后U87細胞的遷移速度和數(shù)量明顯下降；體內(nèi)實驗表明,與PLV-Ctr細胞相比,敲低RPS15A基因的U87細胞呈現(xiàn)明顯的細胞增殖抑制,裸鼠荷瘤的體積顯著減小,RPS15A基因表達降低可以顯著減緩腫瘤的成瘤進程；在對機制的探討方面,主要對細胞周期蛋白和AKT信號通路進行了檢測,結(jié)果發(fā)現(xiàn)與PLV-Ctr細胞相比,敲低RPS15A基因的U87細胞中P18INK4C表達增加,而CDK4的表達的明顯減少；與PLV-Ctr細胞相比,敲低RPS15A基因的U87細胞中磷酸化AKT的表達減少,進而說明RPS15A通過對磷酸化AKT的調(diào)控影響U87細胞的體內(nèi)及體外增殖。結(jié)論：RPS15A基因在膠質(zhì)母細胞瘤臨床樣本中表達顯著上調(diào),RPS15A基因可能存在靶基因AKT,即AKT信號通路可能與RPS15A基因在膠質(zhì)母細胞瘤中的癌基因作用相關(guān),下調(diào)RPS15A基因的表達可以抑制磷酸化AKT的活性,抑制U87細胞體外增殖、遷移以及體內(nèi)成瘤,AKT可能是RPS15A基因的作用靶點,我們的研究結(jié)果為膠質(zhì)母細胞瘤的診斷和預(yù)后提供了新的生物學(xué)標志物,并為膠質(zhì)母細胞瘤的基因靶向治療提供了新依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：膠質(zhì)母細胞瘤 RPS15A AKT
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R739.4
【目錄】：

• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-14
• 前言14-17
• 引言17-20
• 材料與方法20-45
• 1. 材料20-27
• 1.1 藥品與試劑20-21
• 1.2 儀器21-23
• 1.3 臨床病例、動物和細胞23
• 1.4 主要溶液的配制23-27
• 2. 實驗方法27-45
• 2.1 細胞培養(yǎng)27-28
• 2.2 病毒感染目的細胞28-34
• 2.3 細胞增殖實驗34
• 2.4 細胞周期實驗34-35
• 2.5 細胞劃痕實驗35-36
• 2.6 細胞遷移實驗36
• 2.7 裸鼠移植模型建立36-37
• 2.8 腫瘤組織病理學(xué)檢測37-38
• 2.9 病理免疫組化38-39
• 2.10 QRT-PCR實驗39-42
• 2.11 Western Blot實驗42-45
• 2.12 數(shù)據(jù)處理45
• 結(jié)果45-56
• 1. RPS15A基因在腫瘤組織中的表達高于正常腦組織45-47
• 2. 膠質(zhì)瘤患者術(shù)后生存時間與RPS15A基因表達密切相關(guān)47-50
• 3. U87細胞Sh-RPS15A穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系驗證50-51
• 4. RPS15A基因?qū)δz質(zhì)母細胞瘤細胞增殖的影響51
• 5. RPS15A基因?qū)δz質(zhì)母細胞瘤細胞遷移的影響51-53
• 6. RPS15A基因?qū)δz質(zhì)母細胞瘤細胞細胞周期的影響53
• 7. RPS15A基因?qū)δz質(zhì)母細胞瘤細胞周期蛋白表達的影響53-54
• 8. RPS15A基因?qū)α姿峄疉KT表達的影響54-55
• 9. RPS15A基因?qū)β闶蠓N植瘤增殖的影響55-56
• 討論56-60
• 結(jié)論60
• 參考文獻60-72
• 綜述72-90
• 參考文獻83-90
• 致謝90

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 徐建X,徐庚;膠質(zhì)母細胞瘤的治療進展[J];神經(jīng)疾病與精神衛(wèi)生;2005年01期

2 張帆;;立體適形放療在治療腦膠質(zhì)母細胞瘤術(shù)后患者的應(yīng)用[J];中國冶金工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志;2007年02期

3 劉向輝;張之營;李鴻源;申斌;;顱內(nèi)膠質(zhì)母細胞瘤的術(shù)前診斷[J];山東醫(yī)藥;2008年36期

4 周及彤;王士杰;周建;;原發(fā)性膠質(zhì)母細胞瘤1例分析[J];中國誤診學(xué)雜志;2008年10期

5 劉維生;肖新如;王碩;;膠質(zhì)母細胞瘤中腦組織特異性血管生成抑制因子1的研究進展[J];國際神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)雜志;2008年01期

6 楊培業(yè);膠質(zhì)母細胞瘤的放射線治療[J];國外醫(yī)學(xué)參考資料.神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)分冊;1976年05期

7 吳超權(quán);膠質(zhì)母細胞瘤放射抵抗的可能解釋[J];國外醫(yī)學(xué)(臨床放射學(xué)分冊);1984年03期

8 周東,馬大程,郭京,黃輝;7例膠質(zhì)母細胞瘤[J];中國腫瘤臨床與康復(fù);1998年S1期

9 白茫茫,張劍寧,章翔;炎性肉芽腫轉(zhuǎn)變?yōu)槟z質(zhì)母細胞瘤1例[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;1999年01期

10 秦德興,墨浩,歐廣飛,宋永文,康恭禮,胡郁華,谷銑之;腦膠質(zhì)母細胞瘤放化療療效觀察[J];中華腫瘤雜志;2001年02期

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1 黃丙倉;耿道穎;紀毅敏;李郁新;朱莉;尹波;鮑奕仿;;膠質(zhì)母細胞瘤磁共振成像的一個重要征象——“絲瓜瓤樣壞死征”[A];中華醫(yī)學(xué)會第16次全國放射學(xué)學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2009年

2 顧金海;李剛;蘇雨行;申杰;李蓉暉;賀峭偉;鄧林;;STAT3 Decoy ODN抑制膠質(zhì)母細胞瘤增殖實驗研究[A];中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)外科學(xué)分會第九次學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

3 秦立森;梁徑山;石瓊;于如同;;膠質(zhì)母細胞瘤中強化與壞死比例與信號傳導(dǎo)相關(guān)性的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)外科學(xué)分會第九次學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

4 熊劍;章翔;程光;林洪;費舟;;Ardipusilloside Ⅰ誘導(dǎo)膠質(zhì)母細胞瘤細胞凋亡的研究[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會第六屆全國代表大會論文匯編[C];2011年

5 張成龍;李康印;郝曉東;陳虎義;高崎煒;強海霞;;兒童多發(fā)膠質(zhì)母細胞瘤一例[A];2005年全國醫(yī)學(xué)影像技術(shù)學(xué)術(shù)會議西部論壇論文匯編[C];2005年

6 顏偉;張偉;游贛;王永志;劉彥偉;楊沛;江濤;;甲基鳥嘌呤甲基轉(zhuǎn)移酶蛋白表達和促進甲基化在中國膠質(zhì)母細胞瘤患者中的臨床關(guān)系[A];2011中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)外科學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

7 江濤;陳寶師;袁芳;李桂林;李少武;邱曉光;王忠誠;;膠質(zhì)母細胞瘤臨床治療經(jīng)驗[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會第二屆全國代表大會論文匯編[C];2007年

8 鄭秀玨;黃欣;李谷;曹飛;龔江標;;膠質(zhì)母細胞瘤術(shù)后同步放化療的臨床分析[A];2009年浙江省神經(jīng)外科學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

9 路翠平;;四十例膠質(zhì)母細胞瘤術(shù)后護理體會[A];2011中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)外科學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

10 賀虎;李明武;牛朝詩;;膠質(zhì)母細胞瘤干細胞能夠分化為內(nèi)皮細胞以促進腫瘤血管生成[A];2011中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)外科學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 匡遠深;治療首次術(shù)后腦膠質(zhì)母細胞瘤 放化療同步優(yōu)于單純放療[N];中國醫(yī)藥報;2008年

2 吳劍鵬;南方醫(yī)院牽手多家醫(yī)院聯(lián)合開展膠質(zhì)母細胞瘤研究[N];科技日報;2014年

3 煒聞;Avastin獲準用于治療膠質(zhì)母細胞瘤[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2009年

4 谷文;FDA批準Avastin 用于治療膠質(zhì)母細胞瘤[N];中國醫(yī)藥報;2009年

5 王小龍;一種化合物可引發(fā)癌細胞“自爆”[N];科技日報;2014年

6 孫行之邋(編譯);抵御腫瘤,疫苗將成為利器[N];第一財經(jīng)日報;2008年

7 Tracy Staton 編譯 石軍;羅氏公開數(shù)據(jù)證“有效”[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2014年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 岳琪;調(diào)節(jié)性T細胞在膠質(zhì)母細胞瘤中的預(yù)后作用及分化機制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

2 陳鑫;CKS2在膠質(zhì)母細胞瘤中的表達及其對腫瘤生物學(xué)行為的影響和機制研究[D];山東大學(xué);2015年

3 呂磊;阿西替尼對膠質(zhì)母細胞瘤及其腫瘤干細胞治療作用的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

4 周濟;NTS/NTR1信號對人膠質(zhì)母細胞瘤干細胞自我更新及侵襲能力的影響及機制[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

5 李紅偉;KAP調(diào)節(jié)ROCK2和Cdk2在RNA激活的膠質(zhì)母細胞瘤侵襲途徑[D];鄭州大學(xué);2014年

6 紀祥軍;Nrf2在人膠質(zhì)母細胞瘤血管生成中的作用研究[D];南京大學(xué);2013年

7 阮健;MicroRNA-181c對膠質(zhì)母細胞瘤的抑制作用及其機制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

8 姚軼群;RPS15A通過AKT調(diào)控細胞周期促進膠質(zhì)母細胞瘤細胞增殖、遷移的體內(nèi)和體外研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2015年

9 熊劍;膠質(zhì)母細胞瘤誘導(dǎo)凋亡治療及其機制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2009年

10 楊曉亮;實驗性分子靶向治療膠質(zhì)母細胞瘤[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2011年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉婷婷;AQP4在膠質(zhì)母細胞瘤發(fā)展中的作用[D];安徽大學(xué);2016年

2 杜池剛;擴散因子受體對膠質(zhì)母細胞瘤復(fù)發(fā)影響的相關(guān)研究[D];山東大學(xué);2009年

3 馬揚;膠質(zhì)母細胞瘤患者術(shù)前預(yù)后評分的研究[D];山東大學(xué);2012年

4 許豪;膠質(zhì)母細胞瘤術(shù)后放化療與單純手術(shù)治療方案的療效觀察[D];山東大學(xué);2014年

5 郭欣茹;腦膠質(zhì)母細胞瘤血漿差異蛋白質(zhì)分析[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2014年

6 王宗寶;秋水仙堿對小鼠膠質(zhì)母細胞瘤化療初步研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2008年

7 師惠;人膠質(zhì)母細胞瘤中白藜蘆醇代謝產(chǎn)物及其代謝相關(guān)酶表達的分析[D];大連醫(yī)科大學(xué);2011年

8 淦作松;三氧化二砷誘導(dǎo)膠質(zhì)母細胞瘤細胞凋亡作用的研究[D];江西醫(yī)學(xué)院;2004年

9 趙朝輝;人腦膠質(zhì)母細胞瘤中NFKBIA多態(tài)性的分析研究[D];蘇州大學(xué);2014年

10 時光;老年膠質(zhì)母細胞瘤患者規(guī)范化治療療效及安全性分析[D];大連醫(yī)科大學(xué);2014年

  本文關(guān)鍵詞：RPS15A通過AKT調(diào)控細胞周期促進膠質(zhì)母細胞瘤細胞增殖、遷移的體內(nèi)和體外研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：454092