目的:設(shè)計(jì)靶向c-Met的嵌合抗原受體T細(xì)胞(Chimeric antigen receptor T cell,CAR-T),驗(yàn)證其在胃癌中的有效性及安全性,并對(duì)c-Met CAR進(jìn)行PD1/CD28融合受體優(yōu)化以改善免疫抑制,提高抗腫瘤效果。方法:使用生物信息學(xué)的方法分析TCGA中胃癌數(shù)據(jù)的c-Met表達(dá)情況及其與生存預(yù)后的關(guān)系。收集手術(shù)患者的胃癌腫瘤及癌旁組織標(biāo)本,用免疫組化的方法檢測(cè)c-Met的表達(dá)。并用PCR、WB、流式細(xì)胞計(jì)數(shù)等方法檢測(cè)6種不同胃癌細(xì)胞系c-Met、PD-L1的基因和蛋白表達(dá)情況。構(gòu)建c-Met CAR和cMet-PD1/CD28 CAR質(zhì)粒,包裝慢病毒、感染T細(xì)胞,制備對(duì)應(yīng)的CAR-T。在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,檢測(cè)CAR-T細(xì)胞不同亞群和表型的變化,及靶細(xì)胞刺激對(duì)CAR-T激活和PD-1表達(dá)的影響。檢測(cè)CAR-T的細(xì)胞因子分泌水平,并通過(guò)乳酸脫氫酶釋放實(shí)驗(yàn)、7-AAD染色、CD107a脫顆粒反應(yīng)等方法反映c-Met CAR-T、cMet-PD1/CD28 CAR-T對(duì)靶細(xì)胞的殺傷能力。在體內(nèi)動(dòng)物模型中,通過(guò)活體小動(dòng)物成像等方法觀測(cè)兩種CAR-T對(duì)小鼠胃癌皮下移植腫...

【文章頁(yè)數(shù)】：170 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖1-1胃癌CAR-T基礎(chǔ)和臨床研究的數(shù)量

蘭州大學(xué)博士學(xué)位論文c-MetCAR-T及PD1/CD28融合受體CAR-T在胃癌中的研究8圖1-1胃癌CAR-T基礎(chǔ)和臨床研究的數(shù)量。(a)胃癌CAR-T基礎(chǔ)研究各靶點(diǎn)的研究數(shù)量；(b)各地區(qū)胃癌CAR-T基礎(chǔ)研究的數(shù)量；(c)胃癌CAR-T臨床試驗(yàn)各靶點(diǎn)的注冊(cè)數(shù)量；(d)各地....

圖2-1(a)MET基因在胃癌和正常組織中的表達(dá)差異，MET基因表達(dá)與胃癌組織(b)微衛(wèi)星穩(wěn)定性、(c)病理分期、(d)Lauren分型之間的關(guān)系

蘭州大學(xué)博士學(xué)位論文c-MetCAR-T及PD1/CD28融合受體CAR-T在胃癌中的研究0.045)，Lauren分型中腸型的MET轉(zhuǎn)錄水平高于彌漫型(p=0.019)（圖2-1）。但是MET的轉(zhuǎn)....

圖2-2MET基因表達(dá)量與胃癌患者(a)性別、(b)年齡、(c)組織學(xué)分級(jí)、(d)幽門(mén)螺桿菌感染之間的關(guān)系

蘭州大學(xué)博士學(xué)位論文c-MetCAR-T及PD1/CD28融合受體CAR-T在胃癌中的研究18圖2-2MET基因表達(dá)量與胃癌患者(a)性別、(b)年齡、(c)組織學(xué)分級(jí)、(d)幽門(mén)螺桿菌感染之間的關(guān)系。Figure2-2RelationshipbetweenMETgeneexpr....

圖2-3MET基因表達(dá)水平對(duì)胃癌患者(a)總生存期、(b)疾病相關(guān)生存期、(c)無(wú)進(jìn)展生存期、(d)無(wú)病生存期的影響

蘭州大學(xué)博士學(xué)位論文c-MetCAR-T及PD1/CD28融合受體CAR-T在胃癌中的研究19圖2-3MET基因表達(dá)水平對(duì)胃癌患者(a)總生存期、(b)疾病相關(guān)生存期、(c)無(wú)進(jìn)展生存期、(d)無(wú)病生存期的影響。Figure2-3TheeffectofMETgeneexpress....

本文編號(hào)：3942380