目的:間充質(zhì)干細(xì)胞是近年來治療軟骨缺損的潛力巨大的種子細(xì)胞,其可來源于多種組織,大多數(shù)研究為獲得足夠多的細(xì)胞數(shù)量,治療前均先將干細(xì)胞進(jìn)行體外擴(kuò)增,然而體外擴(kuò)增會引起干細(xì)胞的衰老并影響其分化能力,既往研究顯示骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外擴(kuò)增至第三代后其成軟骨能力和軟骨修復(fù)治療效果較原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞均有下降,但其中的具體調(diào)控機(jī)制尚不明。本研究旨在通過轉(zhuǎn)錄組測序比較骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外擴(kuò)增與否產(chǎn)生的差異基因和不同通路,查找出影響軟骨分化能力的關(guān)鍵基因和通路,并通過實(shí)驗進(jìn)一步驗證其結(jié)果。方法:先進(jìn)行骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的提取,6只2.5～3kg大小2月齡新西蘭大白兔,麻醉后用16G骨穿針在雙側(cè)股骨髁、脛骨上段進(jìn)行穿刺,每只穿刺抽取約20ml骨髓,使用兔骨髓干細(xì)胞分離試劑盒提取骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,將干細(xì)胞分成2組:P0組:新鮮提取的兔原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,未經(jīng)擴(kuò)增和凍存;P3組:使用擴(kuò)增傳代至第三代的兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,未經(jīng)凍存。提取P0組和P3組細(xì)胞RNA,進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序。測序完成后通過生物信息學(xué)技術(shù),篩選出差異基因,進(jìn)行KEGG通路分析查找出相關(guān)通路,結(jié)合文獻(xiàn)報道選擇內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的未折疊蛋白反應(yīng)通路作為...

【文章頁數(shù)】：142 頁

【學(xué)位級別】：博士

本文編號：3881193