瞬時(shí)受體電位通道 M2(transient receptor potential melastatin 2,TRPM2)是一種Ca2+通透的非選擇性陽離子通道,廣泛分布于神經(jīng)元,小膠質(zhì)細(xì)胞,胰島β細(xì)胞,單核細(xì)胞,巨噬細(xì)胞,內(nèi)皮細(xì)胞等細(xì)胞當(dāng)中。近年來研究表明,TRPM2通道參與了溫度感知,炎癥反應(yīng),缺血性損傷,神經(jīng)退行性疾病,糖尿病,腫瘤等諸多生理病理過程。TRPM2通道的內(nèi)源性配體主要為煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD+)的代謝產(chǎn)物腺苷二磷酸核糖(adenosine diphosphate ribose,ADPR)。同時(shí),由于TRPM2通道能在H202的作用下被激活,因此也被認(rèn)為是體內(nèi)重要的氧化應(yīng)激感受器。此外,Ca2+作為體內(nèi)重要的信號(hào)分子,不僅可與ADPR協(xié)同激活TRPM2通道,還可以單獨(dú)激活通道,但其具體門控機(jī)制還不清楚。為了探究TRPM2通道是否存在Ca2+結(jié)合位點(diǎn),我們運(yùn)用生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)出人類來源TRPM2通道(human TRPM2 channel,hTRPM2)氨基端存在兩個(gè)潛在的EF-loop基序(D2...

【文章頁數(shù)】：152 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
ABSTRACT
縮略詞
1 引言
    1.1 離子通道
    1.2 TRP家族離子通道
    1.3 TRPM2通道
    1.4 鈣離子和TRPM2通道
2 材料和方法
    2.1 儀器設(shè)備和試劑耗材
        2.1.1 儀器設(shè)備
        2.1.2 試劑及耗材
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.2.3 TRPM2通道點(diǎn)突變質(zhì)粒構(gòu)建
        2.2.4 電生理記錄
        2.2.5 表面生物素化及WesternBlot
3 結(jié)果
    3.1 鑒定HTRPM2通道鈣激活調(diào)控的新位點(diǎn)
        3.1.1 建立hTRPM2通道電生理記錄系統(tǒng)
        3.1.2 采用Ca²⁺與ADPR協(xié)同的方法激活hTRPM2通道
        3.1.3 預(yù)測(cè)hTRPM2通道氨基端兩段潛在EF-loop基序
        3.1.4 兩段潛在EF-loop基序?qū)a²⁺激活hTRPM2通道的影響
        3.1.5 第一段潛在EF-loop基序?qū)a²⁺激活hTRPM2通道的作用
        3.1.6 第二段潛在EF-loop基序?qū)a²⁺激活hTRPM2通道的作用
        3.1.7 D267-D278及D288-E298保守位點(diǎn)的突變不影響通道膜表達(dá)
        3.1.8 D267-D278及D288-E298保守位點(diǎn)的突變對(duì)hTRPM2通道的單通道電導(dǎo)影響
    3.2 TPRM2通道S2-S3 DOMAIN上鈣結(jié)合位點(diǎn)對(duì)通道門控影響
        3.2.1 Ca²⁺在hTRPM2通道和nvTRPM2通道門控過程中具有不同調(diào)節(jié)作用
        3.2.2 nvTRPM2通道S2-S3 domain上Ca²⁺結(jié)合位點(diǎn)內(nèi)的四個(gè)殘基與通道激活有關(guān)
        3.2.3 hTRPM2通道S2-S3 domain上對(duì)應(yīng)位點(diǎn)參與通道激活
        3.2.4 TRPM2通道S2-S3 domain上Ca²⁺結(jié)合位點(diǎn)的谷氨酰胺影響通道失活
        3.2.5 TRPM2通道S2-S3 domain上Ca²⁺結(jié)合位點(diǎn)的天冬酰胺影響通道失活
4 討論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3851831