目的DNA損傷是導致細胞凋亡的主要因素之一,減少DNA損傷可抑制細胞凋亡、死亡,是機體發(fā)生缺血性腦卒中后神經(jīng)保護的重要機制。在缺血性腦卒中領域關于DNA損傷的研究較少。Netrin-1在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育中扮演了重要的角色,除此之外,Netrin-1還可作為生存因子發(fā)揮作用。在缺血性腦卒中后,Netrin-1可能通過調(diào)節(jié)DNA損傷而減少細胞凋亡,減輕腦組織損傷,這一作用可能通過DCC/ERK信號通路實現(xiàn)。方法第一部分Netrin-1減輕MCAO大鼠缺血性腦損傷(1)線栓法建立大腦中動脈梗塞(Middle Cerebral Artery Occlusion,MCAO)大鼠模型,并予紋狀體注射編碼Netrin-1的腺相關病毒及對照空病毒,分別構(gòu)建假手術組(Sham)、假手術+空病毒組(Sham+vector)、大腦中動脈梗塞組(MCAO)、大腦中動脈梗塞+空病毒組(MCAO+vector)、大腦中動脈梗塞+Netrin-1過表達組(MCAO+Netrin-1)干預模型。(2)通過磁共振檢測各組模型梗死體積的變化,并運用mNSS評分及改良貼紙去除試驗評價各組大鼠的行為學變化,使用Tunel染色評...

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
附錄
中文摘要
Abstract
前言
第一部分 Netrin-1 減輕MCAO大鼠缺血性腦損傷
    背景
    1 實驗材料
        1.1 實驗動物
        1.2 試劑及耗材
        1.3 主要試劑配制
        1.4 儀器設備
    2 實驗方法
        2.1 大腦中動脈梗塞(MCAO)模型的制備及實驗分組
        2.2 病毒載體構(gòu)建
        2.3 Netrin-1 過表達病毒紋狀體注射
        2.4 腦組織灌注取材
        2.5 免疫蛋白印跡(Western blotting)
        2.6 核磁共振檢測
        2.7 神經(jīng)功能評分
        2.8 石蠟切片Tunel實驗
        2.9 統(tǒng)計學方法
    3 結(jié)果
        3.1 Netrin-1 病毒載體在腦內(nèi)表達
        3.2 Netrin-1 可減少MCAO大鼠腦梗死體積
        3.3 Netrin-1 可顯著改善MCAO大鼠行為學表現(xiàn)
        3.4 Netrin-1 可減少MCAO大鼠腦組織細胞凋亡
    4 討論
    5 小結(jié)
    參考文獻
第二部分 Netrin-1 通過ERK信號通路發(fā)揮抗凋亡作用
    背景
    1 實驗材料
        1.1 實驗動物
        1.2 試劑及耗材
        1.3 主要試劑配制
        1.4 儀器設備
    2 實驗方法
        2.1 胎鼠皮層神經(jīng)元的分離、培養(yǎng),OGD模型的建立
        2.2 皮層神經(jīng)元分組
        2.3 慢病毒轉(zhuǎn)染皮層神經(jīng)元
        2.4 免疫蛋白印跡(Western blotting)
        2.5 LDH釋放檢測
        2.6 流式細胞術檢測細胞凋亡
        2.7 彗星實驗檢測細胞損傷
        2.8 統(tǒng)計學方法
    3 結(jié)果
        3.1 皮層神經(jīng)元轉(zhuǎn)染Netrin-1 慢病毒
        3.2 Netrin-1對OGD誘導的皮層神經(jīng)元死亡和凋亡起到保護作用
        3.3 Netrin-1 可減少皮層神經(jīng)元的DNA損傷
        3.4 OGD后不同時間點Netrin-1及p-ERK的變化
        3.5 Netrin-1 可激活ERK信號通路
        3.6 Netrin-1 通過ERK信號通路發(fā)揮OGD誘導神經(jīng)元損傷的保護作用
    4 討論
    5 小結(jié)
    參考文獻
第三部分 Netrin-1 通過DCC/ERK信號通路減輕DNA損傷
    背景
    1 實驗材料
        1.1 實驗動物
        1.2 試劑及耗材
        1.3 主要試劑配制
        1.4 儀器設備
    2 實驗方法
        2.1 建立MCAO模型、轉(zhuǎn)染腺相關病毒及實驗分組
        2.2 腦組織切片免疫熒光雙標
        2.3 胎鼠皮層神經(jīng)元的分離、培養(yǎng),OGD模型的建立及實驗分組
        2.4 慢病毒轉(zhuǎn)染皮層神經(jīng)元
        2.5 免疫蛋白印跡(Western blot)
        2.6 mRNA實時定量PCR(RT-PCR)的檢測
        2.7 細胞免疫熒光
        2.8 細胞電鏡取材及線粒體形態(tài)分析
        2.9 統(tǒng)計學方法
    3 結(jié)果
        3.1 Netrin-1 可上調(diào)MCAO大鼠缺血周邊區(qū)DCC的表達
        3.2 Netrin-1 可上調(diào)體外氧糖剝奪模型(OGD)DCC的表達
        3.3 DCC中和抗體下調(diào)了ERK信號通路的磷酸化水平
        3.4 Netrin-1 可通過ERK信號通路上調(diào)p53及p21 表達
        3.5 Netrin-1 可減輕OGD導致的線粒體腫脹
    4 討論
    5 小結(jié)
總結(jié)
參考文獻
綜述 缺血性腦卒中與DNA損傷
    參考文獻
致謝



本文編號：3836799