目的:課題組前期研究發(fā)現(xiàn),蛋白酪氨酸激酶7(Protein tyrosine kinase 7,PTK7)在微球培養(yǎng)的口腔鱗癌(Oral squamous cell carcinoma,OSCC)細(xì)胞中較貼壁細(xì)胞表達升高。在OSCC中,PTK7如何影響腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為,以及和腫瘤間質(zhì)的關(guān)系尚不清楚。本研究旨在探討腫瘤間質(zhì)中的癌相關(guān)成纖維細(xì)胞(Cancer associated fibroblasts,CAFs)與PTK7的作用,探討骨膜蛋白(Periostin,POSTN)和PTK7對OSCC生物學(xué)行為的調(diào)控效應(yīng)和機制。方法:通過熒光定量PCR、免疫印跡和免疫組織化學(xué)實驗,檢測OSCC組織中PTK7的表達以及PTK7與臨床病理特征及β-Catenin的相關(guān)性;通過裸鼠皮下成瘤及實驗性肺轉(zhuǎn)移實驗,檢測抑制PTK7對抑制皮下移植瘤和肺轉(zhuǎn)移的作用。通過免疫共沉淀、蛋白質(zhì)譜分析及免疫熒光實驗檢測PTK7和POSTN在OSCC中的相互作用。通過構(gòu)建PTK7敲減和過表達的病毒載體,來改變PTK7的表達,用人重組POSTN蛋白處理OSCC細(xì)胞,通過細(xì)胞增殖、克隆形成、微球培養(yǎng)、細(xì)胞遷移和侵襲以及...

【文章頁數(shù)】：131 頁

【學(xué)位級別】：博士

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摘要
ABSTRACT
中英文縮寫字母表
緒論
第一章 PTK7,Wnt/β-Catenin等相關(guān)蛋白在口腔鱗癌組織標(biāo)本中的表達和臨床意義
    1.1 前言
    1.2 材料與方法
        1.2.1 主要儀器和設(shè)備
        1.2.2 免疫印跡實驗(Western blot)
        1.2.3 組織石蠟包埋、切片
        1.2.4 免疫組織化學(xué)實驗
        1.2.5 熒光定量PCR實驗
        1.2.6 OSCC病例和樣本
        1.2.7 統(tǒng)計學(xué)分析
    1.3 實驗結(jié)果
        1.3.1 PTK7 在正常組織和OSCC組織中的表達情況
        1.3.2 PTK7和CTNNB1 基因/β-Catenin蛋白在OSCC組織中表達的相關(guān)性
        1.3.3 免疫組織化學(xué)實驗檢測OSCC組織中PTK7 蛋白的表達與臨床病理特征的關(guān)系
    1.4 小結(jié)
第二章 抑制PTK7 對動物體內(nèi)抗瘤作用及肺轉(zhuǎn)移率的影響
    2.1 前言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 主要儀器和設(shè)備
        2.2.2 人口腔鱗癌細(xì)胞系的復(fù)蘇、傳代與凍存
        2.2.3 SD大鼠來源Rca-T細(xì)胞的復(fù)蘇、傳代
        2.2.4 GFP對照慢病毒熒光感染Rca-T細(xì)胞
        2.2.5 裸鼠皮下成瘤實驗
        2.2.6 癌細(xì)胞裸鼠尾靜脈注射肺轉(zhuǎn)移實驗
        2.2.7 H&E染色實驗
        2.2.8 免疫組織化學(xué)實驗
        2.2.9 統(tǒng)計學(xué)分析
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 抑制PTK7 對動物體內(nèi)腫瘤體積及艾羅替尼抗瘤效果的影響
        2.3.2 抑制PTK7 對動物體內(nèi)β-Catenin蛋白表達的影響
        2.3.3 抑制PTK7 對動物體內(nèi)肺轉(zhuǎn)移率的影響
    2.4 小結(jié)
第三章 癌相關(guān)成纖維細(xì)胞分泌的POSTN與 PTK7 組織細(xì)胞來源觀察
    3.1 前言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 主要儀器主要儀器和設(shè)備
        3.2.2 正常成纖維細(xì)胞(NFs)和癌相關(guān)成纖維細(xì)胞(CAFs)的原代培養(yǎng)
        3.2.3 免疫共沉淀實驗
        3.2.4 蛋白銀染實驗
        3.2.5 蛋白質(zhì)譜分析
        3.2.6 免疫熒光實驗
        3.2.7 Western blot實驗
        3.2.8 免疫組織化學(xué)實驗
        3.2.9 統(tǒng)計學(xué)分析
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 原代培養(yǎng)的NFs和 CAFs細(xì)胞
        3.3.2 PTK7在OSCC中組織來源的驗證
        3.3.3 CAFs分泌的蛋白與PTK7 的關(guān)系
        3.3.4 OSCC中,CAFs分泌的POSTN與 PTK7 的關(guān)系
    3.4 小結(jié)
第四章 POSTN-PTK7 體外對口腔鱗癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響的研究
    4.1 前言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 主要儀器與設(shè)備
        4.2.2 人口腔鱗癌細(xì)胞系的復(fù)蘇、傳代與凍存
        4.2.3 熒光定量PCR實驗
        4.2.4 慢病毒感染實驗
        4.2.5 微球培養(yǎng)實驗
        4.2.6 細(xì)胞增殖實驗(CCK8 法)
        4.2.7 細(xì)胞平板克隆實驗
        4.2.8 細(xì)胞遷移實驗(Transwell法)
        4.2.9 細(xì)胞侵襲實驗(Transwell法)
        4.2.10 細(xì)胞劃痕實驗
        4.2.11 統(tǒng)計學(xué)分析
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 對照、PTK7 敲減及過表達慢病毒感染腫瘤細(xì)胞
        4.3.2 POSTN-PTK7 對口腔鱗癌細(xì)胞系增殖的影響
        4.3.3 POSTN-PTK7 對口腔鱗癌細(xì)胞系克隆形成的影響
        4.3.4 POSTN-PTK7 對口腔鱗癌細(xì)胞系中干細(xì)胞標(biāo)志物表達的影響
        4.3.5 POSTN-PTK7 對口腔鱗癌細(xì)胞系中微球形成的影響
        4.3.6 POSTN-PTK7 對口腔鱗癌細(xì)胞系遷移的影響
        4.3.7 POSTN-PTK7 對口腔鱗癌細(xì)胞系侵襲的影響
        4.3.8 PTK7 對口腔鱗癌細(xì)胞系化療藥物敏感性的影響
    4.4 小結(jié)
第五章 POSTN-PTK7 在動物體內(nèi)對口腔鱗癌作用的研究
    5.1 前言
    5.2 材料與方法
        5.2.1 主要儀器和設(shè)備
        5.2.2 慢病毒感染實驗
        5.2.3 裸鼠皮下成瘤實驗
        5.2.4 H&E染色實驗
        5.2.5 免疫組織化學(xué)實驗
        5.2.6 統(tǒng)計學(xué)分析
    5.3 實驗結(jié)果
        5.3.1 在裸鼠體內(nèi),POSTN-PTK7 對腫瘤生長的作用
        5.3.2 裸鼠體內(nèi)實驗中,POSTN-PTK7對β-Catenin表達的影響
    5.4 小結(jié)
第六章 口腔鱗癌中POSTN-PTK7對Wnt/β-Catenin通路的調(diào)控
    6.1 前言
    6.2 材料與方法
        6.2.1 主要儀器與設(shè)備
        6.2.2 Western blot實驗
        6.2.3 免疫熒光實驗
        6.2.4 統(tǒng)計學(xué)分析
    6.3 實驗結(jié)果
        6.3.1 口腔鱗癌細(xì)胞系中POSTN-PTK7對β-Catenin蛋白表達的調(diào)控
        6.3.2 口腔鱗癌細(xì)胞系中POSTN–PTK7對β-Catenin蛋白定位的調(diào)控
    6.4 小結(jié)
討論
全文總結(jié)
課題的主要創(chuàng)新點
口腔鱗癌治療的展望
參考文獻
致謝
攻讀博士學(xué)位期間已發(fā)表或錄用的論文
在讀期間參與基金項目



本文編號：3811873