2015年世界衛(wèi)生組織最新統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示,172個國家的70歲以下人群中惡性腫瘤為第一或第二大死因的國家有91個,第三或第四大死因的國家有22個。而中國惡性腫瘤的發(fā)生率和死亡率均逐年升高,并已超過心腦血管疾病成為我國居民的第一大死因。因此,揭示惡性腫瘤發(fā)病分子機制將為有效治療腫瘤提供關(guān)鍵的靶點,是提高人民健康水平的重中之重。表觀遺傳調(diào)控是指在不改變基因序列的前提下,影響基因表達的現(xiàn)象,具有可遺傳性和可逆性。該機制廣泛參與調(diào)控腫瘤的多種惡性表型,并與其發(fā)生、發(fā)展和耐藥密切相關(guān),因此備受關(guān)注。揭示表觀遺傳調(diào)控機制有望為腫瘤患者的早期檢測、疾病監(jiān)測及預(yù)后判斷提供潛在的分子標志物。ASPP2(p53凋亡刺激蛋白2)屬于ASPP家族成員,具有促進細胞凋亡,抑制細胞遷移和生長等抑癌基因活性。研究表明,ASPP2在乳腺癌,肝癌等多種惡性腫瘤中表達下調(diào),其下調(diào)水平與腫瘤的分期和不良預(yù)后相關(guān),提示該基因可能為腫瘤治療的重要靶點。腎癌和宮頸癌分別為泌尿系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)重要腫瘤類型,晚期患者因缺乏有效治療策略而預(yù)后極差。但目前,ASPP2在腎癌和宮頸癌中的表達情況,調(diào)控和作用機制均未見報道。因此,本文將對此進行...

【文章頁數(shù)】：139 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 課題背景
    1.2 腫瘤的特征性改變
        1.2.1 腫瘤細胞無限增殖的特性及調(diào)控
        1.2.2 腫瘤細胞死亡耐受的特性及調(diào)控
        1.2.3 腫瘤細胞轉(zhuǎn)移特性及調(diào)控
        1.2.4 腫瘤微環(huán)境
    1.3 腫瘤中表觀遺傳研究進展
        1.3.1 表觀遺傳研究概況
        1.3.2 表觀遺傳調(diào)控與腫瘤
        1.3.3 表觀遺傳調(diào)控分子機制
    1.4 ASPP2研究進展
        1.4.1 ASPP2的發(fā)現(xiàn)
        1.4.2 ASPP2的生物學功能
        1.4.3 ASPP2與腫瘤
        1.4.4 ASPP2的表達調(diào)控機制
    1.5 課題研究的目的和意義
    1.6 主要研究內(nèi)容
    1.7 技術(shù)路線
第2章 實驗材料與方法
    2.1 實驗材料與儀器
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 實驗試劑
        2.1.3 實驗儀器
        2.1.4 主要分析軟件
    2.2 實驗方法與步驟
        2.2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2.2 細胞總RNA提取
        2.2.3 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        2.2.4 組織蛋白提取
        2.2.5 細胞總蛋白提取
        2.2.6 RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA
        2.2.7 MTT細胞活力檢測
        2.2.8 細胞遷移
        2.2.9 細胞侵襲
        2.2.10 細胞劃痕
        2.2.11 細胞免疫熒光染色實驗
        2.2.12 Real-time PCR
        2.2.13 蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Blot)
        2.2.14 RNAi細胞轉(zhuǎn)染
        2.2.15 慢病毒包裝
        2.2.16 免疫組化
        2.2.17 生物信息學網(wǎng)站數(shù)據(jù)分析
        2.2.18 染色質(zhì)免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation Assay,CHIP)
        2.2.19 熒光素酶報告基因檢測
        2.2.20 質(zhì)�？寺�
        2.2.21 質(zhì)粒的提取
        2.2.22 裸鼠皮下成瘤實驗
        2.2.23 統(tǒng)計學方法
第3章 ASPP2在腫瘤中表達特征研究
    3.1 引言
    3.2 ASPP2在腎癌中表達下調(diào)
        3.2.1 ASPP2在腎癌細胞系中表達下調(diào)
        3.2.2 ASPP2在腎癌組織中表達下調(diào)
        3.2.3 ASPP2表達下調(diào)與腎癌病理分期及預(yù)后相關(guān)
    3.3 ASPP2在宮頸癌中表達下調(diào)
        3.3.1 ASPP2在宮頸癌組織中表達下調(diào)
        3.3.2 ASPP2表達下調(diào)與宮頸癌預(yù)后相關(guān)
    3.4 本章小結(jié)
第4章 腫瘤中ASPP2表觀調(diào)控分子機制研究
    4.1 引言
    4.2 ASPP2在腎癌中降低不依賴啟動子甲基化
    4.3 HDAC1介導(dǎo)的組蛋白去乙�；种艫SPP2的表達
    4.4 HDAC1下調(diào)促進E2F1與ASPP2啟動子結(jié)合
    4.5 MICRORNA(MIR-205)抑制ASPP2的表達
    4.6 本章小結(jié)
第5章 腫瘤中ASPP2生物學效應(yīng)的研究
    5.1 引言
    5.2 體外細胞模型驗證ASPP2促進細胞凋亡
    5.3 體外細胞模型驗證ASPP2抑制腫瘤細胞的生長和遷移
    5.4 體內(nèi)動物模型驗證ASPP2促進凋亡抑制生長和遷移
    5.5 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
附錄
攻讀博士學位期間發(fā)表的論文及其它成果
致謝
個人簡歷



本文編號：3793652