結(jié)直腸癌(Colorectal cancer,CRC)是一類常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤,嚴(yán)重威脅人類健康。傳統(tǒng)的放化療并不能顯著提高患者的生存率,因而探索一種新型有效的結(jié)直腸癌治療手段至關(guān)重要,近些年溶瘤病毒的腫瘤治療應(yīng)運(yùn)而生。溶瘤病毒可選擇性地在腫瘤細(xì)胞中復(fù)制并裂解腫瘤細(xì)胞,同時(shí)激活機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng);然而,直接通過靜脈注射溶瘤病毒會(huì)引起抗病毒免疫反應(yīng)而降低其作用效果,因而選擇合適的載體將溶瘤病毒運(yùn)輸至腫瘤部位是實(shí)現(xiàn)安全、高效、精準(zhǔn)治療的關(guān)鍵。本研究我們利用人經(jīng)血干細(xì)胞(Human menstrual blood-derived stem cells,Men SCs)運(yùn)輸溶瘤腺病毒,探索其作為載體的靶向運(yùn)輸能力和結(jié)合溶瘤腺病毒對(duì)CRC的治療效果。MenSCs是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種成體干細(xì)胞,與其他間充質(zhì)干細(xì)胞相比,具有來源豐富、采集方便無創(chuàng)、體外擴(kuò)增迅速、無倫理道德爭(zhēng)議等優(yōu)勢(shì)。本研究中,我們首先從女性志愿者經(jīng)血樣本中分離獲取經(jīng)血源干細(xì)胞,并對(duì)其進(jìn)行傳代培養(yǎng)和相關(guān)表面標(biāo)記的鑒定,進(jìn)而探索其作為病毒運(yùn)輸載體的可行性和結(jié)合溶瘤病毒治療CRC的有效性。為了優(yōu)化溶瘤病毒對(duì)Men SCs的感染效率,...

【文章頁(yè)數(shù)】：141 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
前言
第一部分 經(jīng)血干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定
    1.1 前言
    1.2 材料和試劑
        1.2.1 MenSCs的來源
        1.2.2 主要試劑
        1.2.3 主要設(shè)備
    1.3 實(shí)驗(yàn)方法
        1.3.1 MenSCs的分離培養(yǎng)
        1.3.2 細(xì)胞凍存和復(fù)蘇
        1.3.3 MenSCs細(xì)胞表面標(biāo)記分子鑒定
        1.3.4 MenSCs誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)
        1.3.5 免疫熒光檢測(cè)MenSCs表面干性分子
    1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1.4.1 MenSCs的分離培養(yǎng)
        1.4.2 MenSCs細(xì)胞成骨成脂分化結(jié)果
        1.4.3 MenSCs細(xì)胞表面標(biāo)記分子流式鑒定結(jié)果
        1.4.4 MenSCs表面干性標(biāo)記的表達(dá)
    1.5 討論
    1.6 結(jié)論
第二部分 MenSCs-CRAd5/F11 細(xì)胞株的構(gòu)建及功能鑒定
    2.1 前言
    2.2 材料與試劑
        2.2.1 主要試劑
        2.2.2 主要設(shè)備
        2.2.3 MenSCs及腫瘤細(xì)胞系來源
        2.2.4 結(jié)直腸癌細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2.5 溶瘤腺病毒CRAd5/F11的構(gòu)建及分離純化
        2.2.6 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 Western Blot檢測(cè)MenSCs表面受體蛋白表達(dá)
        2.3.2 CRAd5/F11 感染MenSCs
        2.3.3 電鏡的檢測(cè)CRAd5/F11
        2.3.4 CRAd5/F11對(duì)MenSCs毒性作用的檢測(cè)
        2.3.5 CRAd5/F11 感染后MenSCs上清中病毒顆粒數(shù)的檢測(cè)
        2.3.6 MenSCs-CRAd5/F11 細(xì)胞表面標(biāo)記分子鑒定
        2.3.7 MenSCs-CRAd5/F11 對(duì)腫瘤細(xì)胞的趨化實(shí)驗(yàn)
        2.3.8 MenSCs-CRAd5/F11 在腫瘤小鼠體內(nèi)的遷移實(shí)驗(yàn)
        2.3.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 MenSCs表面受體蛋白的表達(dá)
        2.4.2 溶瘤病毒對(duì)MenSCs感染效率的檢測(cè)
        2.4.3 MenSCs細(xì)胞內(nèi)病毒顆粒的電鏡檢測(cè)
        2.4.4 CRAd5/F11對(duì)MenSCs的毒性作用
        2.4.5 感染CRAd5/F11的MenSCs上清中病毒顆粒數(shù)檢測(cè)
        2.4.6 MenSCs-CRAd5/F11 表面標(biāo)記的表達(dá)情況
        2.4.7 MenSCs-CRAd5/F11 體外對(duì)腫瘤細(xì)胞的趨化作用
        2.4.8 MenSCs-CRAd5/F11 在體內(nèi)對(duì)腫瘤組織的歸巢作用
    2.5 討論
        2.5.1 CRAd5/F11 依賴細(xì)胞受體CD46 感染MenSCs
        2.5.2 CRAd5/F11對(duì)MenSCs和腫瘤細(xì)胞的毒性作用
        2.5.3 MenSCs-CRAd5/F11 對(duì)腫瘤的靶向遷移
    2.6 結(jié)論
第三部分 MenSCs運(yùn)載CRAd5-F11 治療結(jié)直腸癌的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究
    3.1 前言
    3.2 材料與試劑
        3.2.1 主要試劑
        3.2.2 主要設(shè)備
        3.2.3 MenSCs及腫瘤細(xì)胞系來源
        3.2.4 溶瘤腺病毒CRAd5/F11及CRAd5/F11-TIS的構(gòu)建
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 WB檢測(cè)腫瘤細(xì)胞表面腺病毒結(jié)合受體的表達(dá)
        3.3.2 CRAd5/F11對(duì)腫瘤細(xì)胞毒性作用的檢測(cè)
        3.3.3 運(yùn)載CRAd5/F11的MenSCs對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制實(shí)驗(yàn)
        3.3.4 荷瘤小鼠腫瘤模型的建立及腫塊大小的測(cè)量
        3.3.5 MenSCs的移植
        3.3.6 組織標(biāo)本的制備
        3.3.7 腫瘤組織的免疫組化分析
        3.3.8 腫瘤組織細(xì)胞凋亡的TUNEL檢測(cè)
        3.3.9 MenSCs-CRAd5/F11-TIS對(duì)腫瘤的作用
        3.3.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 腫瘤細(xì)胞表面腺病毒受體蛋白的表達(dá)
        3.4.2 溶瘤病毒對(duì)腫瘤細(xì)胞具有殺傷作用
        3.4.3 攜帶CRAd5/F11的MenSCs對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用
        3.4.4 病毒抗體血清對(duì)溶瘤病毒殺傷腫瘤細(xì)胞的影響
        3.4.5 體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作及時(shí)間安排示意圖
        3.4.6 MenSCs-CRAd5/F11 移植后抑制腫瘤的生長(zhǎng)
        3.4.7 腫瘤組織免疫組化相關(guān)蛋白的檢測(cè)
        3.4.8 MenSCs-CRAd5/F11 誘導(dǎo)腫瘤組織凋亡
        3.4.9 MenSCs-CRAd5/F11-TIS在體內(nèi)對(duì)腫瘤的抑制作用
    3.5 討論
        3.5.1 MenSCs運(yùn)載CRAd5/F11 對(duì)腫瘤的治療
        3.5.2 溶瘤病毒對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷和抑制機(jī)制
        3.5.3 溶瘤病毒結(jié)合基因治療
        3.5.4 溶瘤病毒CRAd5/F11從MenSCs胞內(nèi)釋放的機(jī)制探討
        3.5.5 MenSCs結(jié)合溶瘤病毒治療腫瘤的安全性問題
    3.6 結(jié)論
全文總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
綜述 間充質(zhì)干細(xì)胞的基本特性與疾病治療的應(yīng)用
    參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)歷及在讀期間取得的科研成果



本文編號(hào)：3789573