肝細胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是全球范圍內的惡性腫瘤之一。在中國具有相對較高的發(fā)病率和病死率,2015年HCC新發(fā)病例和死亡病例數分別為466,100和422,100例。臨床上,由于缺乏特異性的生物標志物和明顯的臨床癥狀,大多數HCC患者在被確診時已處于肝癌晚期,超過80%的患者出現預后不良。另外由于肝癌的復發(fā)和轉移,目前應用于臨床的治療方法都存在一定的局限性,且治療效果難以盡如人意。因此,研究與HCC發(fā)病和發(fā)展有關的分子機制從而發(fā)現新的治療靶點,同時研發(fā)新的有效的治療手段迫在眉睫。外泌體是由多種類型細胞分泌,粒徑在30～150 nm之間的囊泡樣小體。它包含有供體母細胞的多種蛋白質和核酸物質(包括DNA和RNA),通過作為細胞間通訊的介質參與多種生物學過程,如細胞增殖、遷移和凋亡活動等。其內含物與機體的病理及生理狀態(tài)密切相關。有研究表明,外泌體在疾病,尤其是在癌癥的起源和發(fā)展中起著重要作用,是癌癥惡性進展的重要參與者。因此分析循環(huán)外泌體中的內含物、揭示HCC發(fā)生發(fā)展的分子機制,有助于發(fā)現新的治療靶點、開發(fā)疾病的生物標志物。近年來,循環(huán)外泌體中的長鏈...

【文章頁數】：206 頁

【學位級別】：博士

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摘要
ABSTRACT
第一章 利用肝癌外泌體發(fā)現LNC85 標志物及相關作用機制研究
    前言
    1 實驗材料
        1.1 實驗樣本
        1.2 實驗細胞
        1.3 實驗試劑與耗材
        1.4 實驗儀器設備
    2 實驗方法
        2.1 細胞復蘇、培養(yǎng)、傳代與凍存
        2.2 外泌體的提取與鑒定
        2.3 RNA全轉錄組測序
        2.4 肝細胞癌患者血漿外泌體中RNA表達特點分析
        2.5 實時熒光定量PCR
        2.6 細胞瞬時轉染
        2.7 CCK-8 試劑盒檢測細胞增殖
        2.8 流式細胞儀檢測細胞凋亡
        2.9 Transwell檢測細胞侵襲
        2.10 Westren blot分析細胞增殖蛋白
        2.11 生物信息學分析
        2.12 統(tǒng)計學分析
    3 技術路線
    4 實驗結果
        4.1 采取血漿樣品的患者信息
        4.2 RNA全轉錄組測序結果
        4.3 HCC血漿外泌體中l(wèi)ncRNA與 mRNA的表達特征
        4.4 差異表達lncRNA的篩選
        4.5 候選差異表達lncRNA的 qRT-PCR驗證
        4.6 候選lncRNA對細胞增殖的影響
        4.7 對細胞凋亡的影響
        4.8 對細胞侵襲能力的影響
        4.9 lnc85 的亞細胞定位及靶基因的預測
        4.10 lnc85與mir-324-5p表達的關聯性
        4.11 lnc85 調控mir-324-5p下游基因的表達
        4.12 lnc85 在肝癌中的表達及臨床意義
    5 討論
    6 小結
    參考文獻
第二章 CU-CY新型納米光敏劑抗肝癌及外泌體傳遞效應的研究
    前言
    1 實驗材料
        1.1 實驗細胞
        1.2 實驗裸鼠
        1.3 主要的相關試劑
        1.4 實驗儀器
    2 實驗方法
        2.1 細胞復蘇、培養(yǎng)與凍存
        2.2 銅胺納米材料的合成
        2.3 銅胺納米材料的表征
        2.4 RNO脫色實驗檢測單線態(tài)氧的產生
        2.5 MTT檢測細胞增殖實驗
        2.6細胞克隆形成實驗
        2.7 細胞熒光染色實驗觀察細胞的生長狀態(tài)
        2.8流式細胞儀檢測細胞凋亡實驗
        2.9 蛋白免疫印跡分析
        2.10裸鼠皮下成瘤實驗
        2.11 蘇木精-伊紅染色
        2.12 細胞外泌體的提取及鑒定
        2.13 統(tǒng)計分析
    3 技術路線
    4 實驗結果
        4.1 銅胺納米材料物理性質的表征
        4.2 Cu-Cy NPs在紫外光的激發(fā)下產生單線態(tài)氧
        4.3 Cu-Cy NPs對 HepG2 的細胞毒性
        4.4 紫外光照對細胞生長狀態(tài)的影響
        4.5 細胞對Cu-Cy NPs的攝取情況
        4.6 Cu-Cy NPs抑制細胞的增殖
        4.7 Cu-Cy NPs誘導細胞的凋亡
        4.8 Cu-Cy NPs抑制裸鼠移植瘤的生長
        4.9 外泌體可作為Cu-Cy NPs的運輸載體
    5 討論
    6 小結
    參考文獻
全文總結
第三章 綜述
    1 外泌體的提取、鑒定及功能
        前言
        1.1 外泌體的提取技術
        1.2 外泌體的鑒定
        1.3 外泌體的功能
        1.4 展望
        參考文獻
    2 LNCRNA與肝細胞癌的發(fā)生、發(fā)展和轉移
        前言
        2.1 長鏈非編碼RNA的概述
        2.2 長鏈非編碼RNA的來源
        2.3 長鏈非編碼RNA的分類
        2.4 長鏈非編碼RNA的作用機制
        2.5 長鏈非編碼RNA與肝癌
        2.6 展望
        參考文獻
    3 光動力學治療癌癥的研究概況
        前言
        3.1 光動力學發(fā)展概述
        3.2 光動力治療的原理
        3.3 光動力治療的特點
        3.4 光敏劑及光源
        3.5 光動力學治療腫瘤的臨床應用
        3.6 展望
    參考文獻
攻讀博士期間發(fā)表及未發(fā)表的論文
致謝



本文編號：3788562