本文關(guān)鍵詞：高糖和氧化型低密度脂蛋白對(duì)晶狀體囊膜上皮細(xì)胞鈣庫(kù)操控鈣內(nèi)流、增殖和調(diào)亡的影響及其機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：糖尿病是常見(jiàn)的嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康和生活質(zhì)量的重要的慢性疾病,僅次于心腦血管系統(tǒng)疾病和惡性腫瘤。患病時(shí)機(jī)體長(zhǎng)期處于高糖環(huán)境,導(dǎo)致大血管、微血管受損并且危及心、腦、腎、周?chē)窠?jīng)、眼睛、足等,糖尿病主要的并發(fā)癥有糖尿病腎病,心血管系統(tǒng)的病變等,其在眼部的并發(fā)癥主要有糖尿病性視網(wǎng)膜病變、與糖尿病相關(guān)的葡萄膜炎以及糖尿病性白內(nèi)障等。糖尿病引發(fā)白內(nèi)障是多種因素綜合作用的結(jié)果,目前認(rèn)為主要包括:滲透壓的改變、晶狀體蛋白糖基化反應(yīng)、氧化損傷等。糖尿病時(shí),由于組織細(xì)胞長(zhǎng)期處于高血糖的環(huán)境接受高糖刺激,使得組織細(xì)胞中的活性物質(zhì)生成增多,超過(guò)抗氧化物質(zhì)的清除能力,氧化與抗氧化的平衡失調(diào),產(chǎn)生氧化應(yīng)激,氧化應(yīng)激可以直接造成細(xì)胞的鈣信號(hào)、凋亡和增殖改變。高脂血癥是脂肪代謝或轉(zhuǎn)運(yùn)異常導(dǎo)致的血漿中一種或多種脂質(zhì)高于正常值的一種全身性疾病,在諸多的流行病學(xué)調(diào)查研究中證實(shí)了高脂血癥與白內(nèi)障的發(fā)生有著密切的關(guān)聯(lián)。低密度脂蛋白的多少是目前診斷高脂血癥的主要標(biāo)準(zhǔn),高脂血癥時(shí),機(jī)體常常出現(xiàn)高氧化狀態(tài),血漿中氧化型低密度脂蛋白增多,氧化型低密度脂蛋白是高脂血癥患者動(dòng)脈粥樣硬化的最重要危險(xiǎn)因素之一。許多研究顯示高血脂可以影響細(xì)胞的鈣信號(hào)、增殖和凋亡。鈣離子在細(xì)胞增殖和凋亡中有重要的調(diào)節(jié)作用。Ca2+主要分布在細(xì)胞內(nèi)液和細(xì)胞外液中。在細(xì)胞內(nèi),Ca2+主要儲(chǔ)存在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)/肌漿網(wǎng)中,通過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)/肌漿網(wǎng)膜上的離子泵和離子通道調(diào)控其吸收和釋放,從而形成精細(xì)的Ca2+濃度調(diào)控體系。在細(xì)胞內(nèi),Ca2+作為重要的第二信使對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生生理病理反應(yīng)具有重要意義。近年來(lái)的研究結(jié)果顯示鈣庫(kù)操控的鈣通道廣泛分布于各種組織細(xì)胞,在調(diào)控細(xì)胞的生理病理功能中有重要作用,Orai和STIM是介導(dǎo)鈣庫(kù)操控的鈣內(nèi)流兩個(gè)重要的蛋白。本研究分為以下兩部分來(lái)闡明高糖和氧化型低密度脂蛋白對(duì)晶狀體囊膜上皮細(xì)胞鈣庫(kù)操控鈣內(nèi)流、增殖和凋亡的影響及其機(jī)制。通過(guò)本項(xiàng)研究,可以明確高血糖和氧化型低密度脂蛋白對(duì)晶狀體囊膜上皮細(xì)胞鈣信號(hào)和增殖凋亡的作用及其分子機(jī)制,有助于了解高血糖和氧化型低密度脂蛋白在白內(nèi)障發(fā)病中的可能作用和機(jī)制,為將來(lái)的治療提供一定的理論依據(jù),為藥物篩選提供靶點(diǎn),為臨床治療提供潛在的新的治療方法。1.高糖培養(yǎng)對(duì)晶狀體囊膜上皮細(xì)胞鈣庫(kù)操控鈣內(nèi)流、增殖和凋亡的影響鈣庫(kù)操控鈣內(nèi)流是細(xì)胞內(nèi)鈣庫(kù)中的鈣離子耗竭后激活了細(xì)胞膜上鈣庫(kù)操控的Ca2+通道,介導(dǎo)細(xì)胞外Ca2+內(nèi)流。鈣庫(kù)操控鈣內(nèi)流是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的Ca2+內(nèi)流的重要方式,而且,鈣庫(kù)操控鈣內(nèi)流介導(dǎo)的鈣信號(hào)可能是細(xì)胞內(nèi)外信息交流新的重要途徑,對(duì)細(xì)胞的增殖和凋亡都有重要的調(diào)節(jié)作用。本研究采用高糖培養(yǎng)晶狀體囊膜上皮細(xì)胞株HLEpi C細(xì)胞模擬體內(nèi)的高血糖環(huán)境,檢測(cè)了高糖培養(yǎng)對(duì)HLEpi C細(xì)胞鈣庫(kù)操控鈣內(nèi)流和增殖凋亡的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn):(1)糖尿病白內(nèi)障患者的晶狀體囊膜上皮細(xì)胞Orai1的表達(dá)顯著增多;(2)鈣成像實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)高糖培養(yǎng)1、3、7、14天后,三磷酸腺苷(ATP)和鈣庫(kù)上的鈣泵抑制劑毒胡蘿卜素(TG)介導(dǎo)的鈣庫(kù)操縱的鈣內(nèi)流都顯著增強(qiáng);(3)免疫蛋白印跡結(jié)果顯示,高糖培養(yǎng)的HLEpi C細(xì)胞STIM1、Orai3顯著升高,Orai2沒(méi)有顯著改變,而Orai1出現(xiàn)明顯降低;(4)Orai1和STIM1 si RNA顯著抑制了HLEpi C細(xì)胞Orai1和STIM1蛋白的表達(dá),同時(shí)也顯著抑制了TG介導(dǎo)的鈣庫(kù)操縱的鈣內(nèi)流;(5)高糖培養(yǎng)7天后HLEpi C細(xì)胞的增殖和凋亡都顯著增強(qiáng)。這些結(jié)果表明高糖培養(yǎng)引起的增強(qiáng)的鈣庫(kù)操控鈣內(nèi)流可能是由于高糖環(huán)境誘發(fā)HLEpi C細(xì)胞表達(dá)更多的介導(dǎo)鈣庫(kù)操控鈣內(nèi)流相關(guān)蛋白造成,高糖培養(yǎng)導(dǎo)致的增強(qiáng)的鈣庫(kù)操控鈣內(nèi)流可能是引起HLEpi C細(xì)胞增殖和凋亡增強(qiáng)的一個(gè)重要原因。2.氧化型低密度脂蛋白對(duì)晶狀體囊膜上皮細(xì)胞鈣庫(kù)操控鈣內(nèi)流、增殖和凋亡的影響氧化型低密度脂蛋白也可以影響細(xì)胞的鈣信號(hào)、增殖和凋亡。本研究采用硫酸銅氧化低密度脂蛋白制備氧化型低密度脂蛋白,然后根據(jù)文獻(xiàn)使用100μg/ml氧化型低密度脂蛋白處理HLEpi C細(xì)胞24h,檢測(cè)HLEpi C細(xì)胞的鈣庫(kù)操控鈣內(nèi)流、增殖和凋亡。通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):(1)TG介導(dǎo)的鈣庫(kù)操控鈣內(nèi)流明顯增強(qiáng);(2)免疫蛋白印跡顯示,氧化型低密度脂蛋白處理的晶狀體囊膜上皮細(xì)胞Orai3和STIM1蛋白表達(dá)顯著升高,而Orai1和Orai2表達(dá)卻沒(méi)有顯著改變;(3)CCK8細(xì)胞增殖結(jié)果顯示,氧化型低密度脂蛋白處理的細(xì)胞增殖明顯增強(qiáng);(4)TUNEL實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示,氧化低密度脂蛋白處理的HLEpi C細(xì)胞凋亡顯著增強(qiáng)。這些結(jié)果說(shuō)明氧化型低密度脂蛋白可以導(dǎo)致HLEpi C細(xì)胞表達(dá)鈣庫(kù)操控鈣內(nèi)流相關(guān)蛋白增強(qiáng),從而引起鈣庫(kù)操控鈣內(nèi)流增強(qiáng),而且鈣庫(kù)操控鈣內(nèi)流增強(qiáng)可能是引起HLEpi C細(xì)胞增殖和凋亡增強(qiáng)的原因之一。
【關(guān)鍵詞】：晶狀體囊膜上皮細(xì)胞 高血糖 氧化型低密度脂蛋白 鈣庫(kù)操縱鈣內(nèi)流 增殖
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R587.2;R776.1
【目錄】：

• 中英文縮寫(xiě)詞對(duì)照表5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-14
• 第一部分 高糖培養(yǎng)對(duì)晶狀體囊膜上皮細(xì)胞鈣庫(kù)操控鈣內(nèi)流、增殖和凋亡的影響14-42
• 1．前言14-19
• 2．實(shí)驗(yàn)材料19-21
• 3．實(shí)驗(yàn)方法21-28
• 4．結(jié)果28-35
• 5．討論35-42
• 第二部分 氧化型低密度脂蛋白對(duì)晶狀體囊膜上皮細(xì)胞鈣庫(kù)操控鈣內(nèi)流、增殖和凋亡的影響42-57
• 1．前言42-46
• 2．實(shí)驗(yàn)材料46-48
• 3．實(shí)驗(yàn)方法48-50
• 4．結(jié)果50-54
• 5．討論54-57
• 結(jié)論57-58
• 參考文獻(xiàn)58-73
• 附錄73-75
• 致謝75-76
• 綜述76-85
• 參考文獻(xiàn)82-85

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 袁媛;邱霞;;糖尿病性白內(nèi)障發(fā)病機(jī)制及治療研究進(jìn)展[J];轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)雜志;2014年04期

2 任秀君;馬惠芳;圖婭;;電針對(duì)高脂血癥合并腦缺血大鼠室管膜下區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞分化的影響[J];針刺研究;2010年05期

3 李艷偉;于曉玲;申玉超;;阿托伐他汀對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中Wnt信號(hào)通路及相關(guān)因子表達(dá)的影響[J];中國(guó)藥房;2014年17期

  本文關(guān)鍵詞：高糖和氧化型低密度脂蛋白對(duì)晶狀體囊膜上皮細(xì)胞鈣庫(kù)操控鈣內(nèi)流、增殖和調(diào)亡的影響及其機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：374395