發(fā)布時間：2023-01-31 02:19

　　目的:肝細(xì)胞癌（hepatocellularcarcinoma,HCC）是最常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤,在全球腫瘤相關(guān)死亡率中排第四位;在我國60歲以下的男性中排在腫瘤相關(guān)死亡率的首位。包括肝癌在內(nèi)的絕大多數(shù)實體腫瘤中存在著缺氧微環(huán)境,缺氧是大多數(shù)實體瘤的特征之一,缺氧微環(huán)境的存在促進了腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移,增強了腫瘤細(xì)胞對放化療的耐受,同時也改變了腫瘤細(xì)胞的基因表達(dá)水平。缺氧微環(huán)境下,腫瘤細(xì)胞通過上調(diào)多個基因促進多種糖酵解關(guān)鍵酶的表達(dá),以增強細(xì)胞糖酵解過程,為腫瘤細(xì)胞適應(yīng)低氧環(huán)境提供生存所必須的能量和物質(zhì)。然而目前對于肝癌糖酵解調(diào)控分子機制的研究依然尚不明確,深入探索低氧微環(huán)境下肝癌細(xì)胞糖酵解調(diào)控的分子機制,將有助于研發(fā)新的肝癌治療方案。Yes相關(guān)蛋白（Yes association protein,YAP）是重要的轉(zhuǎn)錄共激活因子,也是關(guān)鍵的核漿穿梭蛋白,在包括肝癌在內(nèi)的多種惡性腫瘤中異常高表達(dá),主要在細(xì)胞核中發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。關(guān)于YAP在腫瘤能量代謝過程中的調(diào)控機制研究,已經(jīng)成為腫瘤治療領(lǐng)域的一個新的研究熱點。細(xì)胞內(nèi)增強的糖酵解狀態(tài)能夠通過上調(diào)糖酵解關(guān)鍵酶的表達(dá)促進YAP蛋白活性的表達(dá),而Y... 

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分: YAP在肝癌組織與癌旁組織中的表達(dá)及其與HIF-1α的相關(guān)性分析
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 研究對象
        2.2 主要試劑和儀器
            2.2.1 主要試劑
            2.2.2 主要儀器
        2.3 主要實驗方法
            2.3.1 Western blotting實驗
            2.3.2 Real-time PCR實驗
            2.3.3 組織免疫熒光實驗
            2.3.4 細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白抽提實驗
            2.3.5 免疫組化
        2.4 統(tǒng)計分析
    3 結(jié)果
        3.1 YAP在肝癌組織中高表達(dá)且主要在肝癌細(xì)胞核中表達(dá)
        3.2 YAP與HIF-1α在肝癌組織中的表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)
    4 討論
第二部分: 低氧條件下YAP通過結(jié)合并穩(wěn)定HIF-1α蛋白上調(diào)PKM2表達(dá)的機制研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 細(xì)胞來源
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器
        2.2 主要實驗方法
            2.2.1 肝癌細(xì)胞系培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染
            2.2.2 Western bloting實驗
            2.2.3 Real-time PCR實驗
            2.2.4 細(xì)胞免疫熒光實驗
            2.2.5 細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白抽提實驗
            2.2.6 葡萄糖攝取檢測實驗
            2.2.7 乳酸檢測實驗
            2.2.8 細(xì)胞侵襲實驗
            2.2.9 細(xì)胞遷移實驗
            2.2.10 免疫共沉淀實驗(Co-IP)
            2.2.11 染色質(zhì)免疫共沉淀實驗(ChIP)
            2.2.12 熒光素酶報告基因?qū)嶒?br>        2.3 統(tǒng)計分析
    3 結(jié)果
        3.1 低氧激活YAP并促進YAP在肝癌細(xì)胞核內(nèi)表達(dá)
        3.2 低氧激活YAP并不依賴HIF-1α
        3.3 低氧促進肝癌細(xì)胞糖酵解發(fā)生
        3.4 YAP介導(dǎo)了低氧對肝癌細(xì)胞糖酵解的促進作用
        3.5 YAP結(jié)合并穩(wěn)定HIF-1α蛋白
        3.6 YAP-HIF-1α復(fù)合體促進PKM2的表達(dá)
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷



本文編號：3733633