本文關(guān)鍵詞：IL-1β對外周神經(jīng)系統(tǒng)華勒變性中施旺細胞的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：一、研究背景組織創(chuàng)傷修復(fù)是整形外科研究領(lǐng)域的傳統(tǒng)熱點和難點,而該領(lǐng)域內(nèi)的再生醫(yī)學(xué)研究已成為近年來的整形外科的重點研究方向。再生醫(yī)學(xué)的最終目的是使得受損的組織或器官修復(fù)再生。而機體損傷的修復(fù)與再生主要通過參與損傷修復(fù)的細胞去分化(Dedifferentiation)、轉(zhuǎn)分化(Transdifferentiation)和重編程(Reprogramming)。人作為哺乳動物,僅具備有限的組織和器官再生能力,如肝臟和血液。而一些非哺乳動物則具有非凡的再生能力,如斑馬魚和蠑螈等。這些非哺乳動物的可再生組織在創(chuàng)傷發(fā)生后,受損區(qū)域的成體細胞發(fā)生去分化和增殖,參與組織的修復(fù)再生。通過對斑馬魚等經(jīng)典的再生修復(fù)模型的研究,有學(xué)者提出組織再生的核心問題是新生組織的細胞來源,而參與再生的細胞主要來源于干細胞和去分化的成體細胞。以往再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究多集中于干細胞治療研究上。既往有學(xué)者研究表明,雖然干細胞移植治療能夠促進創(chuàng)傷愈合,但干細胞的移植并未本質(zhì)上改變創(chuàng)傷愈合的方式。干細胞移植治療只是促進了愈合的過程,其移植的干細胞主要是通過分泌多種生長因子促進創(chuàng)傷愈合的,其自身分化為新生組織的比例很低。而斑馬魚心肌再生機制中所涉及的“成體細胞的去分化及增殖”機制逐漸引起了研究者的濃厚興趣。在斑馬魚心肌局部受損后,成熟心肌細胞開始去分化,并重新進入細胞周期開始增殖,這一過程是斑馬魚心肌局部受損修復(fù)再生的基礎(chǔ)。這種“成體細胞的去分化及增殖”的組織再生機制與人體周圍神經(jīng)受損后修復(fù)再生過程有相似之處,即損傷修復(fù)過程與受損組織的主要成分細胞去分化及增殖密切相關(guān),即斑馬魚的心肌細胞和人體的施旺細胞(Schwann Cell)。施旺細胞是構(gòu)成周圍神經(jīng)系統(tǒng)的主要神經(jīng)膠質(zhì)細胞。施旺細胞參與了多種十分重要的周圍神經(jīng)生物學(xué)功能：參與神經(jīng)沖動傳導(dǎo),參與神經(jīng)的生長和再生,并具有營養(yǎng)神經(jīng)元,生產(chǎn)神經(jīng)細胞外介質(zhì),調(diào)節(jié)運動神經(jīng)活性以及介導(dǎo)抗原的作用。當(dāng)周圍神經(jīng)損傷后,發(fā)生一系列細胞和分子生物學(xué)變性-華勒氏變性(Wallerian degeneration)。華勒氏變性過程中,施旺細胞的去分化為神經(jīng)再生提供再生支架和神經(jīng)營養(yǎng)因子,以及引導(dǎo)軸突延伸并維持神經(jīng)元的活力,促進再生神經(jīng)的結(jié)構(gòu)和功能恢復(fù),施旺細胞的去分化是周圍神經(jīng)再生的基礎(chǔ)。因此,我們認為,對周神經(jīng)系統(tǒng)損傷后施旺細胞去分化的干預(yù)因素及其作用機制展開深入研究對于促進再生醫(yī)學(xué)的研究發(fā)展具有深遠的意義。需要注意的是,本研究所講華勒氏變性均是指外周神經(jīng)系統(tǒng)華勒氏變性,這并不表示中樞神經(jīng)系統(tǒng)不發(fā)生華勒氏變性。在中樞神經(jīng)系統(tǒng),雖然有與外周神經(jīng)系統(tǒng)施旺細胞和巨噬細胞相對應(yīng)的少突膠質(zhì)細胞(oligodendrocyte)和小膠質(zhì)細胞(microglia),在神經(jīng)組織受損后也會發(fā)生華勒氏變性,只是中樞神經(jīng)系統(tǒng)華勒氏變性的結(jié)果卻完全不同。中樞神經(jīng)系統(tǒng)華勒氏變性并不能像外周神經(jīng)系統(tǒng)華勒氏變性那樣清除髓鞘崩解的碎片,并不能形成組織損傷修復(fù)再生。在外周神經(jīng)系統(tǒng)華勒變性過程中,單核/巨噬細胞激活并聚集于損傷區(qū)域,巨噬細胞分泌包括IL-1β在內(nèi)的等多種炎癥因子,并與施旺細胞共同參與清除髓鞘崩解的碎片,參與華勒變性,并影響神經(jīng)再生的進程。并且,在單核/巨噬細胞激活并聚集于損傷區(qū)域之前,受損后的外周神經(jīng)組織即開始高表達包括IL-1β在內(nèi)的等多種炎癥因子。研究表明,IL-1β可誘導(dǎo)單核巨噬細胞遷移至損傷部位參與髓鞘碎片的清除以利于神經(jīng)再生。除了作用于單核巨噬細胞參與炎癥反應(yīng)以外,IL-1p還可通過直接或間接的途徑促進神經(jīng)元的存活。并且,IL-1β可增加神經(jīng)受損區(qū)域施旺細胞NGF mRNA的表達量及NGF的蛋白分泌量,而NGF具有促進神經(jīng)元存活及神經(jīng)突生長的作用。既往有研究者通過IL-1p早期干預(yù)大鼠坐骨神經(jīng)損傷模型,提示IL-1p通過促進損傷區(qū)域神經(jīng)元存活和神經(jīng)突生長,以促進外周神經(jīng)再生�？梢�,IL-1p在外周神經(jīng)損傷早期具有重要的作用。然而,上述研究并未涉及IL-1β對外周神經(jīng)再生過程中施旺細胞去分化的影響。既往卻有研究表明IL-1β通過c-Jun/AP-1通路促使軟骨細胞去分化。既往研究發(fā)現(xiàn),c-Jun于體內(nèi)及體外實驗中均可抑制施旺細胞髓鞘化,促使分化成熟施旺細胞發(fā)生去分化。在小鼠動物模型中,選擇性敲除施旺細胞中的c-Jun基因,雖然不會影響外周神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育和生長,但會使外周神經(jīng)喪失再生能力；致使華勒氏變性過程中施旺細胞的分子表型及Bungner's帶的結(jié)構(gòu)異常,以及影響神經(jīng)元的存活,軸索的再生等。小鼠脊髓損傷模型中,施旺細胞中c-Jun缺失會導(dǎo)致外周神經(jīng)損傷后,神經(jīng)元壞死量增多,以及神經(jīng)膠質(zhì)細胞源性的神經(jīng)營養(yǎng)因子GDNF等神經(jīng)營養(yǎng)因子表達降低。同時又有研究表明,c-Jun跟細胞凋亡的關(guān)系密切。采用顯微注射特異性c-Jun抗體干擾其功能,或采用去除轉(zhuǎn)錄激活區(qū)保留DNA結(jié)合區(qū)的負顯性c-Jun突變體阻斷c-Jun的轉(zhuǎn)錄活性,這些降低c-Jun活性的干預(yù)均可有效地阻滯神經(jīng)元凋亡的發(fā)生。并有研究認為c-Jun的轉(zhuǎn)錄活化是誘導(dǎo)神經(jīng)元凋亡所必需。這些研究結(jié)果及觀點雖有所不同,但仍然可以看到,c-Jun相關(guān)通路在周圍神經(jīng)再生及施旺細胞去分化、增殖、凋亡等方面具有十分關(guān)鍵的調(diào)控作用。既往文獻提示我們?nèi)A勒變性早期IL-1p在周圍神經(jīng)中表達升高,而此階段又恰是施旺細胞去分化及增殖的重要時段,同時IL-1p在其他細胞模型的研究中又可通過c-Jun/AP-1通路促進成熟細胞去分化。由此,我們猜測IL-1p在外周神經(jīng)損傷再生修復(fù)過程中對施旺細胞去分化、增殖及凋亡具有重要的調(diào)控作用,并且可能是通過c-Jun等相關(guān)通路發(fā)揮作用。既往研究外周神經(jīng)損傷后華勒變性主要集中在體內(nèi)模型中,體內(nèi)模型中對華勒變性的影響因素眾多,而單純的體外培養(yǎng)施旺細胞原代,使得施旺細胞脫離了神經(jīng)軸索對其的影響,也很難真實反映干預(yù)因素對外周神經(jīng)系統(tǒng)中施旺細胞的影響。因此本研究應(yīng)用外周神經(jīng)華勒變性體外模型,該模型主要是參照Thomson et al.于1993報道的體外華勒氏變性模型(in-vitro Wallerian Degeneration model),模型中施旺細胞可表現(xiàn)出與體內(nèi)華勒氏變性模型中相似的MPZ等髓鞘化相關(guān)基因表達降低,而p75NTR等非髓鞘化相關(guān)基因表達升高。該模型后經(jīng)Lee, H. K. et al.采用并改進,應(yīng)用于Proteasome抑制施旺細胞去分化的研究。以及Jung, J. et al.和Shin, Y. K. et al.采用,同樣也是用于研究華勒氏變性過程中施旺細胞去分化的影響因素。由此,可見體外華勒氏變性模型具有較好可靠性。因此,我們采用該體外華勒氏變性模型,并根據(jù)需要做了改進,以研究IL-1p對施旺細胞的影響,重點關(guān)注華勒變性早期IL-1p對施旺細胞去分化、增殖及凋亡影響,并研究探討相關(guān)的作用機制,希望以此為窗口來探尋局部組織損傷后炎癥因子對成體細胞去分化及組織再生的影響。二、研究目的通過改進后的大鼠坐骨神經(jīng)體外華勒氏變性模型,進一步確認該模型的可靠性,并以該模型為基礎(chǔ),研究外周神經(jīng)系統(tǒng)華勒變性早期施旺細胞IL-1p的表達情況,以及IL-1p對施旺細胞去分化、增殖及凋亡影響,并研究探討相關(guān)的作用機制,希望以此為窗口來探尋局部組織損傷后炎癥因子對成體細胞去分化及組織再生的影響。三、研究方法1.體外華勒氏變性模型的制備及分組干預(yù)體外華勒氏變性模型的制備方法主要是參照Thomson et al.于1993報道的vitro Wallerian degeneration model制備方法,并根據(jù)我們的實驗?zāi)繕?biāo)進行了改進。即將去除神經(jīng)外膜的大鼠坐骨神經(jīng)分成絮狀神經(jīng)絲后體外組織培養(yǎng)。離體后的坐骨神經(jīng)組織即開始發(fā)生華勒氏變性,并且此模型中的主要細胞成分只有施旺細胞。實驗中,根據(jù)實驗?zāi)康牟煌?給予體外華勒氏變性模型不同濃度IL-1p干預(yù),并于不同時間點收集樣本。2. Real time PCR測定體外華勒氏變性模型中不同時間點(6 H、12H、24H)施旺細胞IL-1β mRNA表達量。3. Elisa測定體外華勒氏變性模型中不同時間點(12H、24H、36H、48H)施旺細胞IL-1p蛋白的表達量。4.體外華勒氏變性模型不同濃度IL-1β干預(yù)(0ng/ml、5ng/ml和50ng/ml)48小時后,免疫熒光染色標(biāo)記施旺細胞去分化指標(biāo)p75NTR和分化指標(biāo)MPZ,并且Western Blot分別檢測并量化比較p75NTR和MPZ蛋白表達量。5.體外華勒氏變性模型中0 ng/ml(對照組)或5ng/ml IL-1β干預(yù)后,Real time PCR檢測不同時間點(6 H、12 H、24 H)去分化指標(biāo)p75NTR和分化指標(biāo)MPZ mRNA表達量。6.體外華勒氏變性模型不同濃度IL-1β干預(yù)(0 ng/ml和5 ng/ml)24小時,免疫熒光染色標(biāo)記施旺細胞轉(zhuǎn)錄因子c-Jun,并統(tǒng)計比較c-Jun陽性率；Western Blot檢測進一步量化比較轉(zhuǎn)錄因子c-Jun表達量差異。7.體外華勒氏變性模型中0 ng/ml(對照組)或5ng/ml IL-1β干預(yù)后,Real time PCR檢測不同時間點(6 H、12 H、24 H)轉(zhuǎn)錄因子c-Jun mRNA表達量。8.體外華勒氏變性模型中0 ng/ml(對照組)或5ng/ml IL-1β干預(yù)后,AP-1activity assay檢測不同時間點(6 H、12 H、24H)核轉(zhuǎn)錄激活蛋白1(AP-1)的活性相對值。9.體外華勒氏變性模型不同濃度IL-1p干預(yù)(0 ng/ml和5 ng/ml)48小時,免疫熒光染色標(biāo)記施旺細胞增殖標(biāo)記Ki67,并統(tǒng)計比較Ki67陽性率(即細胞增殖率)。10.體外華勒氏變性模型不同濃度IL-1β干預(yù)(0 ng/ml和5 ng/ml)48小時,Tunel法染色標(biāo)記施旺細胞細胞凋亡情況,并統(tǒng)計各組Tunel陽性率(即細胞凋亡率)。11.體外華勒氏變性模型不同濃度IL-1p干預(yù)(0ng/ml和5ng/ml)24小時,Western Blot檢測細胞凋亡促進蛋白Bax和細胞凋亡抑制蛋白Bcl-2蛋白表達量,統(tǒng)計比較Bcl-2和Bax表達量以及Bcl-2/Bax比值。12.數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計學(xué)分析方法：實驗所得計量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準差表示(mean±SD),每一實驗重復(fù)三次(n=3)。采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理；兩樣本均數(shù)間比較用兩獨立樣本t檢驗；多組樣本均數(shù)間比較采用單因素方差分析(one-way ANOV A),如有顯著性差異,且方差齊性,則采用LSD(Least Significant Difference)檢驗進行統(tǒng)計分析；p0.05認為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。四、結(jié)果1.體外華勒氏變性模型中施旺細胞IL-1βmRNA和IL-1p蛋白表達量變化去除神經(jīng)外膜的大鼠坐骨神經(jīng)組織離體后置于體外華勒氏變性模型中進行培養(yǎng),于不同時間點收集樣本。Real time PCR檢測不同時間點(6H、12H、24H)施旺細胞IL-1βmRNA表達量檢測結(jié)果采用單因素方差分析,F=24.384,p0.001；Elisa檢測不同時間點(12 H、24 H、36H、8H)施旺細胞IL-1β蛋白表達量,檢測結(jié)果采用單因素方差分析,F=169.261,p0.001；且方差齊性,隨后LSD法檢驗不同時間點與對照組OH之間的表達差異,大鼠坐骨神經(jīng)受損離體后華勒氏變性過程中施旺細胞IL-1βmRNA和IL-1β蛋白表達量逐漸增高,IL-1βmRNA于12小時較對照組升高了近7倍達到高峰期,隨后開始有所降低；IL-1β蛋白分泌量逐漸增高,于36小時較對照組升高了近4倍達到高峰期,隨后開始有所降低。2.IL-1β干預(yù)后體外華勒氏變性模型中p75NTR和MPZ表達情況給于體外華勒氏變性模型不同濃度IL-1β干預(yù)(0 ng/ml、5 ng/ml和50ng/ml)48小時,免疫熒光染色標(biāo)記施旺細胞去分化指標(biāo)p75NTR和分化指標(biāo)MPZ。觀察顯示,5ng/ml IL-1β干預(yù)后施旺細胞去分化指標(biāo)p75NTR表達量較0ng/ml組有所升高,施旺細胞分化指標(biāo)MPZ表達量較0ng/ml組有所降低；而50ng/ml IL-1β干預(yù)后,p75NTR和MPZ表達量較0 ng/ml組差異并不顯著；Western Blot檢測量化比較不同濃度組p75NTR和MPZ表達量差異(單因素方差分析,p75NTR檢測結(jié)果中F=9.620, p=0.013; MPZ檢測結(jié)果中F=9.604,p=0.013；且統(tǒng)計顯示方差齊性,隨后LSD法檢驗不同濃度組與對照組0 ng/ml之間的表達差異),5 ng/ml濃度組較對照組0 ng/ml中p75NTR表達量顯著升高(p=0.008),MPZ表達量顯著降低(p=0.005)；50ng/ml濃度組較對照組0 ng/ml中p75NTR以及MPZ表達量差別無統(tǒng)計學(xué)意義。Western Blot檢測與免疫熒光染色結(jié)果一致。3.IL-1β干預(yù)后體外華勒氏變性模型中p75NTR和MPZ mRNA表達情況予體外華勒氏變性模型中0 ng/ml(對照組)或5ng/ml IL-1β干預(yù)后,于不同時間點(6H、12H、24H)收集樣本, Real time PCR檢測p75NTR和MPZ mRNA表達量,檢測所得結(jié)果采用兩樣本Student t檢驗統(tǒng)計不同時間點內(nèi)5 ng/ml干預(yù)組與對照組之間p75NTR和MPZ mRNA表達量的差異,檢測結(jié)果顯示p75NTR mRNA表達量隨著時間推移逐漸升高,5 ng/ml干預(yù)組p75NTR mRNA表達量較對照組顯著升高,干預(yù)6小時后干預(yù)組p75NTR mRNA表達量較對照組升高了近5倍(t=-17.642,p0.001),干預(yù)12H和24H后,5ng/ml IL-1β干預(yù)組p75NTR mRNA表達量較對照組均升高了近2.5倍(兩組t值分別為-8.578和-9.053,p0.001); MPZ mRNA表達量隨著時間推移逐漸降低,5 ng/ml干預(yù)組MPZmRNA表達量較對照組顯著降低。干預(yù)后的三個時間點(6H、12H、24H)5ng/mlIL-1β干預(yù)組MZP mRNA表達量較對照組降低約50%(6H VS OH, t=6.416, p=0.0030.01; 12H VS OH,t=5.556,p=0.0050.01;24H VS OH,t=7.913,p0.001), Real time PCR檢測結(jié)果顯示,IL-1β干預(yù)后體外華勒氏變性模型中施旺細胞p75NTR mRNA表達量顯著升高,而MPZ mRNA表達量顯著降低。4.IL-1β干預(yù)后體外華勒氏變性模型中轉(zhuǎn)錄因子c-Jun表達情況給于體外華勒氏變性模型不同濃度IL-1β干預(yù)(0 ng/ml和5 ng/ml)24小時,免疫熒光染色標(biāo)記施旺細胞轉(zhuǎn)錄因子c-Jun,觀察可見轉(zhuǎn)錄因子c-Jun均主要位于細胞核內(nèi),即均處于其功能部位,5 ng/ml干預(yù)組轉(zhuǎn)錄因子c-Jun表達量較0 ng/ml組有所升高；量化比較兩組之間施旺細胞的細胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子c-Jun陽性率,5 ng/ml干預(yù)組轉(zhuǎn)錄因子c-Jun陽性率較0 ng/ml組顯著升高(t=-3.868,p=0.018)。Western Blot檢測進一步量化比較IL-1β干預(yù)后體外華勒氏變性模型中轉(zhuǎn)錄因子c-Jun表達量差異,分析顯示5 ng/ml干預(yù)組轉(zhuǎn)錄因子c-Jun蛋白表達量較0 ng/ml組顯著升高(t=-4.508,p=0.011)。Western Blot檢測與免疫熒光染色結(jié)果一致,證實了,適當(dāng)濃度(5 ng/ml) IL-1β可促進坐骨神經(jīng)華勒氏變性過程中施旺細胞細胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子c-Jun表達。5.IL-1β干預(yù)后體外華勒氏變性模型中c-Jun mRNA表達情況予體外華勒氏變性模型中0 ng/ml(對照組)或5 ng/ml IL-1β干預(yù)后,于不同時間點(6 H、12 H、24 H)收集樣本,Real time PCR檢測IL-1p干預(yù)后體外華勒氏變性模型中c-Jun mRNA表達量。統(tǒng)計分析于不同時間點(6 H、12 H、24 H)內(nèi)5ng/ml IL-1β干預(yù)組與對照組之間c-Jun mRNA表達量的差異。結(jié)果顯示,去除神經(jīng)外膜的坐骨神經(jīng)離體后于體外華勒氏變性模型中c-Jun mRNA表達量隨著時間推移逐漸升高,5 ng/ml干預(yù)組較對照組顯著升高,干預(yù)6小時后,5ng/ml IL-1β干預(yù)組c-Jun mRNA表達量較對照組升高約150%,且統(tǒng)計差異顯著(t=-8.733,p0.001)；干預(yù)12小時和24小時后,5ng/ml IL-1β干預(yù)組c-Jun mRNA表達量較對照組均升高約50%,且統(tǒng)計差異顯著(12小時組t=-3.498,p=0.025；24小時組t=-3.716,p=0.022). Real time PCR基因水平檢測結(jié)果與Western Blot、免疫熒光染色的蛋白水平檢測結(jié)果一致�？梢�,適當(dāng)濃度(5 ng/ml) IL-1β可促進坐骨神經(jīng)華勒氏變性過程中施旺細胞細胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子c-Jun表達。6.IL-1β干預(yù)后體外華勒氏變性模型中AP-1的活性變化情況予體外華勒氏變性模型中0 ng/ml(對照組)或5ng/ml IL-1β干預(yù)后,于不同時間點(6 H、12 H、24 H)收集樣本,AP-1 activity assay檢測IL-1β干預(yù)后體外華勒氏變性模型中核轉(zhuǎn)錄激活蛋白1 (activation pmtein, AP-1)的活性相對值。檢測所得結(jié)果采用兩樣本Student t檢驗,統(tǒng)計分析于不同時間點(6 H、12 H、24 H)內(nèi)5 ng/ml IL-1β干預(yù)組與對照組之間AP-1活性差異。結(jié)果顯示,去除神經(jīng)外膜的坐骨神經(jīng)離體后于體外華勒氏變性模型中AP-1的活性隨著時間推移逐漸升高,5 ng/ml干預(yù)組較對照組升高更加顯著,干預(yù)6小時后,5 ng/ml IL-1β干預(yù)組AP-1的活性較對照組升高約20%,然而統(tǒng)計差異并不顯著(t=-1.359,p=0.246)；干預(yù)12小時后,5 ng/ml IL-1β干預(yù)組AP-1的活性較對照組升高約50%,統(tǒng)計差異顯著(t=-4.529,p=0.011)；干預(yù)24小時后,5 ng/ml IL-1β干預(yù)組AP-1的活性較對照組升高約80%,統(tǒng)計差異顯著(t=-3.952,p=0.017)�？梢�,適當(dāng)濃度(5 ng/ml) IL-1β不僅促進坐骨神經(jīng)華勒氏變性過程中施旺細胞細胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子c-Jun表達,而且增加華勒氏變性過程中施旺細胞AP-1的活性。7.IL-1β干預(yù)后體外華勒氏變性模型中細胞增殖標(biāo)記Ki67表達情況給于體外華勒氏變性模型不同濃度IL-1β干預(yù)(0 ng/ml和5 ng/ml)48小時,免疫熒光染色標(biāo)記施旺細胞增殖標(biāo)記Ki67,觀察可見Ki67均主要位于細胞核內(nèi),且5 ng/ml干預(yù)組Ki67表達量較0 ng/ml組有所升高；量化比較兩組之間施旺細胞的細胞核內(nèi)Ki67陽性率,5 ng/ml干預(yù)組Ki67陽性率較0 ng/ml組顯著升高(t=-6.264,p=0.003)。免疫熒光染色顯示,適當(dāng)濃度(5 ng/ml) IL-1β可促進坐骨神經(jīng)華勒氏變性過程中施旺細胞的增殖。8.IL-1β干預(yù)后體外華勒氏變性模型中細胞凋亡情況給于體外華勒氏變性模型不同濃度IL-1β干預(yù)(0 ng/ml和5 ng/ml)'48小時,Tunel法染色標(biāo)記施旺細胞細胞凋亡情況,并統(tǒng)計各組Tunel陽性率(即細胞凋亡率)的差異,顯示5 ng/ml干預(yù)組凋亡率較0 ng/ml組顯著降低(t=4.274,p=0.013)。Tunel法細胞凋亡檢測顯示,適當(dāng)濃度(5 ng/ml) IL-1β可抑制坐骨神經(jīng)華勒氏變性過程中施旺細胞的凋亡。9.IL-1β干預(yù)后體外華勒氏變性模型中Bax和Bcl-2表達情況給于體外華勒氏變性模型不同濃度IL-1β干預(yù)(0 ng/ml和5 ng/ml)24小時,Western Blot檢測細胞凋亡促進蛋白Bax和細胞凋亡抑制蛋白Bcl-2蛋白表達量,顯示5 ng/ml濃度組較對照組0 ng/ml中施旺細胞凋亡抑制蛋白Bcl-2表達量顯著升高(t=-3.456,p=0.026),凋亡促進蛋白Bax表達量顯著降低(t=3.052,p=0.038),且Bcl-2/Bax蛋白表達量比例顯著升高(t=-4.397,p=0.012)。這與Tunel法凋亡細胞染色結(jié)果一致�？梢�,適當(dāng)濃度(5 ng/ml) IL-1β可增加凋亡抑制蛋白Bcl-2表達量,降低凋亡促進蛋白Bax表達量,從而抑制坐骨神經(jīng)華勒氏變性過程中施旺細胞凋亡。五、結(jié)論本實驗研究顯示,體外華勒氏變性模型是研究周圍神經(jīng)系統(tǒng)華勒氏變性過程中干預(yù)施旺細胞去分化影響因素的有效模型。通過該模型,我們研究進一步證實華勒氏變性早期施旺細胞IL-1β mRNA表達量升高,IL-1β蛋白分泌量增多,華勒氏變性可視為外周神經(jīng)系統(tǒng)應(yīng)對神經(jīng)損傷的固有免疫反應(yīng)。通過該模型給予相應(yīng)干預(yù),我們研究發(fā)現(xiàn)適當(dāng)濃度的IL-1β具有促進華勒氏變性過程中施旺細胞去分化的作用,以及促進華勒氏變性過程中施旺細胞清除髓鞘碎片,從而促進周圍神經(jīng)再生,而過高濃度的IL-1β對華勒氏變性過程中施旺細胞去分化以及髓鞘碎片的清除并無促進作用。本研究證實華勒氏變性早期適當(dāng)濃度的IL-1β具有促進施旺細胞轉(zhuǎn)錄因子c-Jun mRNA表達量,以及促進施旺細胞的細胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子c-Jun的高表達,并促進施旺細胞內(nèi)AP-1活化；并認為華勒氏變性早期IL-1β通過c-Jun/AP-1通路促進施旺細胞去分化,以及促進施旺細胞清除髓鞘碎片,從而促進周圍神經(jīng)再生。本研究證實華勒氏變性早期適當(dāng)濃度的IL-1β具有促進施旺細胞增殖,以及增加Bcl-2表達量,減低Bax表達量,升高Bcl-2/Bax比值,抑制施旺細胞凋亡的積極作用；并認為IL-1β通過促進c-Jun/AP-1通路活化促進施旺細胞增殖,通過Bcl-2/Bax通路抑制施旺細胞凋亡。
【關(guān)鍵詞】：周圍神經(jīng) 再生醫(yī)學(xué) 華勒氏變性 施旺細胞 IL-1β p75NTR MPZ去分化 細胞增殖細胞凋亡 c-Jun AP-1 Ki67 Bcl-2 Bax
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R622
【目錄】：

• 摘要3-13
• ABSTRACT13-25
• 第一章 外周神經(jīng)系統(tǒng)華勒變性中IL-1β對施旺細胞去分化的影響25-64
• 前言25-29
• 1. 材料與方法29-40
• 2. 結(jié)果40-53
• 3. 討論53-57
• 4. 結(jié)論57
• 參考文獻57-64
• 第二章 外周神經(jīng)系統(tǒng)華勒變性中IL-1β促進施旺細胞去分化的作用機制研究64-89
• 前言64-65
• 1. 材料與方法65-73
• 2. 結(jié)果73-82
• 3. 討論82-85
• 4 結(jié)論85
• 參考文獻85-89
• 第三章 外周神經(jīng)系統(tǒng)華勒變性中IL-1β對施旺細胞增殖及凋亡的影響89-113
• 前言89-90
• 1. 材料與方法90-95
• 2. 結(jié)果95-103
• 3. 討論103-107
• 4. 結(jié)論107
• 參考文獻107-113
• 附錄113-114
• 成果114-115
• 統(tǒng)計學(xué)審稿證明115-116
• 致謝116-117

  本文關(guān)鍵詞：IL-1β對外周神經(jīng)系統(tǒng)華勒變性中施旺細胞的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：368016