PD-1/PD-L1免疫檢查點抑制劑的應用顯著改善了非小細胞肺癌（NSCLC）患者的治療,已成為NSCLC患者治療不可或缺的一部分,改變了NSCLC的治療格局。然而,大多數(shù)患者仍不能從中獲益,尤其是某些驅動基因突變陽性的患者。已有臨床研究證實,腫瘤PD-L1表達水平越高,NSCLC患者越可能從PD-1/PD-L1抑制劑中獲益。故腫瘤PD-L1表達可作為評估PD-1/PD-L1抑制劑療效的預測因子,用于篩選敏感患者。肝激酶B1（LKB1）亦稱絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶11（STK11）,可磷酸化激活14種AMP依賴的蛋白激酶（AMPK）超家族成員。15%-35%的NSCLC患者存在LKB1突變,后者常與鼠類肉瘤病毒癌基因（KRAS）突變共同發(fā)生,是NSCLC中常見的驅動基因突變。先前的臨床觀察發(fā)現(xiàn),KRAS/LKB1共突變的NSCLC患者中PD-L1表達水平低,PD-1/PD-L1抑制劑在該類患者中的療效差。然而,LKB1是否可直接調控NSCLC中PD-L1的表達及LKB1突變/缺失腫瘤內PD-L1低表達在其抵抗PD-1/PD-L1阻斷治療中的作用尚不清楚。在本研究中,我們通過癌癥基因組數(shù)據(jù)... 

【文章頁數(shù)】：132 頁

【學位級別】：博士

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中文摘要
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英文縮略詞表
引言
第1章 文獻綜述
    1.1 非小細胞肺癌及其治療
    1.2 免疫檢查點治療
        1.2.1 腫瘤免疫逃逸
            1.2.1.1 腫瘤免疫循環(huán)
            1.2.1.2 腫瘤免疫監(jiān)視
        1.2.2 免疫檢查點分子與腫瘤免疫逃逸
            1.2.2.1 CTLA-4
            1.2.2.2 PD-1
        1.2.3 免疫檢查點抑制劑
            1.2.3.1 抗CTLA-4單克隆抗體
            1.2.3.2 抗PD-1/PD-L1單克隆抗體
            1.2.3.3 抗PD-1/PD-L1單克隆抗體的適應癥
    1.3 非小細胞肺癌與免疫檢查點治療
        1.3.1 PD-1/PD-L1阻斷治療在非小細胞肺癌治療中的應用
            1.3.1.1 Pembrolizumab
            1.3.1.2 Nivolumab
            1.3.1.3 Atezolizumab
            1.3.1.4 Durvalumab
            1.3.1.5 Avelumab
        1.3.2 非小細胞肺癌中PD-1/PD-L1阻斷治療的影響因素
            1.3.2.1 PD-L1
                1.3.2.1.1 PD-L1 表達對PD-1/PD-L1 阻斷治療的影響
                1.3.2.1.2 PD-L1表達檢測及其局限性
                1.3.2.1.3 PD-L1表達的調節(jié)
            1.3.2.2 腫瘤免疫微環(huán)境
            1.3.2.3 驅動基因突變
    1.4 肝激酶B1(LKB1)與非小細胞肺癌
        1.4.1 LKB1的上下游信號
        1.4.2 LKB1在非小細胞肺癌中的作用
第2章 實驗材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞系
        2.1.2 實驗動物
        2.1.3 非小細胞肺癌組織樣本
        2.1.4 實驗儀器
        2.1.5 主要試劑及耗材
        2.1.6 主要溶液的配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細胞復蘇與培養(yǎng)
        2.2.2 細胞傳代
        2.2.3 細胞凍存
        2.2.4 細胞計數(shù)及藥物處理
            2.2.4.1 細胞計數(shù)
            2.2.4.2 藥物處理
        2.2.5 蛋白提取
        2.2.6 蛋白免疫印跡(western blot)
        2.2.7 RNA提取
        2.2.8 逆轉錄
        2.2.9 實時熒光定量PCR(q RT-PCR)
        2.2.10 PD-L1 啟動子DNA甲基化分析
        2.2.11 皮下腫瘤模型的建立及藥物治療
        2.2.12 石蠟切片及染色
            2.2.12.1 HE染色
            2.2.12.2 免疫組織化學染色
    2.3 統(tǒng)計分析
第3章 實驗結果
    3.1 NSCLC患者中PD-L1 表達與LKB1 正相關
    3.2 LKB1 上調NSCLC細胞中PD-L1 的表達
    3.3 AMPK信號參與NSCLC細胞中LKB1對PD-L1 表達的調節(jié)
        3.3.1 AMPK激活逆轉LKB1 沉默所致的PD-L1 表達下調
        3.3.2 抑制AMPK減少LKB1 誘導的PD-L1 表達上調
    3.4 LKB1 沉默對PD-L1 啟動子甲基化的影響
    3.5 LKB1 通過KEAP1/NRF2 信號上調PD-L1 的轉錄
        3.5.1 LKB1對KEAP1/NRF2 信號的影響
        3.5.2 KEAP1/NRF2 信號在LKB1對PD-L1 轉錄調節(jié)中的作用
    3.6 AMPK激活劑二甲雙胍與抗PD-1 單克隆抗體的聯(lián)合抗腫瘤作用
    3.7 LKB1沉默致抑制性腫瘤免疫微環(huán)境
        3.7.1 二甲雙胍對LKB1 沉默腫瘤中PD-L1 表達的影響
        3.7.2 LKB1沉默對腫瘤內免疫細胞趨化因子表達的影響
第4章 討論
第5章 結論
參考文獻
作者簡介及在學期間所取得的科研成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]2014年中國肺癌發(fā)病和死亡分析[J]. 孫可欣,鄭榮壽,曾紅梅,張思維,鄒小農,顧秀瑛,夏昌發(fā),楊之洵,李賀,陳萬青,赫捷.  中華腫瘤雜志. 2018 (11)
[2]Cancer incidence and mortality in China, 2014[J]. Wanqing Chen,Kexin Sun,Rongshou Zheng,Hongmei Zeng,Siwei Zhang,Changfa Xia,Zhixun Yang,He Li,Xiaonong Zou,Jie He.  Chinese Journal of Cancer Research. 2018(01)



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