目的:探索半枝蓮、白花蛇舌草、半枝蓮+白花蛇舌草提取物在體內外水平上的抗肝細胞癌（HCC）活性、抗HBV活性及從circ RNAs調控角度,探討半白提取物對HCC生長的可能分子作用機制,為半白提取物治療HCC的作用機制研究提供理論基礎。方法:本研究采用完全隨機的實驗設計類型,1.分別通過乙醇加熱回流的方法制備半枝蓮、白花蛇舌草、半枝蓮+白花蛇舌草提取物,并進行總黃酮及其活性成分木犀草素和芹菜素含量測定;2.通過CCK-8、平板克隆形成、流式細胞術、Transwell小室、細胞免疫熒光及裸鼠皮下接種Hep3B移植瘤模型等實驗,明確半白提取物對HBV相關性Hep G2.2.15和Hep3B細胞生長、侵襲、轉移、HBV活性及裸鼠移植瘤的影響;3.通過高通量測序技術對circ RNAs的差異表達進行初步檢測,觀察半白提取物調控Hep3B細胞circ RNAs差異表達譜變化,應用生物信息學方法預測靶基因、GO功能和KEGG信號通路,并構建circ RNA-mi RNA-gene共表達網(wǎng)絡圖。結果:1.半枝蓮、白花蛇舌草及半枝蓮+白花蛇舌草提取物的總黃酮含量分別為（5.69±0.34）%、（2.4... 

【文章來源】：上海中醫(yī)藥大學上海市

【文章頁數(shù)】：135 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
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中文摘要
Abstract
引言
第一部分 半白提取物對肝細胞癌體內外生長的影響
    1 材料與方法
        1.1 藥物、細胞株和動物
        1.2 主要試劑和溶液配制
        1.3 主要儀器和耗材
        1.4 半枝蓮和白花蛇舌草乙醇提取物的制備
        1.5 細胞培養(yǎng)
        1.6 CCK-8實驗
        1.7 平板克隆形成實驗
        1.8 細胞周期
        1.9 細胞凋亡
        1.10 Western Blot測定相關蛋白的表達
        1.11 細胞劃痕實驗
        1.12 Transwell小室遷移和侵襲實驗
        1.13 細胞形態(tài)和自噬小體超微結構的觀察
        1.14 免疫熒光檢測自噬相關蛋白的表達
        1.15 RT-PCR檢測細胞中HBsAg、HBV-DNA的表達
        1.16 裸鼠成瘤實驗
        1.17 統(tǒng)計學處理
    2 結果
        2.1 半枝蓮和白花蛇舌草乙醇提取物的制備
        2.2 半白提取物對HepG2.2.15和Hep3B細胞生長的影響
        2.3 半白提取物對細胞平板克隆的影響
        2.4 半白提取物對細胞周期的影響
        2.5 半白提取物對細胞凋亡的影響
        2.6 半白提取物對細胞增殖和凋亡相關蛋白表達的影響
        2.7 半白提取物對細胞劃痕愈合的影響
        2.8 半白提取物對細胞Transwell遷移的影響
        2.9 半白提取物對細胞Transwell侵襲的影響
        2.10 半白提取物對細胞形態(tài)和自噬體超微結構的影響
        2.11 半白提取物對細胞自噬相關蛋白表達的影響
        2.12 半白提取物對裸鼠致瘤性的影響
        2.13 半白提取物對細胞、肝組織、血清和移植瘤中HBV活性的影響
第二部分 半白提取物對circRNAs差異表達的影響
    1 材料與方法
        1.1 藥物和細胞株
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
        1.4 樣品及分組信息
        1.5 樣品準備
        1.6 文庫構建
        1.7 簇生成和測序
        1.8 生物信息學分析
    2 結果
        2.1 circRNAs轉錄組比對
        2.2 差異circRNAs表達譜和鑒定
        2.3 差異circRNAs聚類分析
        2.4 差異表達circRNAs來源基因GO功能分析
        2.5 差異表達circRNAs來源基因KEGG通路分析
        2.6 circRNA-miRNA相互作用預測
        2.7 circRNA-miRNA-gene共表達網(wǎng)絡構建
        2.8 circRNAs可視化
討論
    1 現(xiàn)代醫(yī)學對肝細胞癌的認識
        1.1 流行病學研究
        1.2 發(fā)病機理
        1.3 肝細胞癌的治療
    2 中醫(yī)藥抗肝細胞癌研究概述
        2.1 中醫(yī)藥抗肝細胞癌機制的研究
        2.2 中醫(yī)藥抗肝細胞癌的現(xiàn)狀
    3 本次研究的理論和實驗基礎
        3.1 半枝蓮治療肝細胞癌的臨床及實驗研究
        3.2 白花蛇舌草治療肝細胞癌的臨床及實驗研究
        3.3 半枝蓮和白花蛇舌草抗肝癌的研究基礎
        3.4 CircRNAs對肝細胞癌的研究意義
        3.5 從CircRNAs角度研究半白提取物影響HCC生長的背景
    4 本次研究結果分析
        4.1 半白提取物對肝細胞癌體內外生長的結果分析
        4.2 半白提取物對circRNAs差異表達的結果分析
    5 不足和展望
創(chuàng)新點
結論
致謝
參考文獻
附錄
    附錄一 :HepG2.2.15細胞部分結果
    附錄二 :文庫制備的接頭和引物
    附錄三 :綜述 半枝蓮和白花蛇舌草抗肝細胞癌作用及機制的研究進展
        參考文獻
    附錄四 :在校期間發(fā)表學術論文、獲獎情況及參加學術會議


【參考文獻】：
期刊論文
[1]白花蛇舌草和半枝蓮總黃酮提取工藝優(yōu)化及抗氧化性研究[J]. 張蜀艷,蒲建萍,李政.  食品研究與開發(fā). 2019(04)
[2]白花蛇舌草中黃酮、多酚、多糖提取工藝及抗氧化研究[J]. 楊新周,田孟華,楊子仙,馬艷粉,田先嬌.  化學研究與應用. 2019(01)
[3]原發(fā)性肝癌證型分布及用藥分析[J]. 錢麗麗,趙向麗,馮曉軍,黃雪,張樹輝.  河南中醫(yī). 2018(08)
[4]姜黃素通過活化PI3K/Akt信號通路逆轉肝癌耐藥細胞株Bel7402/ADR的耐藥性[J]. 魏蔚,劉玉華.  中國老年學雜志. 2018(12)
[5]半枝蓮水提液和去納米顆粒水提液在體內外抗肝腫瘤作用的對比研究[J]. 黃新偉,鄭建華,陳文濱,程金生.  中國醫(yī)院用藥評價與分析. 2018(05)
[6]一貫煎治療肝癌的分子機制生物信息學分析[J]. 單思,謝斌,嚴小軍,劉紅寧.  中華中醫(yī)藥雜志. 2018(05)
[7]姜黃素聯(lián)合聲光動力療法對人肝癌HepG2細胞的作用及機制研究[J]. 朱文婷,許桐瑛,李隆敏,王玉鳳,楊維,胡佳荷,謝蕊,白玉賢.  中國激光醫(yī)學雜志. 2018(02)
[8]中藥半枝蓮有效成分抗腫瘤作用機制研究進展[J]. 吳曉龍,崔思遠,王琰,徐瑞榮.  中華中醫(yī)藥雜志. 2018(04)
[9]央芪膏外敷配合深部熱療對中晚期肝癌患者生存質量、免疫功能及Survivin蛋白的影響[J]. 唐萬和,王熙,余智勇,周勇,孫易娜,何威華,佘茁萃,盧舜,王紅榮,李娜,唐思思.  中醫(yī)學報. 2018(02)
[10]白花蛇舌草對肝癌的作用機制研究[J]. 陳晨,張吉菲,房鑫.  河南中醫(yī). 2018(01)

博士論文
[1]索拉菲尼聯(lián)合薏苡仁油治療肝細胞肝癌的療效及機制研究[D]. 陳琳.蘭州大學 2018
[2]基于c-FLIP和內質網(wǎng)應激通路相互作用探討解毒方改善索拉非尼耐藥的作用機制[D]. 劉棟.第二軍醫(yī)大學 2017
[3]小柴胡湯調控miR-122逆轉肝癌多藥耐藥的作用機制[D]. 趙錦燕.福建中醫(yī)藥大學 2016
[4]人肝細胞癌發(fā)生機制的研究[D]. 徐立斌.中國協(xié)和醫(yī)科大學 2005

碩士論文
[1]乙肝病毒X蛋白對肝癌HepG2細胞DNA雙鏈斷裂修復的影響[D]. 劉慶.華中科技大學 2011



本文編號：3643391