本文關(guān)鍵詞：Toll樣受體7激活對(duì)胰腺癌細(xì)胞株（BxPC-3）增殖、遷移與凋亡的影響及機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：近年來(lái),胰腺癌在惡性腫瘤中的發(fā)病率及死亡率均呈現(xiàn)明顯上升趨勢(shì)。由于其起病隱匿、臨床早期表現(xiàn)缺乏特征性,目前篩查還缺乏有效手段,大多數(shù)胰腺癌確診時(shí)已屬于中晚期,具有惡性程度高、手術(shù)切除率較低、易于復(fù)發(fā)、預(yù)后差、生存率低等特點(diǎn)。故針對(duì)胰腺癌的發(fā)病原因、腫瘤發(fā)生發(fā)展及侵襲、轉(zhuǎn)移機(jī)制方面的基礎(chǔ)研究取得了一定進(jìn)展的同時(shí),在外科手術(shù)、輔助與新輔助治療及靶向治療等方面不斷有新技術(shù)、新方法及新藥物問(wèn)世。尋找胰腺癌的基因治療靶點(diǎn),一直是胰腺癌研究領(lǐng)域中的熱點(diǎn)。在分子靶向治療中,仍存在許多問(wèn)題有待解決。目前的研究表明,Toll蛋白受體(Toll-like receptors,TLRs)作用:啟動(dòng)先天性免疫,以及橋接天然免疫與獲得性免疫;在慢性炎癥促進(jìn)腫瘤的演進(jìn)過(guò)程中,特別注意的是發(fā)現(xiàn)TLRs在一些腫瘤細(xì)胞胞膜內(nèi)外表達(dá),并且對(duì)于腫瘤的發(fā)生、演進(jìn)及治療上等方面,均起著重要作用。tlr7是tlrs家族的重要成員之一,近來(lái)研究發(fā)現(xiàn),更多表明tlr7主要表達(dá)于某些類(lèi)型腫瘤細(xì)胞,包括肺癌、腎臟癌、膀胱癌、皮膚癌、結(jié)直腸癌細(xì)胞,原因可能涉及有關(guān)于腫瘤細(xì)胞的來(lái)源和其所處的微環(huán)境。在這些細(xì)胞內(nèi),tlr7作為病原體的識(shí)別受體在于它結(jié)合其配體如單鏈rna(single-strandedrna,ssrna)或某些小干擾rna;tlr7結(jié)合其配體被激活后通過(guò)激發(fā)干擾素-Ⅰ型、細(xì)胞因子和化學(xué)增活素等產(chǎn)物,從而啟動(dòng)先天性和適應(yīng)性的抗病毒免疫,主要識(shí)別病毒單鏈rna和一些人工合成的抗病毒小分子咪唑喹啉衍生物,包括gardiquimod、imiquimod、resiquimod等。tlr7激動(dòng)劑已經(jīng)應(yīng)用實(shí)驗(yàn)與臨床研究上,但其對(duì)腫瘤的作用仍存在爭(zhēng)議;tlr7激動(dòng)劑在腫瘤細(xì)胞免疫治療中的應(yīng)用,還需要進(jìn)一步的研究。目前,尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道有關(guān)gardiquimod與胰腺癌關(guān)系的研究。本課題通過(guò)觀察tlr7激動(dòng)劑gardiquimod對(duì)胰腺癌細(xì)胞株(bxpc-3)增殖、遷移與凋亡的作用,旨意探究gardiquimod與胰腺癌之間的相互關(guān)系,并循證其可能存在作用的分子機(jī)制,tlr7激動(dòng)劑gardiquimod可能對(duì)胰腺癌的靶向治療提供一種新的策略。目的:tlr7的激活對(duì)胰腺癌細(xì)胞株(bxpc-3)增殖、遷移與凋亡的影響及其機(jī)制研究。方法:培養(yǎng)人原位胰腺腺癌bxpc-3細(xì)胞,通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量(real-time)pcr和westernblot分析,檢測(cè)tlr7受體在mrna和蛋白水平上的表達(dá)。以不同劑量(0μg/ml、1.5μg/ml、3.0μg/ml、5.0μg/ml)的tlr7配體gardiquimod經(jīng)不同的時(shí)間(1d、2d、3d、4d、5d)體外刺激bxpc-3細(xì)胞,mts及流式細(xì)胞術(shù)分析tlr7的激活對(duì)bxpc-3細(xì)胞增殖的影響。tlr7配體gardiquimod(3μg/ml)處理bxpc-3細(xì)胞(1-6d),劃痕實(shí)驗(yàn)方法分析,檢測(cè)其對(duì)bxpc-3細(xì)胞的遷移影響。tlr7配體gardiquimod(3μg/ml)經(jīng)不同的時(shí)間(1-5d),體外刺激bxpc-3細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)分析其對(duì)bxpc-3細(xì)胞的凋亡影響。培養(yǎng)bxpc-3細(xì)胞,tlr7配體gardiquimod(3μg/ml)經(jīng)不同的時(shí)間(0min、12min、30min、1h、3h、6h、12h、24h、48h),體外刺激bxpc-3細(xì)胞,作用12h后,通過(guò)westernblot的方法分析,從而探討細(xì)胞周期蛋白cyclinb1、cycline、bcl-2及bax在gardiquimod對(duì)人胰腺癌BxPC-3細(xì)胞增殖、遷移及凋亡調(diào)控中的作用。結(jié)果:Real-time PCR和Western blot分析證實(shí),在人原位胰腺腺癌BxPC-3細(xì)胞中,mRNA及蛋白水平檢查到TLR7表達(dá),TLR7受體表達(dá)量低于人外周血單核細(xì)胞,表達(dá)相差20.12±7.254倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。MTS、流式細(xì)胞術(shù)及劃痕試驗(yàn)分析結(jié)果顯示:TLR7配體Gardiquimod抑制BxPC-3細(xì)胞增殖,且具有時(shí)間及劑量依賴性(P0.05);Gardiquimod誘導(dǎo)胰腺癌BxPC-3細(xì)胞凋亡,且具有時(shí)間依賴性(P0.05);Gardiquimod能夠抑制胰腺癌BxPC-3細(xì)胞遷移,6天后傷痕愈合度僅達(dá)到60%,且具有時(shí)間依賴性依賴性(P0.01)。機(jī)制研究發(fā)現(xiàn):通過(guò)western-blotting的方法來(lái)分析,TLR7受體激動(dòng)劑Gardiquimod能夠降低cyclin B1、cyclin E和Bcl-2,同時(shí),Gardiquimod能夠上調(diào)Bax,6h后可出現(xiàn)明顯升高。結(jié)論:TLR7受體在人原位胰腺腺癌Bx PC-3細(xì)胞存在表達(dá);TLR7激動(dòng)劑Gardiquimod能夠抑制胰腺癌BxPC-3細(xì)胞的增殖、遷移和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。Gardiquimod對(duì)胰腺癌BxPC-3細(xì)胞增殖抑制及細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)可能依賴細(xì)胞周期蛋白cyclin B1、cyclin E、Bcl-2及Bax的調(diào)控。
【關(guān)鍵詞】：BxPC-3細(xì)胞 TLR7 Gardiquimod 增殖 遷移 凋亡
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R735.9
【目錄】：

• 中英文縮略詞表5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-14
• 1 前言14-18
• 2 材料與方法18-43
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料18-22
• 2.2 主要器材和儀器設(shè)備22-24
• 2.3 方法24-43
• 2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理43
• 3 結(jié)果43-52
• 3.1 TLR7在Bx PC-3 細(xì)胞中m RNA及蛋白質(zhì)的表達(dá)43-45
• 3.2 Gardiquimod抑制Bx PC-3 細(xì)胞增殖45-48
• 3.3 Gardiquimod誘導(dǎo)Bx PC-3 細(xì)胞凋亡48-49
• 3.4 Gardiquimod對(duì)Bx PC-3 細(xì)胞增殖抑制與誘導(dǎo)凋亡機(jī)制49-51
• 3.5 Gardiquimod對(duì)胰腺癌Bx PC-3 細(xì)胞遷移能力的影響51-52
• 4 討論52-57
• 5 結(jié)論57
• 參考文獻(xiàn)57-65
• 附錄65-67
• 致謝67-68
• 綜述68-104
• 參考文獻(xiàn)92-104

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 胡鵬;張雷達(dá);;曲古抑菌素A增強(qiáng)細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞對(duì)胰腺癌細(xì)胞株殺傷效果的體外研究[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2013年23期

2 李興華,徐云虹,龔燕芳,鄒曉平,吳紅玉,屠振興,李兆申;健擇對(duì)胰腺癌細(xì)胞株蛋白質(zhì)表達(dá)的影響[J];現(xiàn)代消化及介入診療;2004年03期

3 李非;劉大川;孫家邦;;生長(zhǎng)激素對(duì)胰腺癌細(xì)胞株增殖活性的調(diào)控[J];中華肝膽外科雜志;2005年10期

4 劉勝利,Helmut Friess,Jorg Kleeff,Markus W B

本文編號(hào)：355156