目的:骨關(guān)節(jié)炎（Osteoarthritis,OA）是導(dǎo)致中老年人功能殘疾、經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)加重的主要疾病之一。近年來,OA發(fā)病率逐年增高,且發(fā)病年齡出現(xiàn)了逐步年輕化的趨勢,但OA的臨床治療仍局限于對癥治療,如緩解關(guān)節(jié)疼痛、關(guān)節(jié)腫脹等癥狀,嚴(yán)重者只能行關(guān)節(jié)置換手術(shù),尚無有效的軟骨損傷修復(fù)方法。軟骨組織工程是目前關(guān)節(jié)軟骨損傷修復(fù)研究領(lǐng)域的重點之一,可以利用少量的軟骨細(xì)胞經(jīng)過體外培養(yǎng)、擴增后,附著在一定的支架材料上移植到體內(nèi)形成新的有生命力的軟骨組織,對軟骨損傷進(jìn)行修復(fù)。但研究發(fā)現(xiàn)在多次傳代培養(yǎng)過程中,軟骨細(xì)胞逐漸肥大并失去其表型,且增殖能力也會顯著降低,不能產(chǎn)生正常的軟骨基質(zhì),喪失形成軟骨的能力。因此在體外擴增軟骨細(xì)胞過程中有效抑制肥大分化,促進(jìn)增殖是軟骨組織工程亟待解決的關(guān)鍵問題之一。組蛋白去乙�；�4（HDAC4）是一種II類組蛋白去乙�；福℉DACs）,主要分布在腦、肌肉和軟骨組織中。研究表明HDAC4可通過抑制Runx-2（軟骨細(xì)胞肥大分化的關(guān)鍵基因）的轉(zhuǎn)錄活性,抑制軟骨細(xì)胞肥大分化,不僅在軟骨細(xì)胞肥大和骨骼發(fā)育過程中起著中心調(diào)控作用,在OA發(fā)病過程中也發(fā)揮了重要作用。值得注意的是,我... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
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前言
第一部分 突變HDAC4Caspase-3降解位點及14-3-3結(jié)合位點可有效增加軟骨細(xì)胞核內(nèi)HDAC4含量
    1 材料與方法
        1.1 主要實驗儀器設(shè)備
        1.2 實驗試劑
        1.3 主要實驗操作流程
    2 結(jié)果
        2.1 軟骨細(xì)胞表型鑒定結(jié)果顯示:離體培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞狀態(tài)良好,未發(fā)生失分化現(xiàn)象
        2.2 腺病毒轉(zhuǎn)染離體培養(yǎng)的人軟骨細(xì)胞所需濃度選擇及轉(zhuǎn)染效率檢測
        2.3 突變Caspase-3降解位點可有效減少HDAC4降解
        2.4 突變14-3-3結(jié)合位點可有效減少HDAC4與14-3-3蛋白之間的結(jié)合
        2.5 與野生型HDAC4組(WT-HDAC4)相比,突變組(M-HDAC4)細(xì)胞核內(nèi)HDAC4含量顯著增高
第二部分 突變的HDAC4可有效抑制軟骨細(xì)胞肥大促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖
    1 材料與方法
        1.1 主要實驗儀器設(shè)備
        1.2 實驗試劑
        1.3 主要實驗操作流程
    2 結(jié)果
        2.1 Real time-PCR結(jié)果顯示:與WT-HDAC4組相比,M-HDAC4組軟骨細(xì)胞肥大指標(biāo)Runx-2,Type-Ⅹcollagen及MMP-13表達(dá)量均顯著降低
        2.2 Western blot結(jié)果顯示:與WT-HDAC4組相比,M-HDAC4組軟骨細(xì)胞肥大指標(biāo)Runx-2,TypeⅩcollagen及MMP-13蛋白水平顯著降低
        2.3 Real time-PCR結(jié)果顯示:與WT-HDAC4組相比,M-HDAC4組軟骨細(xì)胞增殖指標(biāo)TypeⅡ collagen,Aggrecan及 Sox-9 表達(dá)量均顯著增高
        2.4 Western blot結(jié)果顯示:與WT-HDAC4組相比,M-HDAC4組軟骨細(xì)胞增殖指標(biāo)TypeⅡ collagen,Aggrecan及 Sox-9 蛋白水平顯著增高
        2.5 CCK-8 細(xì)胞增殖檢測結(jié)果顯示:與WT-HDAC4組相比,M-HDAC4組軟骨細(xì)胞增殖能力顯著增高
        2.6 與Control組比,WT-HDAC4及M-HDAC4組軟骨細(xì)胞中PCNA蛋白含量均顯著增高,且M-HDAC4組PCNA含量增高更為明顯高
第三部分 HDAC4可能通過與增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)結(jié)合促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖
    1 材料與方法
        1.1 主要實驗儀器設(shè)備
        1.2 實驗試劑
        1.3 主要實驗操作流程
    2 結(jié)果
        2.1 HDAC4可與PCNA直接結(jié)合,且M-HDAC4結(jié)合能力較WT-HDAC4更強
        2.2 HDAC4與PCNA結(jié)合位點檢測
    3 討論
        3.1 HDAC4進(jìn)入細(xì)胞核是其對靶蛋白發(fā)揮去乙酰化作用的必要前提
        3.2 HDAC4在軟骨細(xì)胞肥大及軟骨細(xì)胞增殖中的作用
        3.3 HDAC4促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖的機制研究
    4 結(jié)論
        4.1 突變HDAC4Caspase-3裂解位點289及14-3-3蛋白結(jié)合位點246/467/632,不僅可抑制HDAC4降解,而且可減少HDAC4與14-3-3蛋白在胞漿中的結(jié)合,促進(jìn)HDAC4向軟骨細(xì)胞核內(nèi)穿梭,增加細(xì)胞核內(nèi)HDAC4含量
        4.2 與未突變的HDAC4相比,突變的HDAC4抑制軟骨細(xì)胞肥大促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖的能力更強,達(dá)到優(yōu)化軟骨組織工程種子細(xì)胞(軟骨細(xì)胞)的作用
        4.3 HDAC4的促增殖作用可能與HDAC4與PCNA的結(jié)合有關(guān),且HDAC4與PCNA的結(jié)合位點可能在326-669之間
參考文獻(xiàn)
綜述
    References
致謝
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本文編號：3536765