研究背景:多發(fā)性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）是終末分化階段B細胞的一種血液系統惡性腫瘤,以惡性漿細胞克隆性增殖為特征�？寺⌒詽{細胞分泌大量單克隆免疫球蛋白（monoclonal protein,M蛋白）,導致終末器官的損害引起臨床癥狀。盡管當前治療手段的發(fā)展對MM療效有了很大的改善,但目前MM仍是不可治愈的血液系統惡性腫瘤,MM發(fā)生發(fā)展的機制尚待深入挖掘。漿細胞遭受感染、炎癥的刺激后,會產生DNA損傷和基因組不穩(wěn)定性,可以通過出現和積累遺傳學事件,逐漸發(fā)展成為有臨床癥狀的MM。隨著疾病的進展,新的細胞遺傳學事件不斷出現,染色體易位、基因拷貝數變異和體細胞單核苷酸變異等事件的積累促進了 MM的克隆演變。遺傳事件的出現與MM細胞（multiple myeloma cells,MMCs）的基因組不穩(wěn)定性密切相關,DNA損傷后的修復異常是直接原因。DNA損傷中,最嚴重的是DNA雙鏈斷裂（double strand break,DSB）,主要由細胞通過同源重組（homologous recombination,HR）以及非同源末端連接（non-homologous end j... 

【文章來源】：浙江大學浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：162 頁

【學位級別】：博士

【圖文】：

圖１．２流式細胞術檢測體外誘導的Ｍ＜Ｄｓ表面分子??Ａ．流式細胞術檢測Ｍ＜Ｄｓ表面ＣＤ８０，?ＣＤ８６，?ＣＤ１６３和ＣＤ２０６的表達

ｙＨ２ＡＸ是ＤＮＡ損傷的標志性蛋白，為研究ＭＯｓ對ＭＭＣｓ基線ＤＮＡ損傷的??影響，本課題收取與ＭＯｓ共培養(yǎng)前后的ＡＲＰ－１，０ＰＭ２，ＭＭ．１Ｓ和ＣＡＧ細胞，??提取蛋白做Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ測ＭＭＣｓ內ＹＨ２ＡＸ表達水平。結果表明（圖１．４Ａ），??Ｍ＜Ｄｓ可明顯降低ＡＲＰ－１，?０ＰＭ２，?ＭＭ．１Ｓ和ＣＡＧ細胞基線的ＹＨ２ＡＸ水平。??為進一步探究在ＡＲＰ－１，?０ＰＭ２，?ＭＭ．１Ｓ和ＣＡＧ在遭受ＤＮＡ損傷的情況下，??Ｍ〇）ｓ對ＭＭＣｓＤＮＡ損傷的作用，我們用博來霉素（ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ，?ＢＬＭ）誘導ＭＭＣｓ??ＤＮＡ損傷，再讓ＭＭＣｓ與Ｍ＜Ｄｓ共培養(yǎng)２４ｈ，結果提示（圖１．４Ｂ）Ｍ（Ｄｓ可顯著降??低?ＡＲＰ－１

Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ實驗檢測ＭＭＣｓ中ＹＨ２ＡＸ的表達。我們觀察到，不管是單獨培養(yǎng)組??還是ＭＯｓ共培養(yǎng)組，在博來霉素造成ＭＭＣｓＤＮＡ損傷后，ＹＨ２ＡＸ都經歷了由高??到低的過程（圖１．５），代表對照組和實驗組中，ＭＭＣｓ在面對ＤＮＡ損傷時都啟??動了細胞ＤＤＲ，隨著損傷的ＤＮＡ逐漸被修復，＂／Ｈ２ＡＸ表達量逐漸下降。結果顯??示，Ｍ＜Ｄｓ?共培養(yǎng)組?ＡＲＰ－１?（圖?１．５Ａ），０ＰＭ２?（圖?１．５Ｂ），ＭＭ．１Ｓ?（圖?１．５Ｃ）??和ＣＡＧ?（圖１．５Ｄ）?ｙＨ２ＡＸ下降地更快。??為了更加直觀及客觀地闡述ＭＭＣｓＤＮＡ損傷后，ＹＨ２ＡＸ在對照組和實驗組??中表達量的變化，本課題采用Ｘ光（Ｘ－ｒａｄｉａｔｉｏｎ，?Ｘ－Ｒａｙ）?５Ｇｙ劑量福照ＭＭ．ｌＳｌ??和ＣＡＧ細胞后，將細胞分為單獨培養(yǎng)組和與Ｍ＜Ｄｓ共培養(yǎng)組。分別在ｌｈ，２ｈ，４ｈ，??８ｈ，２４ｈ和４８ｈ收�。停停茫�，同空白對照及輻照Ｏｈ?（陽性對照）一起行免疫熒光??檢測（選擇這兩種細胞株的原因是這兩株細胞可處于半貼壁狀態(tài)，利于做細胞免??疫熒光）。我們采用高內涵細胞成像儀對免疫熒光片進行圖像采集

【參考文獻】：
期刊論文
[1]槲皮素對人急性B淋巴細胞白血病NOD/SCID小鼠細胞周期及黏附分子表達的影響[J]. 王黎,戴紅衛(wèi),鄭君,周嬌,陳德森.  中國實驗血液學雜志. 2018(06)
[2]PJ34對多發(fā)性骨髓瘤RPMI8226細胞體外生長及其對馬法蘭敏感性的影響[J]. 熊婷,陳小瓊,魏恒,肖暉.  現代腫瘤醫(yī)學. 2014(03)



本文編號：3536110