本文關(guān)鍵詞：附子人參配伍對(duì)大鼠心肌細(xì)胞保護(hù)作用的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:1采用缺糖缺氧/復(fù)糖復(fù)氧方法建立大鼠心肌細(xì)胞損傷模型,附子人參不同配伍對(duì)其干預(yù)后,考察心肌細(xì)胞博動(dòng)頻率、細(xì)胞活力、凋亡率、相關(guān)生化指標(biāo)SOD活性、MDA含量、LDH釋放率、NO分泌量的影響等及Bcl-2、Bax、Caspases-3m RNA及蛋白表達(dá)變化,探討附子人參配伍對(duì)心肌細(xì)胞保護(hù)作用的最佳藥效比例及濃度。2附子具有強(qiáng)心、增加心肌收縮力的作用,但同時(shí)附子對(duì)心臟也會(huì)產(chǎn)生毒性,本文采用附子單獨(dú)應(yīng)用產(chǎn)生的大鼠心肌細(xì)胞毒性作用,逐漸增加配伍中人參的比例,探討附子與人參在何種比例下,何種濃度時(shí)達(dá)到對(duì)心肌細(xì)胞的減毒作用。3附子、人參合理配伍應(yīng)用對(duì)缺糖缺氧損傷大鼠心肌細(xì)胞具有保護(hù)作用,通過測(cè)定加入ERK1/2(細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制劑前后相應(yīng)指標(biāo)的變化,探討其保護(hù)作用機(jī)制是否通過ERK1/2(細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路實(shí)現(xiàn)。方法:1乳鼠心肌細(xì)胞分離培養(yǎng)取24h內(nèi)新出生大鼠,置于超凈工作臺(tái)中,75%酒精消毒,無(wú)菌條件下取出心臟,剪成細(xì)小碎塊,采用胰蛋白酶與膠原酶進(jìn)行消化處理,采用差速貼壁分離法去除成纖維細(xì)胞,得到較高純度的心肌細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。2心肌細(xì)胞損傷模型的建立原代心肌細(xì)胞培養(yǎng)6天后,心肌細(xì)胞密度符合要求,自發(fā)博動(dòng)頻率穩(wěn)定后,利用D-Hank’s液反復(fù)沖洗心肌細(xì)胞,降低葡萄糖濃度,確保其低于lmol/L,然后滴加Hank’s無(wú)糖液適量,置于缺氧盒中,將含量95%的N2混合氣體,緩慢持續(xù)通入2h,取出心肌細(xì)胞培養(yǎng)板,棄去Hank’s液,放入CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行正常培養(yǎng)24h,即模擬體內(nèi)心肌缺血再灌注。3附子人參不同配伍比例載藥血清的制備取附子、人參藥材飲片,按附子、人參0.5:1、1:1、2:1和4:1及附子、人參1:0、1:0.25、1:0.5、1:1、1:2共9種配伍比例混合,制備水煎液,放入4℃冰箱存儲(chǔ)備用。選取100只清潔級(jí)Wistar雄性大鼠,隨機(jī)分成10組,其中9組大鼠灌胃不同配伍比例的水煎液,第10組大鼠給予同體積生理鹽水,每日給藥1次,連續(xù)1周,于末次給藥2h后,經(jīng)股動(dòng)脈取血,室溫放置、離心、分離血清,于無(wú)菌工作臺(tái)內(nèi)0.22μm濾膜過濾,56℃水浴滅活30 min,放入-20℃冰箱存儲(chǔ)備用。4檢測(cè)指標(biāo)及方法4.1心肌細(xì)胞自發(fā)博動(dòng)頻率心肌細(xì)胞經(jīng)藥物處理后,在規(guī)定的時(shí)間點(diǎn)將孵育有心肌細(xì)胞的多孔培養(yǎng)板從CO2培養(yǎng)箱中取出,置于倒置顯微鏡下,隨機(jī)選擇10個(gè)不同視野內(nèi)10個(gè)原代心肌細(xì)胞進(jìn)行觀察,記錄心肌細(xì)胞的博動(dòng)頻率(次/min),重復(fù)6次試驗(yàn),計(jì)算平均心肌細(xì)胞博動(dòng)頻率(次/min)。4.2心肌細(xì)胞活力心肌細(xì)胞經(jīng)藥物處理后,在規(guī)定的時(shí)間點(diǎn)將孵育有心肌細(xì)胞的多孔培養(yǎng)板從CO2培養(yǎng)箱中取出,置入超凈工作臺(tái)內(nèi),吸棄其中液體,加入MTT溶液(5mg/ml)20μl,搖勻,37℃孵育4 h,吸棄上清液體,加入100μl DMSO溶液,置于振蕩器中輕輕搖動(dòng)10min,待溶液中看不到藍(lán)色顆粒,放入酶標(biāo)儀中,將檢測(cè)波長(zhǎng)輕輕調(diào)節(jié)至490 nm,然后分別測(cè)定各個(gè)樣品吸光度A,并計(jì)算心肌細(xì)胞的存活率。4.3心肌細(xì)胞凋亡率的流式檢測(cè)取經(jīng)藥物處理后的心肌細(xì)胞,于規(guī)定的時(shí)間點(diǎn)利用Annexin V-FITC結(jié)合液195μl輕輕重懸沉淀心肌細(xì)胞,向懸浮心肌細(xì)胞溶液中加入Annexin V-FITC溶液5μl輕輕混合均勻,密封,用鋁箔包繞避光,于室溫(約25℃)下孵育10 min。再置入4℃預(yù)冷的離心機(jī)中,1000r/min離心3min,吸棄上清液,利用Annexin V-FITC結(jié)合液190μl輕輕重懸沉淀心肌細(xì)胞,向懸浮心肌細(xì)胞溶液中加入碘化丙啶染色溶液10μl輕輕混合均勻,密封,用鋁箔包繞避光,置于冰上10 min,隨即進(jìn)行流式細(xì)胞儀分析檢測(cè),激發(fā)波長(zhǎng)Ex=488nm;發(fā)射波長(zhǎng)Em=530 rim。4.4生化指標(biāo)的檢測(cè)(SOD、MDA、LDH、NO)心肌細(xì)胞經(jīng)藥物處理后,在規(guī)定的時(shí)間點(diǎn)根據(jù)SOD、MDA、LDH、NO試劑盒的要求,測(cè)定各組心肌細(xì)胞的OD值4.5分光光度計(jì)分析Caspase-3活性心肌細(xì)胞經(jīng)藥物處理后,根據(jù)Caspase-3試劑盒的操作方法,在規(guī)定的時(shí)間點(diǎn)測(cè)定,利用熒光分光光度法測(cè)定各組吸光度值。4.6利用westernblot檢測(cè)Bcl-2、Bax及ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表達(dá)各組心肌細(xì)胞經(jīng)藥物處理后,以細(xì)胞裂解液提取心肌細(xì)胞Bcl-2、Bax及ERK1/2p-ERK1/2蛋白,按照BCA法進(jìn)行蛋白定量。提取的蛋白進(jìn)行SDS-PAGE電泳法分離,電泳結(jié)束后,進(jìn)行轉(zhuǎn)膜,即將分離的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)到NC膜上,封閉孵育后加入一抗和二抗,進(jìn)行孵育,再滴加適量熒光檢測(cè)試劑,轉(zhuǎn)入一體式熒光圖像分析儀中,進(jìn)行各條帶積分光密度的掃描、分析。4.7利用RT-PCR檢測(cè)Bcl-2、Bax和Caspases-3 m RNA表達(dá)各組心肌細(xì)胞經(jīng)藥物處理后,利用TRIzol試劑提取總RNA,再利用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)RNA的純度,然后逆轉(zhuǎn)錄合成c DNA,利用Bcl-2、Bax和Caspases-3引物進(jìn)行目的基因的檢測(cè)。最后利用軟件Sequence Detection software version 1.2.3分析RT-PCR實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)結(jié)果,即分析所測(cè)得各個(gè)樣本的Ct值,再計(jì)算出各個(gè)目的基因的2-ΔΔCT值,進(jìn)而得出不同組心肌細(xì)胞基因表達(dá)量的差別。5統(tǒng)計(jì)分析:用x±s表示試驗(yàn)數(shù)據(jù),實(shí)驗(yàn)結(jié)果的多因素統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS13.0軟件進(jìn)行。采用方差分析試驗(yàn)結(jié)果多組間差異的顯著性,采用SNK檢驗(yàn)試驗(yàn)結(jié)果的組間兩兩比較。具有顯著差異性判斷依據(jù)為P0.05。結(jié)果:1附子人參配伍對(duì)缺糖缺氧/復(fù)糖復(fù)氧損傷大鼠心肌細(xì)胞的保護(hù)作用1.1對(duì)心肌細(xì)胞博動(dòng)頻率的影響在0~72h內(nèi),模型組、空白血清組與空白對(duì)照組比較,原代培養(yǎng)的心肌細(xì)胞博動(dòng)頻率顯著降低,其P0.05。與空白血清組相比較,不同配伍比例的附子人參組(0.5:1、1:1、2:1和4:1)心肌細(xì)胞自發(fā)博動(dòng)頻率均有不同程度的升高,除在作用6h時(shí),附子人參(0.5:1)組、附子人參(4:1)組外,在6~48 h內(nèi)差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),且在6~48 h內(nèi)呈時(shí)效依賴關(guān)系,該結(jié)果表明:附子人參不同配伍對(duì)缺糖缺氧/復(fù)糖復(fù)氧所致?lián)p傷的原代大鼠心肌細(xì)胞具有一定保護(hù)作用。而在0~72 h內(nèi),附子人參(2:1)組心肌細(xì)胞的自發(fā)動(dòng)博動(dòng)頻率均在不同程度上高于其他配伍組,其中48 h時(shí),與其他3個(gè)配伍組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);24h和72h時(shí),與附子人參(0.5:1)組、附子人參(4:1)組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);作用時(shí)間為12h時(shí),與附子人參(0.5:1)組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),進(jìn)一步表明附子人參(2:1)組對(duì)損傷心肌細(xì)胞保護(hù)作用最顯著。1.2對(duì)心肌細(xì)胞活力的影響在0~72 h內(nèi),與空白對(duì)照組比較,模型組、空白血清組細(xì)胞活力顯著下降(P0.05),表明心肌細(xì)胞缺糖缺氧/復(fù)糖復(fù)氧損傷模型成功建立。在6~72h內(nèi),不同配比的附子人參(0.5:1、1:1、2:1和4:1)配伍組,與空白血清組比較,除附子人參(0.5:1)組外,各配伍組心肌細(xì)胞活力逐漸升高(P0.05),且呈時(shí)效依賴關(guān)系,表明附子人參不同配伍對(duì)原代培養(yǎng)心肌細(xì)胞缺糖缺氧/復(fù)糖復(fù)氧造成的損傷具有一定抑制作用。在6~72 h內(nèi),附子人參(2:1)組心肌細(xì)胞活力均不同程度地高于其他配伍組,其中48 h時(shí),與其他3個(gè)各配伍組相比均具有顯著性差異(P0.05);24h和72h時(shí),與附子人參(0.5:1)組、附子人參(4:1)組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),表明附子人參(2:1)組對(duì)損傷心肌細(xì)胞保護(hù)作用最顯著。1.3對(duì)心肌細(xì)胞凋亡率的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,在0~72h內(nèi),與空白對(duì)照組相比較,模型組,空白血清組心肌細(xì)胞凋亡率顯著升高(P0.05)。與空白血清組比較,除附子人參(0.5:1)組在作用6h時(shí),心肌細(xì)胞凋亡率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)外,其余各附子人參配伍(1:1、2:1、4:1)組心肌細(xì)胞凋亡率在6~72h內(nèi)均顯著降低(P0.05),其余時(shí)間內(nèi)心肌細(xì)胞凋亡率有所下降,但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。各配伍組進(jìn)行比較,附子人參(2:1)組心肌細(xì)胞凋亡率均顯著低于其他配伍組(P0.05)。且在作用48h時(shí),附子人參(2:1)組心肌細(xì)胞凋亡率低于其他作用時(shí)間點(diǎn)。1.4對(duì)生化指標(biāo)SOD\MDA\LDH\NO的影響與空白血清組相比,不同配比的附子人參配伍(0.5:1、1:1、2:1和4:1)組心肌細(xì)胞SOD活性顯著升高、MDA含量、LDH釋放率、NO分泌量顯著降低(P0.05)。與其他3個(gè)配伍組相比,附子人參(2:1)組心肌細(xì)胞SOD活性顯著升高、MDA含量、LDH釋放率顯著降低(P0.05),附子人參(2:1)組,與附子人參(0.5:1)組、附子人參(4:1)組比較,NO分泌量差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。1.5對(duì)心肌細(xì)胞Caspases-3活性及Caspases-3m RNA表達(dá)的影響各組原代培養(yǎng)心肌細(xì)胞經(jīng)附子人參配伍處理組后,與空白血清組相比,心肌細(xì)胞Caspases-3活性顯著降低、Caspases-3m RNA表達(dá)顯著下調(diào)(P0.05)。表明附子人參各配伍組對(duì)損傷心肌細(xì)胞Caspases-3活性及Caspases-3m RNA表達(dá)的升高具有抑制作用。與其他各給藥組相比,附子人參(2:1)組對(duì)細(xì)胞Caspases-3活性及Caspases-3m RNA表達(dá)的影響最顯著(P0.05)。1.6對(duì)心肌細(xì)胞Bcl-2 m RNA表達(dá)及Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)的影響各組原代培養(yǎng)心肌細(xì)胞經(jīng)附子人參配伍處理組后,與空白血清組相比,心肌細(xì)胞Bcl-2 m RNA表達(dá)及Bcl-2的蛋白表達(dá)均顯著上調(diào),Bax的蛋白表達(dá)顯著下調(diào),均P0.05,表明附子人參不同配伍組對(duì)心肌細(xì)胞損傷而導(dǎo)致心肌細(xì)胞凋亡具有抑制作用。與其他各給藥組相比,附子人參(2:1)組對(duì)Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)的影響最顯著(均P0.05),說明附子人參按2:1配伍使用對(duì)心肌細(xì)胞的保護(hù)作用較顯著。1.7不同濃度的附子人參對(duì)損傷心肌細(xì)胞保護(hù)作用的影響在考察附子人參配伍不同濃度對(duì)缺糖缺氧所致心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用研究中,三個(gè)不同濃度的(15%、10%、5%)均對(duì)損傷心肌細(xì)胞有保護(hù)作用,其中心肌細(xì)胞博動(dòng)頻率、細(xì)胞活力、SOD活性、LDH釋放率、Bcl-2m RNA表達(dá)、Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)的檢測(cè)結(jié)果顯示,15%、10%濃度明顯優(yōu)于5%濃度(P0.05),15%、10%濃度之間無(wú)明顯差異。其他檢測(cè)指標(biāo)MDA含量、NO分泌量、心肌細(xì)胞凋亡率、Caspases-3活性及Caspases-3m RNA表達(dá),15%、10%、5%3個(gè)濃度之間均無(wú)顯著性差異(P0.05)。2附子人參配伍對(duì)大鼠心肌細(xì)胞的減毒作用2.1對(duì)心肌細(xì)胞自發(fā)博動(dòng)頻率的影響在藥物干預(yù)的0~4 h內(nèi),與空白血清組比較,附子人參(1:0)組心肌細(xì)胞自發(fā)搏動(dòng)頻率顯著增加(P0.05),表明附子增加了原代培養(yǎng)的心肌細(xì)胞自發(fā)搏動(dòng)頻率。而附子配伍不同比例人參的心肌細(xì)胞處理組,與附子人參(1:0)組相比較,心肌細(xì)胞自發(fā)博動(dòng)頻率顯著降低(P0.05),表明人參對(duì)附子引起的心肌細(xì)胞博動(dòng)頻率增加有緩解作用。其中附子人參(1:0.25)組在0~4 h內(nèi)呈時(shí)效依賴關(guān)系,而附子人參(1:0.5)組對(duì)心肌細(xì)胞自發(fā)博動(dòng)的影響與附子人參(1:0.25)組比較具有顯著性差異(P0.05),與附子人參(1:1)組、附子人參(1:2)組和空白血清組比較不具有顯著性差異(P0.05),表明附子人參配伍,人參比例達(dá)到0.5倍時(shí),心肌細(xì)胞博動(dòng)頻率趨近空白血清組水平。2.2對(duì)心肌細(xì)胞活力的影響培養(yǎng)的原代心肌細(xì)胞經(jīng)藥物處理后,在1~4 h內(nèi),與空白血清組比較,附子人參(1:0)組細(xì)胞活力顯著下降(P0.05),表明附子對(duì)原代培養(yǎng)的心肌細(xì)胞具有損傷作用,導(dǎo)致心肌細(xì)胞活力下降,而附子配伍不同比例人參的處理組,與附子人參(1:0)組相比,心肌細(xì)胞活力逐漸升高,在2~4 h內(nèi),具有顯著性差異(P0.05),表明人參對(duì)附子引起的心肌細(xì)胞活力降低具有抑制作用。其中附子人參(1:0.25)組在0~4 h內(nèi)呈時(shí)效依賴關(guān)系,而附子人參(1:0.5)組對(duì)心肌細(xì)胞的細(xì)胞活力的影響與附子人參1:1組、附子人參(1:2)組和空白血清組比較不具有顯著性差異(P0.05),在3~4 h與附子人參(1:0.25)組比較具有顯著性差異(P0.05),表明附子人參配伍,人參比例達(dá)到0.5倍時(shí),心肌細(xì)胞活力趨近空白血清組水平。2.3對(duì)心肌細(xì)胞生化指標(biāo)SOD、MDA、LDH、NO的影響與空白血清組比較,附子人參1:0組心肌細(xì)胞SOD活性顯著降低,MDA含量、LDH釋放率、NO分泌量顯著升高(P0.05),表明心肌細(xì)胞受到附子干預(yù)后,產(chǎn)生大量的自由基,導(dǎo)致心肌細(xì)胞損傷,凋亡。與附子人參(1:0)組相比,附子配伍不同比例人參的處理組,心肌細(xì)胞SOD活性顯著升高、MDA含量、LDH釋放率、NO分泌量顯著降低(P0.05),表明人參對(duì)附子引起的原代心肌細(xì)胞損傷具有一定的抑制作用。其中附子人參(1:0.5)組對(duì)心肌細(xì)胞SOD活性、MDA含量、LDH釋放率、NO分泌量的影響與空白血清組比較不具有顯著性差異(P0.05),與附子人參(1:0.25)組比較具有顯著性差異(P0.05),表明人參比例為附子0.5倍時(shí),即可抑制附子對(duì)原代培養(yǎng)心肌細(xì)胞的損傷作用。2.4附子人參配伍不同濃度的對(duì)心肌細(xì)胞減毒作用的影響與空白血清各濃度組比較,附子人參(1:0)各濃度組心肌細(xì)胞博動(dòng)頻率顯著增加、活力顯著降低、SOD活性顯著降低,MDA含量、LDH釋放率、NO分泌量顯著升高(P0.05),表明附子各濃度對(duì)原代培養(yǎng)的心肌細(xì)胞均具有損傷作用。與附子人參(1:0)各濃度組相比,附子配伍人參(1:0.5)的各濃度處理組,心肌細(xì)胞博動(dòng)頻率顯著降低、細(xì)胞活力、心肌細(xì)胞SOD活性顯著升高、MDA含量、LDH釋放率、NO分泌量顯著降低(P0.05),表明附子配伍人參(1:0.5)的各濃度(15%、10%、5%)對(duì)心肌細(xì)胞損傷均有抑制作用,附子人參(1:0.5)組各濃度組之間比較,以上指標(biāo)的變化無(wú)顯著性差異(P0.05)。2.5對(duì)心肌細(xì)胞Caspases-3活性及Bcl-2、Caspases-3 m RNA表達(dá)的影響培養(yǎng)的原代心肌細(xì)胞經(jīng)藥物處理后,與空白血清組比較,附子人參(1:0)組心肌細(xì)胞Bcl-2 m RNA的表達(dá)均明顯下調(diào),Caspases-3活性、Caspases-3 m RNA表達(dá)明顯上調(diào),均具有顯著性差異(P0.05),表明附子對(duì)原代培養(yǎng)的心肌細(xì)胞具有損傷作用,進(jìn)而導(dǎo)致心肌細(xì)胞凋亡。而附子配伍不同比例人參的處理組,與附子人參(1:0)組相比,心肌細(xì)胞Bcl-2 m RNA的表達(dá)明顯上調(diào),Caspases-3活性、Caspases-3 m RNA的表達(dá)明顯下調(diào),均為顯著性差異(P0.05),表明人參對(duì)附子引起的心肌細(xì)胞毒性具有抑制作用,附子人參(1:0.5)組對(duì)Bcl-2、Caspases-3 m RNA及Caspases-3活性表達(dá)的影響與附子人參(1:0.25)組比較具有顯著性差異(P0.05),與空白血清組比較不具有顯著性差異(P0.05),表明人參比例為附子0.5倍時(shí),即可抑制附子對(duì)原代培養(yǎng)心肌細(xì)胞的損傷作用。2.6對(duì)心肌細(xì)胞Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)的影響培養(yǎng)的原代心肌細(xì)胞經(jīng)藥物處理后,與空白血清組比較,附子人參(1:0)組心肌細(xì)胞Bcl-2的蛋白表達(dá)顯著下調(diào),Bax的蛋白表達(dá)顯著上調(diào),均具有顯著性差異(P0.05),表明附子對(duì)原代培養(yǎng)的心肌細(xì)胞具有損傷,使心肌細(xì)胞凋亡。而附子配伍不同比例人參的心肌細(xì)胞處理組,與附子人參(1:0)組相比,心肌細(xì)胞Bcl-2的蛋白表達(dá)顯著上調(diào),Bax的蛋白表達(dá)顯著下調(diào),均為顯著性差異(P0.05),表明人參對(duì)附子引起的心肌細(xì)胞損傷具有抑制作用,附子人參(1:0.5)組對(duì)心肌細(xì)胞Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)的影響與附子人參(1:0.25)組比較具有顯著性差異(P0.05),與空白血清組組比較不具有顯著性差異(P0.05),表明人參比例為附子0.5倍時(shí),即可抑制附子對(duì)原代培養(yǎng)心肌細(xì)胞的損傷作用。3附子人參配伍對(duì)缺糖缺氧/復(fù)糖復(fù)氧損傷心肌細(xì)胞保護(hù)作用機(jī)制的研究與空白血清組相比較,附子人參(2:1)組對(duì)缺糖缺氧/復(fù)糖復(fù)氧損傷心肌細(xì)胞ERK1/2、Bcl-2以及ERK1/2磷酸化蛋白表達(dá)升高,Bax蛋白表達(dá)降低,Bcl-2 m RNA表達(dá)升高,Bax、Caspases-3 m RNA表達(dá)降低,均具有顯著性差異(P0.05)。附子人參(2:1)加入ERK抑制劑PD98059共處理后,即附子人參(2:1)+PD98059組對(duì)缺糖缺氧/復(fù)糖復(fù)氧損傷心肌細(xì)胞ERK1/2、Bcl-2、Bax及ERK1/2磷酸化蛋白表達(dá)量及Bcl-2、Bax、Caspases-3 m RNA表達(dá)量,與空白血清組相比較基本相當(dāng),不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1附子人參配伍對(duì)缺糖缺氧/復(fù)糖復(fù)氧損傷大鼠心肌細(xì)胞具有保護(hù)作用,其中以附子人參配伍比例2:1效果最為顯著,在考察附子人參配伍不同濃度對(duì)缺糖缺氧所致心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用研究中,三個(gè)不同濃度的(15%、10%、5%)均對(duì)損傷心肌細(xì)胞有保護(hù)作用,15%、10%濃度優(yōu)于5%濃度,但15%、10%之間無(wú)差異。2附子配伍不同比例的人參可抑制附子對(duì)心肌細(xì)胞的毒性作用,其中附子人參配比為1:0.5時(shí),人參即可有效地抑制附子的毒性作用。15%、10%、5%各濃度對(duì)心肌細(xì)胞的減毒作用無(wú)顯著性差異。3 ERK1/2信號(hào)通路可能涉及附子、人參配伍(2:1)對(duì)缺糖缺氧再灌損傷原代培養(yǎng)心肌細(xì)胞的保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：附子 人參 配伍 缺糖取樣/復(fù)糖復(fù)氧 減毒 心肌細(xì)胞 細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶
【學(xué)位授予單位】：長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R285.5
【目錄】：

• 中文摘要7-14
• 英文摘要14-22
• 英文縮略語(yǔ)22-25
• 前言25-28
• 文獻(xiàn)綜述28-48
• 一 附子毒性的研究進(jìn)展及常用的減毒方法28-39
• 二 心力衰竭研的究進(jìn)展及與ERK1/2 關(guān)系39-48
• 實(shí)驗(yàn)研究48-144
• 第一章 原代大鼠心肌細(xì)胞的培養(yǎng)48-65
• 1 實(shí)驗(yàn)材料48-50
• 2 實(shí)驗(yàn)方法50-55
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果55-62
• 4 小結(jié)62-65
• 第二章 附子人參配伍對(duì)缺糖缺氧/復(fù)糖復(fù)氧損傷大鼠心肌細(xì)胞的保護(hù)作用65-109
• 第一節(jié) 附子人參不同配伍比例對(duì)損傷大鼠心肌細(xì)胞的保護(hù)作用65-90
• 1 實(shí)驗(yàn)材料66-68
• 2 實(shí)驗(yàn)方法68-80
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果80-90
• 3.1 心肌細(xì)胞自發(fā)博動(dòng)頻率的測(cè)定結(jié)果80-82
• 3.2 心肌細(xì)胞活力測(cè)定結(jié)果82
• 3.3 心肌細(xì)胞凋亡率測(cè)定結(jié)果82-85
• 3.4 心肌細(xì)胞生化指標(biāo)的測(cè)定結(jié)果(SOD、MDA、LDH、NO)85-87
• 3.5 心肌細(xì)胞Caspases-3 活性檢測(cè)結(jié)果87
• 3.6 心肌細(xì)胞Bcl-2 mRNA表達(dá)的測(cè)定結(jié)果87
• 3.7 心肌細(xì)胞Caspases-3 mRNA表達(dá)的測(cè)定結(jié)果87-88
• 3.8 心肌細(xì)胞Bcl-2 和Bax蛋白表達(dá)的測(cè)定結(jié)果88-90
• 第二節(jié) 附子人參配伍不同濃度對(duì)損傷大鼠心肌細(xì)胞的保護(hù)作用90-101
• 1 實(shí)驗(yàn)材料90
• 2 實(shí)驗(yàn)方法90-92
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果92-101
• 3.1 心肌細(xì)胞的自發(fā)博動(dòng)測(cè)定結(jié)果92-94
• 3.2 心肌細(xì)胞活力的測(cè)定結(jié)果94
• 3.3 心肌細(xì)胞凋亡率檢測(cè)的結(jié)果94-95
• 3.4 心肌細(xì)胞生化指標(biāo)的測(cè)定結(jié)果(SOD、MDA、LDH、NO)95-97
• 3.5 肌細(xì)胞Caspases-3 活性檢測(cè)結(jié)果97
• 3.6 心肌細(xì)胞Bcl-2 mRNA表達(dá)的結(jié)果97-98
• 3.7 心肌細(xì)胞Caspases-3 mRNA表達(dá)的結(jié)果98-99
• 3.8 心肌細(xì)胞Bcl-2 和Bax蛋白表達(dá)的結(jié)果99-101
• 第三節(jié) 小結(jié)與討論101-109
• 1 結(jié)果討論101-104
• 2 心肌細(xì)胞損傷造模方法的選擇104-105
• 3 附子人參配伍比例、濃度及檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)的確定105-106
• 4 檢測(cè)指標(biāo)的選擇106-109
• 第三章 附子人參配伍對(duì)大鼠心肌細(xì)胞的減毒作用109-131
• 第一節(jié) 附子人參不同配伍比例對(duì)大鼠心肌細(xì)胞的減毒作用109-119
• 1 實(shí)驗(yàn)材料109-111
• 2 實(shí)驗(yàn)方法111-112
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果112-119
• 3.1 心肌細(xì)胞自發(fā)博動(dòng)的測(cè)定結(jié)果112-113
• 3.2 心肌細(xì)胞活力的檢測(cè)結(jié)果113-114
• 3.3 生化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果(SOD、MDA、LDH、NO)114-116
• 3.4 心肌細(xì)胞Caspases-3 活性檢測(cè)結(jié)果116-117
• 3.5 心肌細(xì)胞Bcl-2 和Caspases-3 mRNA表達(dá)的結(jié)果117
• 3.6 心肌細(xì)胞Bcl-2 和Bax蛋白表達(dá)的結(jié)果117-119
• 第二節(jié) 附子人參配伍不同濃度對(duì)大鼠心肌細(xì)胞的減毒作用119-125
• 1 實(shí)驗(yàn)材料119
• 2 實(shí)驗(yàn)方法119-120
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果120-125
• 3.1 心肌細(xì)胞自發(fā)博動(dòng)頻率的測(cè)定結(jié)果120-121
• 3.2 心肌細(xì)胞活力的檢測(cè)結(jié)果121-122
• 3.3 生化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果(SOD、MDA、LDH、NO)122-125
• 第三節(jié) 小結(jié)與討論125-131
• 第四章 附子人參配伍對(duì)缺糖缺氧/復(fù)糖復(fù)氧損傷心肌細(xì)胞保護(hù)作用機(jī)制的研究131-144
• 1 實(shí)驗(yàn)材料131-133
• 2 實(shí)驗(yàn)方法133-134
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果134-140
• 3.1 藥物對(duì)心肌細(xì)胞ERK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2 和Bax蛋白表達(dá)的影響134-139
• 3.2 藥物對(duì)心肌細(xì)胞Bcl-2、Bax、Caspases-3 mRNA表達(dá)的影響139-140
• 4 小結(jié)與討論140-144
• 4.1 心肌細(xì)胞凋亡與ERK1/2140-142
• 4.2 附子人參(2:1)配伍對(duì)心肌細(xì)胞ERK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2 和Bax蛋白表達(dá)的影響142
• 4.3 附子人參(2:1)配伍對(duì)心肌細(xì)胞ERK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2 和Bax蛋白表達(dá)“時(shí)-效”關(guān)系的影響142-143
• 4.4 附子人參(2:1)配伍對(duì)心肌細(xì)胞Bcl-2、Bax、Caspases-3 mRNA表達(dá)的影響143-144
• 討論144-146
• 結(jié)語(yǔ)146-147
• 致謝147-149
• 參考文獻(xiàn)149-168

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：附子人參配伍對(duì)大鼠心肌細(xì)胞保護(hù)作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：353322