大葉蛇葡萄不同生長期黃酮類化合物的生物合成機制研究
發(fā)布時間：2021-11-19 07:59
大葉蛇葡萄（Ampelopsis megalophylla Diels et Gilg）為葡萄科蛇葡萄屬植物,其主要藥用部位為葉,臨床上可用于治療高血壓等。課題組前期研究表明,黃酮類化合物為其主要活性成分,包括二氫楊梅素（蛇葡萄素）、楊梅苷、楊梅素和槲皮素等。這些黃酮類次生代謝產物在不同時期的葉中含量差異顯著。本研究采用雙向電泳技術對大葉蛇葡萄進行了蛋白組學研究,采用Illumina測序技術對其不同季節(jié)的葉片進行了轉錄組測序,獲得了豐富的基因功能注釋信息。同時基于不同季節(jié)葉片之間基因表達量的差異性,探討了相關功能基因在該植物黃酮類化合物生物合成中發(fā)揮的作用。具體研究如下:1.采用高效液相色譜法分別同時測定了5月、8月及10月采收的大葉蛇葡萄葉中二氫楊梅素和楊梅苷兩種活性成分的含量。結果表明,二氫楊梅素:5月>8月>10月;楊梅苷:5月>10月>8月。2.采用酚抽提法提取了5月、8月及10月大葉蛇葡萄葉片中的蛋白質,并進行了雙向電泳分析。用考馬斯亮藍G-250染色,蛋白質在水平和垂直兩個方向均得到了較好的分離,獲得了背景清晰、分辨率和重復性均較好的圖譜。選用了pH...
【文章來源】：湖北中醫(yī)藥大學湖北省
【文章頁數】：157 頁
【學位級別】：博士
【部分圖文】：
混合對照品及樣品色譜圖
湖北中醫(yī)藥大學2020屆博士學位論文6按照表1-5配制胎牛血清測定溶液。表1-5不同比例標準溶液的配制Table1-5Thepreparationofstandardsolutionwithdifferentproportion蛋白質濃度（μg/mL）5101520253035BSA（μL）1234567ddH2O（μL）9876543Bradford試劑（μL）1,0001,0001,0001,0001,0001,0001,000將以上各溶液混合于1.5mLEppendorf離心管中，渦旋振蕩20s，充分混勻后用酶標儀測定最大吸收值，測定波長為595nm，根據測定結果繪制標準曲線（圖1-2）。圖1-2BSA標準曲線圖Fig.1-2TheBSAstandardcurve2.1.3.2含量測定蛋白質團塊溶解干燥后的蛋白質團塊中加入200μL裂解液（表1-6），后反復吹打，直至蛋白質全部分散均勻。超聲（80W，0.8s開，0.8s關）助溶后于冰上冷卻。重復操作一次。后于4℃，12,000rpm，離心20min，吸取上清，轉移至另一新的Eppendorf管中，備用。含量測定為了減小誤差，使所測的數值準確，蛋白質進行兩次定量：初步定量計算得到各樣品的濃度，依據結果將所有樣品的濃度盡量調整至接近；后進行第二次定量，結果見表1-7。
大葉蛇葡萄不同生長期黃酮類化合物的生物合成機制研究15圖1-3電泳掃描圖Fig.1-3Theelectrophoreticscanninggraph注：A、B、C分別代表N1、N2、N3樣品的兩次掃描結果，N1、N2、N3分別為5月、8月、10月采集的樣品。樣品等電點分布特點：5月和8月的大葉蛇葡萄葉片中蛋白質等電點主要在5.0~5.5之間，分別占21.38%、22.97%，而10月的樣品蛋白質等電點ABC
【參考文獻】：
期刊論文
[1]組學技術在人參皂苷活性研究中的應用進展[J]. 劉迪,陳佳偉,張聰,孫宏宇,馮憲敏. 食品工業(yè). 2019(10)
[2]轉錄組測序技術的研究和應用進展[J]. 崔凱,吳偉偉,刁其玉. 生物技術通報. 2019(07)
[3]基于UPLC-QTOF-MSE的代謝組學方法研究三七皂苷提取物及注射液的化學組分（英文）[J]. 趙一懿,郭洪祝,陳有根,傅欣彤. Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences. 2017(05)
[4]大葉蛇葡萄提取物對SMMC-7721細胞增殖抑制作用的研究[J]. 黃靜,桂春,答國政,尚祥偉,明小芳,張秀橋. 中國現代中藥. 2017(04)
[5]霉茶總黃酮提取物對自發(fā)性高血壓大鼠胸主動脈重構的影響[J]. 劉靜,鄭國華,吳勇,譚永霞,張寶徽,田先翔. 中南藥學. 2017(03)
[6]霉茶總黃酮對自發(fā)性高血壓大鼠心臟的保護作用及機制研究[J]. 劉佩,鄭國華,吳勇,譚永霞,張寶徽. 中國藥房. 2016(34)
[7]篩選大葉蛇葡萄體外抗腫瘤活性物質[J]. 桂春,黃靜,程佩佩,方玉,夏葉,張秀橋. 中成藥. 2015(07)
[8]白芨查爾酮合成酶基因的克隆與分析[J]. 田愛梅,許忠民,張恩慧. 西北農業(yè)學報. 2014(07)
[9]霉茶黃酮對大鼠離體胸主動脈環(huán)的影響[J]. 王桂紅,曾晶,田先翔,譚永霞,吳勇,朱(王獻),鄭國華. 天然產物研究與開發(fā). 2014(06)
[10]大葉蛇葡萄乙醇提取物對2215細胞HBsAg、HBeAg表達抑制作用的實驗研究[J]. 陳梅玲,陳夏靜,李果,張秀橋. 中國中醫(yī)藥科技. 2012(04)
碩士論文
[1]大葉蛇葡萄不同器官黃酮類化合物代謝路徑差異表達基因研究[D]. 答國政.湖北中醫(yī)藥大學 2017
[2]大葉蛇葡萄質量標準及其降壓作用機理初步研究[D]. 張秋瓊.湖北中醫(yī)藥大學 2011
本文編號：3504621
【文章來源】：湖北中醫(yī)藥大學湖北省
【文章頁數】：157 頁
【學位級別】：博士
【部分圖文】：
混合對照品及樣品色譜圖
湖北中醫(yī)藥大學2020屆博士學位論文6按照表1-5配制胎牛血清測定溶液。表1-5不同比例標準溶液的配制Table1-5Thepreparationofstandardsolutionwithdifferentproportion蛋白質濃度（μg/mL）5101520253035BSA（μL）1234567ddH2O（μL）9876543Bradford試劑（μL）1,0001,0001,0001,0001,0001,0001,000將以上各溶液混合于1.5mLEppendorf離心管中，渦旋振蕩20s，充分混勻后用酶標儀測定最大吸收值，測定波長為595nm，根據測定結果繪制標準曲線（圖1-2）。圖1-2BSA標準曲線圖Fig.1-2TheBSAstandardcurve2.1.3.2含量測定蛋白質團塊溶解干燥后的蛋白質團塊中加入200μL裂解液（表1-6），后反復吹打，直至蛋白質全部分散均勻。超聲（80W，0.8s開，0.8s關）助溶后于冰上冷卻。重復操作一次。后于4℃，12,000rpm，離心20min，吸取上清，轉移至另一新的Eppendorf管中，備用。含量測定為了減小誤差，使所測的數值準確，蛋白質進行兩次定量：初步定量計算得到各樣品的濃度，依據結果將所有樣品的濃度盡量調整至接近；后進行第二次定量，結果見表1-7。
大葉蛇葡萄不同生長期黃酮類化合物的生物合成機制研究15圖1-3電泳掃描圖Fig.1-3Theelectrophoreticscanninggraph注：A、B、C分別代表N1、N2、N3樣品的兩次掃描結果，N1、N2、N3分別為5月、8月、10月采集的樣品。樣品等電點分布特點：5月和8月的大葉蛇葡萄葉片中蛋白質等電點主要在5.0~5.5之間，分別占21.38%、22.97%，而10月的樣品蛋白質等電點ABC
【參考文獻】：
期刊論文
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[3]基于UPLC-QTOF-MSE的代謝組學方法研究三七皂苷提取物及注射液的化學組分（英文）[J]. 趙一懿,郭洪祝,陳有根,傅欣彤. Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences. 2017(05)
[4]大葉蛇葡萄提取物對SMMC-7721細胞增殖抑制作用的研究[J]. 黃靜,桂春,答國政,尚祥偉,明小芳,張秀橋. 中國現代中藥. 2017(04)
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[6]霉茶總黃酮對自發(fā)性高血壓大鼠心臟的保護作用及機制研究[J]. 劉佩,鄭國華,吳勇,譚永霞,張寶徽. 中國藥房. 2016(34)
[7]篩選大葉蛇葡萄體外抗腫瘤活性物質[J]. 桂春,黃靜,程佩佩,方玉,夏葉,張秀橋. 中成藥. 2015(07)
[8]白芨查爾酮合成酶基因的克隆與分析[J]. 田愛梅,許忠民,張恩慧. 西北農業(yè)學報. 2014(07)
[9]霉茶黃酮對大鼠離體胸主動脈環(huán)的影響[J]. 王桂紅,曾晶,田先翔,譚永霞,吳勇,朱(王獻),鄭國華. 天然產物研究與開發(fā). 2014(06)
[10]大葉蛇葡萄乙醇提取物對2215細胞HBsAg、HBeAg表達抑制作用的實驗研究[J]. 陳梅玲,陳夏靜,李果,張秀橋. 中國中醫(yī)藥科技. 2012(04)
碩士論文
[1]大葉蛇葡萄不同器官黃酮類化合物代謝路徑差異表達基因研究[D]. 答國政.湖北中醫(yī)藥大學 2017
[2]大葉蛇葡萄質量標準及其降壓作用機理初步研究[D]. 張秋瓊.湖北中醫(yī)藥大學 2011
本文編號：3504621
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