糖脂代謝失調(diào)性疾病是指因體內(nèi)糖脂代謝異常而造成全身臟器損傷及功能減退的一類疾病,其主要臨床癥狀表現(xiàn)為高血糖、高血脂、肝脂蓄積以及胰島素抵抗等。目前糖尿病、非酒精性脂肪性肝病等糖脂代謝失調(diào)性疾病發(fā)病率不斷上升,已成為人民健康的嚴重威脅。然而由于它們的發(fā)病機制至今尚不明確,造成這類疾病缺乏有效的治療藥物。microRNA作為體內(nèi)眾多生理過程的重要調(diào)控分子,在糖脂代謝失調(diào)性疾病發(fā)生發(fā)展中的作用逐漸被發(fā)現(xiàn),為這類疾病發(fā)病機制研究和藥物研發(fā)提供了新的可能。我們針對實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)的對CYP2E1表達具有雙重調(diào)控機制的miR-552-3p進行深入序列分析發(fā)現(xiàn)其序列中具有與NR1家族核受體響應元件類似的堿基排列;同時基于NR1家族核受體對糖脂代謝的關鍵調(diào)控作用,提出本論文擬解決的科學問題—miR-552-3p與糖脂代謝的關系及其在糖脂代謝失調(diào)性疾病中的功能。miR-552-3p的生物學功能目前多集中在腫瘤領域,其對糖脂代謝的調(diào)節(jié)作用尚未有人涉及。基于此,我們通過體內(nèi)和體外實驗對miR-552-3p對糖脂代謝調(diào)節(jié)的功能及作用機制進行了深入和系統(tǒng)的研究。miR-552-3p調(diào)控代謝相關基因表達的功能發(fā)... 

【文章來源】：中國科學院大學(中國科學院上海藥物研究所)上海市

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

miR-552-3p與NR1核受體響應元件（FXRE，LXRE，PPRE等）序列匹配示意圖

miR-552-3p改善糖脂代謝失調(diào)性疾病作用發(fā)現(xiàn)及機制研究24HepG2細胞內(nèi)分別轉(zhuǎn)染1nMmiR-552-3pmimics與陰性對照mimics，培養(yǎng)72小時。之后棄去培養(yǎng)基，加入500μLPBS潤洗一次，加入500μLRNAisoplus裂解細胞，用異丙醇沉淀法提取總RNA。將樣品送給華大公司進行RNA-seq，對細胞內(nèi)各基因mRNA含量進行測定。并且我們設定與對照組相比，表達差異倍數(shù)log2ratio>1，顯著性差異Q-value0.001，基因表達豐度FPKM>10的基因為差異表達基因。如圖2.2A所示，與轉(zhuǎn)染陰性對照mimics（NC）的細胞相比，轉(zhuǎn)染miR-552-3pmimics后，細胞內(nèi)共有1529個基因的表達發(fā)生了明顯改變，其中表達上調(diào)的基因有754個，表達下調(diào)的基因有775個。進一步我們利用京都基因與基因組百科全書（KEGG）對差異表達的基因進行分析與歸類，找尋差異表達基因所參與的生物學過程。結果顯示（圖2.2B），富集程度最高的生物學通路是代謝通路，這表明受到miR-552-3p調(diào)控的基因主要參與體內(nèi)代謝過程。圖2.2miR-552-3p調(diào)控代謝相關基因的表達Figure2.2miR-552-3pregulatedmetabolism-relatedgeneexpression.（A）RNA-seq測序結果的熱圖分析數(shù)（log2ratio>2，Q-value0.001，F(xiàn)PKM>10）。向HepG2細胞轉(zhuǎn)染miR-552-3pmimics以及陰性對照mimics，72小時后收集樣品進行RNA-seq。（B）針對RNA-seq中差異表達基因進性KEGG分析。

miR-552-3p改善糖脂代謝失調(diào)性疾病作用發(fā)現(xiàn)及機制研究26圖2.3差異表達基因的KEGG分析Figure2.3TheKEGGpathwayanalysisfordifferentialexpressiongenes（A）針對RNA-seq中表達下調(diào)基因進行KEGG分析。（B）針對RNA-seq中表達上調(diào)基因進行KEGG分析。為了進一步驗證miR-552-3p對代謝相關基因的調(diào)控功能，我們采用RT-PCR技術對RNA-seq中表達下調(diào)的基因進行驗證。如圖2.4A所示，轉(zhuǎn)染miR-552-3p

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3499756