研究背景:類胰島素生長因子信號軸（IGF/IGF1R）在乳腺癌發(fā)生發(fā)展、耐藥、腫瘤干細胞自我更新中,起到至關(guān)重要的作用。其中,IGF1R在腫瘤中表達上調(diào),并可作為腫瘤藥物治療的靶點。我們前期在探討IGF1R通路調(diào)控時,采用“RNA介導(dǎo)染色質(zhì)空間構(gòu)象捕獲”（R3C）技術(shù),發(fā)現(xiàn)了一條與IGF1R順式競爭、呈遺傳印記表達的反義 lncRNA-IRAIN（IGF1R antisense imprinted noncoding RNA）。研究顯示IRAIN為腫瘤抑制基因,在乳腺癌中表達下調(diào),而IGF1R呈高表達,導(dǎo)致IGF1R/IRAIN 比例失常,促進腫瘤生長。為精準(zhǔn)靶向乳腺癌這一IGF1R信號通路失控,我們創(chuàng)建了一種“反義lncRNA順式競爭”（antisense lncRNAin situ cis-competition,ALIC）的全新靶向方法,在乳腺癌細胞中精準(zhǔn)修正IGF1R/IRAIN 產(chǎn)物表達異常,達到腫瘤靶向治療的目的�；诜戳xlncRNA-IRAIN與IGFIR啟動子-外含子1區(qū)在序列上反方向重疊、在轉(zhuǎn)錄水平相互競爭的內(nèi)源性基因調(diào)控原理,我們提出通過CRISPR Cas9技術(shù)在... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

IGF1R在腫瘤中過表達Figure1.1OverexpressionofIGF1Rintumors

吉林大學(xué)博士學(xué)位論文 0.6 體積的異丙醇，在-40℃條件下放置 30 min，在-80。此后在 4℃條件下用 12000 rpm 離心 20 min。并用 500 。殘留乙醇充分晾干后，加入 20 ul 的 DEPC 水溶解 DNA，孵育 10 min 促進其溶解，測濃度，并進行進一步的 PCR

第 3 章 結(jié) 果第 3 章 結(jié) 果3.1 IRAIN 的靶向激活3.1.1 靶位點的選擇根據(jù)靶基因序列設(shè)計，在靶基因啟動子下游序列選擇PAM前間區(qū)序列臨近基序CRISPR Cas9-gRNA復(fù)合物特異性識別并結(jié)合的靶位點，包含由三個核苷酸NGG組成的PAM并可與gRNA分子互補結(jié)合。如圖3.1.1

【參考文獻】：
期刊論文
[1]CRISPR/Cas系統(tǒng):RNA靶向的基因組定向編輯新技術(shù)[J]. 李君,張毅,陳坤玲,單奇?zhèn)?王延鵬,梁振,高彩霞.  遺傳. 2013(11)
[2]IGF-1R as an anti-cancer target—trials and tribulations[J]. Helen X. Chen,Elad Sharon.  Chinese Journal of Cancer. 2013(05)
[3]乳腺癌診治進展——多學(xué)科與個體化[J]. 沈坤煒,李宏為.  中國實用外科雜志. 2011(10)



本文編號：3497003