研究背景:急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）是一類具有細(xì)胞遺傳學(xué)和分子異常的高度侵襲性惡性腫瘤。其特征在于造血干細(xì)胞的分化障礙、骨髓和外周血中原始細(xì)胞克隆性擴(kuò)增。在過去的幾十年,已有多種療法被應(yīng)用于AML的治療,例如標(biāo)準(zhǔn)的“7+3”誘導(dǎo)療法,由7天的阿糖胞苷（cytarabine,Ara-C）與3天蒽環(huán)類藥物組合DA方案可以有效的殺死AML中的白血病細(xì)胞,但絕大多數(shù)AML患者在3年內(nèi)出現(xiàn)致死性的疾病復(fù)發(fā),患者5年總生存率（overall survival,OS）低于40%。目前治療AML面臨的最大挑戰(zhàn)之一是常規(guī)治療方案無法殺死阻抑凋亡的快速增殖的腫瘤細(xì)胞。本研究在于闡明AML細(xì)胞維持快速增殖能力和耐藥性的分子機(jī)制,為開發(fā)更安全、有效的治療AML的療法提供理論基礎(chǔ)。轉(zhuǎn)錄是所有活細(xì)胞所必需的“重要過程”。腫瘤細(xì)胞需要高水平的轉(zhuǎn)錄過程來維持快速增殖和存活,并且轉(zhuǎn)錄失調(diào)在腫瘤細(xì)胞中是普遍發(fā)生的。例如,RNA聚合酶I（RNA polymerase I,RNAPI）轉(zhuǎn)錄失控,出現(xiàn)轉(zhuǎn)錄過度活躍被認(rèn)為是血液腫瘤細(xì)胞存活必需的,并且可以在體內(nèi)進(jìn)行針對性靶向治療。與正常... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：119 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．１．２?ＲＰＢ１蛋白在ＡＭＬ細(xì)胞株及ＡＭＬ原代樣本中表迗情況??

用免疫印跡法（ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ，?ＷＢ）方法檢測了?ＲＰＢ１蛋白在ＡＭＬ細(xì)胞株、１１３例??初發(fā)ＡＭＬ骨髓和外周血、１０例正常人外周血及６例臍帶血細(xì)胞中的表達(dá)情況（見??圖１．１）。結(jié)果顯示ＲＰＢ１蛋白在７例ＡＭＬ細(xì)胞株（見圖１．１．１）和部分ＡＭＬ病??人樣本（見圖１丄２）中異常高表達(dá)，在正常人外周血（見圖１．１．３）和臍帶血（見??圖１．１．４）中低表達(dá)或不表達(dá)。然后我們通過ｉｍａｇｅＪ軟件進(jìn)行定量分析得出ＲＰＢ１??蛋白在ＡＭＬ細(xì)胞株、ＡＭＬ原代樣本、正常人外周血和臍帶血細(xì)胞中表迖的中位??值分別?１．４９１４８，０．７８８９３４，０．０２８０７６３?和?０．０４８１４４?（見圖?１．１．５）。既往文獻(xiàn)指出?ＲＰＢ１??普遍存在于正常的組織中［２８，２９】，而我們檢測出ＲＰＢ１在正常外周血細(xì)胞和正常造血??干／袓細(xì)胞中低表達(dá)或不表達(dá)。為了進(jìn)一步驗(yàn)證我們的結(jié)果，我們接著采用共聚焦??免疫焚光顯微鏡來觀察ＲＰＢ１蛋白在ＡＭＬ細(xì)胞株、初發(fā)原代樣本、正常人干細(xì)胞??供者及臍帶血細(xì)胞中的表達(dá)及定位情況。我們選取白血病細(xì)胞株ＭＯＬＭ－１３、急性??髓系白血�。停档脑鷺颖尽⒛殠а巴庵苎杉�(xì)胞。同樣可以看到在ＡＭＬ細(xì)胞??株Ｍ０ＬＭ－１３和原代樣本（ＡＭＬ－Ｍ５）中均可檢測到ＲＰＢ１蛋白高表達(dá)，并且ＲＰＢ１??蛋白定位于細(xì)胞核，而在正常的造血干／袓細(xì)胞中并沒有觀察到ＲＰＢ１蛋白（見圖??１．１．６）。接著我采用免疫印記法檢測到磷酸化的ＲＰＢ１蛋白在ＡＭＬ細(xì)胞株中普遍??高表達(dá)（見圖１．１．７）。對比在磁珠分選的ＣＤ３４＋的ＫＧ－ｌａ細(xì)胞株、初發(fā)的ＡＭＬ??樣本中高表達(dá)

用免疫印跡法（ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ，?ＷＢ）方法檢測了?ＲＰＢ１蛋白在ＡＭＬ細(xì)胞株、１１３例??初發(fā)ＡＭＬ骨髓和外周血、１０例正常人外周血及６例臍帶血細(xì)胞中的表達(dá)情況（見??圖１．１）。結(jié)果顯示ＲＰＢ１蛋白在７例ＡＭＬ細(xì)胞株（見圖１．１．１）和部分ＡＭＬ病??人樣本（見圖１丄２）中異常高表達(dá)，在正常人外周血（見圖１．１．３）和臍帶血（見??圖１．１．４）中低表達(dá)或不表達(dá)。然后我們通過ｉｍａｇｅＪ軟件進(jìn)行定量分析得出ＲＰＢ１??蛋白在ＡＭＬ細(xì)胞株、ＡＭＬ原代樣本、正常人外周血和臍帶血細(xì)胞中表迖的中位??值分別?１．４９１４８，０．７８８９３４，０．０２８０７６３?和?０．０４８１４４?（見圖?１．１．５）。既往文獻(xiàn)指出?ＲＰＢ１??普遍存在于正常的組織中［２８，２９】，而我們檢測出ＲＰＢ１在正常外周血細(xì)胞和正常造血??干／袓細(xì)胞中低表達(dá)或不表達(dá)。為了進(jìn)一步驗(yàn)證我們的結(jié)果，我們接著采用共聚焦??免疫焚光顯微鏡來觀察ＲＰＢ１蛋白在ＡＭＬ細(xì)胞株、初發(fā)原代樣本、正常人干細(xì)胞??供者及臍帶血細(xì)胞中的表達(dá)及定位情況。我們選取白血病細(xì)胞株ＭＯＬＭ－１３、急性??髓系白血�。停档脑鷺颖尽⒛殠а巴庵苎杉�(xì)胞。同樣可以看到在ＡＭＬ細(xì)胞??株Ｍ０ＬＭ－１３和原代樣本（ＡＭＬ－Ｍ５）中均可檢測到ＲＰＢ１蛋白高表達(dá)，并且ＲＰＢ１??蛋白定位于細(xì)胞核，而在正常的造血干／袓細(xì)胞中并沒有觀察到ＲＰＢ１蛋白（見圖??１．１．６）。接著我采用免疫印記法檢測到磷酸化的ＲＰＢ１蛋白在ＡＭＬ細(xì)胞株中普遍??高表達(dá)（見圖１．１．７）。對比在磁珠分選的ＣＤ３４＋的ＫＧ－ｌａ細(xì)胞株、初發(fā)的ＡＭＬ??樣本中高表達(dá)


本文編號：3494302