目的:探討:1、原始高分子量HA（high molecular weight HA,HMW-HA）對乳腺癌細(xì)胞休眠的調(diào)控;2、腫瘤相關(guān)骨髓微環(huán)境HA代謝異常變化及對乳腺癌細(xì)胞生長的調(diào)控。方法:一、未分解代謝改變的HMW-HA對乳腺癌細(xì)胞休眠的影響:選擇MDA-MB-231、MDA-MB-231BO、4T1和MCF7乳腺癌細(xì)胞。HMW-HA作用后,1、CCK-8檢測生長、免疫熒光和流式細(xì)胞術(shù)分析Ki-67;2、流式細(xì)胞術(shù)檢測G0/G1細(xì)胞周期;3、Western blot和流式細(xì)胞術(shù)觀察P38、ERK1/2、Cyclin D1和P21cip1水平;4、免疫熒光檢測3D細(xì)胞培養(yǎng)中Ki-67和P21cip1。二、代謝改變的HA對乳腺癌細(xì)胞生長的影響:1、骨髓基質(zhì)細(xì)胞HS5與MDA-MB-231BO細(xì)胞共培養(yǎng);2、化學(xué)發(fā)光方法檢測HA含量;3、通過4-MU,檢測HA與MDA-MB-231BO細(xì)胞生長的相關(guān)性;4、si RNA HAS2降低HS5細(xì)胞HA表達(dá),觀察MDA-MB-231BO細(xì)胞生長,確定共培養(yǎng)中HA的來源;5、sh RNA下調(diào)MDA-MB-231BO細(xì)胞CD44表達(dá),觀察HA-CD... 

【文章來源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

乳腺癌細(xì)胞侵襲能力結(jié)果

上海交通大學(xué)2016級博士研究生學(xué)位論文35圖2HA抑制MDA-MB-231BO細(xì)胞生長并維持MCF7細(xì)胞慢生長Figure2.HAinhibitedMDA-MB-231BOcellgrowthandsustainedtheslowgrowthofMCF7cells為了監(jiān)控HA處理后乳腺癌細(xì)胞的生長，2000個MDA-MB-231BO或MCF7細(xì)胞用100μg/mL的HA刺激6day。在各個檢測終止點，檢測450nm波長處的OD值。采用t-test統(tǒng)計學(xué)檢驗方法，進(jìn)行實驗組與HA未處理的對照組之間的比較，每組n=5,數(shù)據(jù)以mean±SEM表示。當(dāng)*P<0.05時，為兩組之間具有顯著性差異，有統(tǒng)計學(xué)意義。A.HA處理MDA-MB-231BO細(xì)胞，分別2day、4day、6day的生長。B.HA處理MCF7細(xì)胞，分別2day、4day、6day的生長。3HMW-HA抑制MDA-MB-231細(xì)胞和4T1乳腺癌細(xì)胞的生長為了探討HA抑制乳腺癌細(xì)胞生長的作用是否具有普遍性，我們選取另外兩株乳腺癌細(xì)胞：MDA-MB-231細(xì)胞和小鼠來源的4T1乳腺癌細(xì)胞。用HMW-HA作用于這兩種細(xì)胞，利用CCK-8細(xì)胞增殖檢測方法在不同時間點觀察細(xì)胞的生長。結(jié)果表明：HMW-HA對MDA-MB-231細(xì)胞（圖3A）和4T1細(xì)胞（圖3B）的生長同時具有抑制作用。

上海交通大學(xué)2016級博士研究生學(xué)位論文36圖3HMW-HA抑制MDA-MB-231細(xì)胞和4T1細(xì)胞的生長Figure3.HMW-HAinhibitedgrowthofMDA-MB-231cellsand4T1cells.2000個MDA-MB-231或4T1細(xì)胞用100μg/mL的HA刺激6day。在各個檢測終止點，檢測450nm波長處的OD值。采用t-test統(tǒng)計學(xué)檢驗方法，進(jìn)行實驗組與未經(jīng)HA處理的對照組之間的比較，每組n=5,數(shù)據(jù)以mean±SEM表示。當(dāng)*P<0.05時，為兩組之間具有顯著性差異，有統(tǒng)計學(xué)意義。A.HA處理MDA-MB-231細(xì)胞，分別2day、4day、6day的生長。B.HA處理4T1細(xì)胞，分別2day、4day、6day的生長。結(jié)果顯示HMW-HA可以抑制MDA-MB-231細(xì)胞和4T1細(xì)胞的生長。4HMW-HA通過延長細(xì)胞周期G0/G1期使MDA-MB-231BO細(xì)胞處于靜止?fàn)顟B(tài)因為HMW-HA可以抑制MDA-MB-231BO細(xì)胞的生長，接下來我們研究MDA-MB-231BO和MCF7細(xì)胞經(jīng)過HMW-HA處理后細(xì)胞周期的改變。用HMW-HA處理該乳腺癌細(xì)胞，分別在2day、4day、6day采用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期各期所占比例的改變。對MDA-MB-231BO細(xì)胞而言，見圖4A，HMW-HA處理2天后，G0/G1期細(xì)胞周期比例為35.45±1.93%，未處理組為38.40%±0.64%，對照組和處理組在2day時間點G0/G1細(xì)胞周期比例沒有統(tǒng)計學(xué)差異。在4day和6day時間點，經(jīng)過HMW-HA處理的MDA-MB-231BO細(xì)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]PI3K/Akt/mTOR inhibitors in breast cancer[J]. Joycelyn JX Lee,Kiley Loh,Yoon-Sim Yap.  Cancer Biology & Medicine. 2015(04)



本文編號：3396621