第一部分兔骨髓間充質干細胞的提取、鑒定及培養(yǎng)目的:從成年兔的四肢骨中分離提取骨髓間充質干細胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）,并進行傳代培養(yǎng),同時對骨髓間充質干細胞進行鑒定,為后續(xù)實驗提供實驗細胞。方法:通過Percoll密度梯度分離法提取并擴增培養(yǎng)BMSCs,并通過流式細胞儀、成骨及成脂分化誘導培養(yǎng)基對BMSCs進行鑒定。結果:BMSCs原代及傳代細胞狀態(tài)良好,流式細胞儀、成骨及成脂分化誘導鑒定表明分離提取的BMSCs具有BMSCs特有的特征,說明分離提取成功。結論:實驗所分離提取的兔四肢骨內的細胞鑒定為BMSCs,可用于后續(xù)實驗研究。第二部分兔成骨細胞的提取、鑒定及培養(yǎng)目的:從成年兔的四肢骨膜中分離提取成骨細胞（osteoblasts,OB）,并進行傳代培養(yǎng),同時對OB進行鑒定,為后續(xù)實驗提供實驗細胞。方法:采用骨膜源性的方法提取OB并擴增培養(yǎng)OB,通過吉薩姆染色、茜素紅染色、掃描電鏡對OB進行鑒定。結果:OB原代及傳代細胞狀態(tài)良好,吉薩姆染色、茜素紅染色、掃描電鏡對OB細胞進行鑒定,結果表明分離提取的OB細胞具有相應特性,說明分... 

【文章來源】：湖北中醫(yī)藥大學湖北省

【文章頁數】：213 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

-C顯示，P3代BMSCs培養(yǎng)24h，在顯微鏡下不同倍數的形態(tài)表現，其中A為4×，B為10×，C為20×

基于腎主骨生髓理論研究淫羊藿苷調控外泌體內miR-122-5p對BMSCs成骨、遷移的作用及機制27圖2CD29、CD44、CD45三個細胞表型鑒定結果，其中，CD29和CD44呈陽性，CD45呈陰性。2.2成骨分化誘導鑒定圖3經成骨誘導后，肉眼和微下觀。A為2w培養(yǎng)后BMSCs經茜素紅染色，肉眼可見大量的被染成紅色的礦化結節(jié)出現。B、C、D為2w培養(yǎng)后不同數顯微鏡下所觀察到的大量礦化結節(jié)，其中B為4×，C為10×，D為20×。2.3成脂分化誘導鑒定

基于腎主骨生髓理論研究淫羊藿苷調控外泌體內miR-122-5p對BMSCs成骨、遷移的作用及機制27圖2CD29、CD44、CD45三個細胞表型鑒定結果，其中，CD29和CD44呈陽性，CD45呈陰性。2.2成骨分化誘導鑒定圖3經成骨誘導后，肉眼和微下觀。A為2w培養(yǎng)后BMSCs經茜素紅染色，肉眼可見大量的被染成紅色的礦化結節(jié)出現。B、C、D為2w培養(yǎng)后不同數顯微鏡下所觀察到的大量礦化結節(jié)，其中B為4×，C為10×，D為20×。2.3成脂分化誘導鑒定

【參考文獻】：
期刊論文
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[6]活血通絡湯對SANFH兔造模過程中Notch2、DLL3以及PDGF表達的影響[J]. 王敏,蔡萬翔,李濤,江蓉星.  時珍國醫(yī)國藥. 2019(10)
[7]富集自體骨髓干細胞移植與髓芯減壓治療缺血性股骨頭壞死患者血清成纖維細胞生長因子2、缺氧誘導因子1α、血管內皮生長因子的變化[J]. 張景義,海國棟,楊昊飛,范叢亮,嚴磊,張春雷,竇浚峰,馬海龍.  中國組織工程研究. 2020(01)
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本文編號：3389956