小鼠B淋巴細(xì)胞有兩種來源,出生前,B淋巴細(xì)胞由胎肝中的造血干細(xì)胞（Hematopoietic stem cell,HSC）發(fā)育而來,出生后,骨髓中的HSC則不斷發(fā)育為B細(xì)胞,為外周提供成熟的B細(xì)胞,參與體液免疫,維持機(jī)體穩(wěn)態(tài)。Prepro-B細(xì)胞被認(rèn)為是最出現(xiàn)的B細(xì)胞前體,高表達(dá)B220和其他B細(xì)胞相關(guān)分子。Prepro-B細(xì)胞隨之發(fā)育為pro-B細(xì)胞,在pro-B細(xì)胞階段會發(fā)生免疫球蛋白重鏈的V-DJ重排,形成μ鏈。此時細(xì)胞還沒有成熟的輕鏈,有兩個替代型輕鏈λ鏈和Vpre B,μ鏈和這兩個替代型輕鏈組裝成pre-BCR。此時B細(xì)胞發(fā)育進(jìn)入pre-B細(xì)胞階段,在pre-BCR信號刺激下,pre-B細(xì)胞進(jìn)行增殖,同時進(jìn)行輕鏈的重排,形成成熟的BCR,在經(jīng)歷陽性選擇后發(fā)育為immature B細(xì)胞、mature B細(xì)胞。DDB1,是DNA損傷結(jié)合蛋白1的簡稱,與DDB2形成損傷修復(fù)復(fù)合體,參與UV引起的DNA損傷修復(fù),后續(xù)研究發(fā)現(xiàn)DDB1作為一個接頭蛋白,參與CRL4E3泛素連接酶的形成,β螺旋B和CUL4的N端結(jié)合,β螺旋A和C則形成一個鉗子樣結(jié)構(gòu)和各種DDB1和CUL4相關(guān)因子（DDB... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：博士

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1Ddb1fl/fl小鼠和Dcaf2fl/fl小鼠構(gòu)建策略

浙江大學(xué)博士學(xué)位論文2材料和方法9圖2.1.3.1質(zhì)粒圖譜。Figure2.2.2Thephysicalmapsofseveralplasmids.(a)Themapofp3xFLAG-CMV-7.1.(b)ThemapofpcDNA3.1/myc-HisC.(c)ThemapofpMLP.2.1.3.2菌株大腸桿菌感受態(tài)DH5α購買自北京全式金生物公司。2.1.3.3引物合成及序列測定本實(shí)驗(yàn)所用引物由上海捷瑞生物工程有限公司合成，DNA序列測定由上海鉑尚生物技術(shù)有限公司完成。2.1.3.4試劑盒HiScriptIIQRTSuperMixforqPCR，購買于南京諾唯贊生物科技有限公司。ClonExpressIIOneStepCloningKit，購買于南京諾唯贊生物科技有限公司。PCRCleanupKit，購買于Axygen公司。c

浙江大學(xué)博士學(xué)位論文3實(shí)驗(yàn)結(jié)果333實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1DDB1在pro-B階段高表達(dá)DDB1，是一種DNA損傷結(jié)合蛋白。最初發(fā)現(xiàn)它結(jié)合在UV引起的DNA損傷位點(diǎn)46，參與核苷酸切除修復(fù)途徑（nucleotideexcisionrepair，NER）。隨后研究人員發(fā)現(xiàn)DDB1可以與CUL4、DDB2相互作用形成E3泛素連接酶復(fù)合物，降解著色性干皮癥C（XerodermapigmentosumC，XPC）分子，促進(jìn)損傷修復(fù)47。YongCang等人發(fā)現(xiàn)DDB1全敲小鼠具有胚胎期致死性，在大腦和晶狀體中條件性敲除DDB1后則導(dǎo)致神經(jīng)和晶狀體退化、腦內(nèi)出血和新生小鼠死亡，他們認(rèn)為這可能是由于DDB1參與調(diào)控分裂細(xì)胞的活性和維持基因組穩(wěn)定性有關(guān)，DDB1是干細(xì)胞穩(wěn)態(tài)維持的一個重要調(diào)控因子48。DDB1在前體細(xì)胞LSK中高表達(dá)，并且在之后的幾種前體細(xì)胞如CMP、GMP、pro-B中都維持著較高的表達(dá)水平49。為了研究DDB1在B細(xì)胞中的可能作用，我們首先檢測了DDB1在B細(xì)胞各個發(fā)育階段的表達(dá)情況（圖3.1）。根據(jù)不同發(fā)育階段B細(xì)胞標(biāo)志分子表達(dá)的不同，流式分選B細(xì)胞亞群，通過qPCR和Westernblot分別進(jìn)行DDB1轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平檢測。結(jié)果顯示，與之前的報道一致的是，DDB1在pro-B和pre-B細(xì)胞中表達(dá)較高，尤其是pro-B階段，這提示我們DDB1可能參與B淋巴細(xì)胞的發(fā)育過程。圖3.1DDB1在不同發(fā)育階段的B細(xì)胞中的表達(dá)譜。


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