發(fā)布時間：2021-09-04 01:52

　　肺癌是全球范圍內(nèi)高發(fā)的癌癥類型,由肺癌導致的死亡病例已成為癌癥死亡的主要原因。近年肺癌的發(fā)病在發(fā)展中國家越來越普遍,女性肺癌患者的數(shù)目顯著提升,男性中肺癌仍然是發(fā)病率最高的癌癥。根據(jù)組織與臨床學特征,肺癌可分為兩大類:小細胞肺癌與非小細胞肺癌,非小細胞肺癌占所有肺癌的75%以上。放射治療是目前公認的治療惡性腫瘤的有效方法,局部晚期肺癌患者非常適合接受放射治療,然而,長期生存率仍然很低,患者5年生存率約為5-25%。隨著基礎研究的不斷深入,放療技術的日益進步,越來越多的方法被用于提高放射治療的效果,其中藥物聯(lián)合放射治療實現(xiàn)了放射協(xié)同效應,可通過抑制輻射損傷修復、抑制增殖、增加凋亡和加強氧化等多種機制使腫瘤細胞對射線更加敏感。F1Fo ATP酶在正常生理下利用線粒體跨膜電勢催化ATP合成,在特殊的條件下（缺氧或缺血）,可發(fā)揮ATP水解酶的作用,同時恢復線粒體膜電勢。小分子BTB06584（BTB）與內(nèi)源性的ATP酶抑制因子1（IF1）都是選擇性抑制F1Fo ATP酶水解ATP,而不影響F1Fo ATP酶合成ATP的抑制劑。本論文主要研究了這兩種抑制劑對輻射敏感性的影響及機制。首先在模式動物... 

【文章來源】：中國科學院大學(中國科學院近代物理研究所)甘肅省

【文章頁數(shù)】：116 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 引言
    1.1 肺癌的放射治療進展
        1.1.1 肺癌放療的優(yōu)勢與風險
        1.1.2 現(xiàn)代化的肺癌放療手段
    1.2 輻射敏感性與線粒體
        1.2.1 肺癌的輻射敏感性
        1.2.2 線粒體輻射生物學效應
        1.2.3 線粒體DNA與輻射敏感性
        1.2.4 線粒體能量代謝與輻射敏感性
        1.2.5 線粒體氧化還原平衡與輻射敏感性
        1.2.6 線粒體途徑的細胞凋亡與輻射敏感性
    1.3 F1Fo ATP酶
        1.3.1 F1Fo ATP酶的結構
        1.3.2 F1Fo ATP酶“分子馬達”的動力學基礎
        1.3.3 F1Fo ATP酶的合成與分解
        1.3.4 線粒體膜電勢與F1Fo ATP酶的功能轉換
        1.3.5 F1Fo ATP酶與腫瘤
    1.4 F1Fo ATP酶的抑制因子
        1.4.1 非選擇性抑制劑
        1.4.2 選擇性抑制劑
    1.5 本文的研究目的及擬解決的問題
第2章 電離輻射對斑馬魚胚胎F1Fo-ATP酶的影響
    2.1 研究背景
    2.2 實驗材料與方法
        2.2.1 實驗藥品與試劑
        2.2.2 儀器設備
        2.2.3 斑馬魚的來源與飼養(yǎng)
        2.2.4 斑馬魚胚胎獲得
        2.2.5 三種類型電離輻射照射斑馬魚胚胎
        2.2.6 斑馬魚胚胎死亡率、孵化率、心率、畸形率的檢測及照片采集
        2.2.7 斑馬魚胚胎mRNA的提取與逆轉錄為cDNA
        2.2.8 q-PCR檢測斑馬魚線粒體功能基因的表達
        2.2.9 斑馬魚胚胎ATP含量檢測
        2.2.10 斑馬魚胚胎ATP5α1 基因的原位雜交
        2.2.11 統(tǒng)計學分析
    2.3 實驗結果
        2.3.1 三種電離輻射對斑馬魚死亡率的影響
        2.3.2 三種電離輻射對斑馬魚線粒體功能相關基因表達的影響
        2.3.3 X射線輻射后斑馬魚ATP5α1 基因表達的時空特異性
        2.3.4 BTB與寡霉素對斑馬魚胚胎ATP含量的影響
        2.3.5 BTB或寡霉素與三種射線聯(lián)合作用對斑馬魚存活率與孵化率的影響
        2.3.6 BTB或寡霉素與三種射線聯(lián)合作用對斑馬魚ATP含量的影響
    2.4 討論
第3章 BTB提高非小細胞肺癌的輻射敏感性
    3.1 研究背景
    3.2 實驗材料與方法
        3.2.1 試驗藥品與試劑
        3.2.2 實驗儀器
        3.2.3 細胞培養(yǎng)
        3.2.4 輻照與藥物處理
        3.2.5 細胞增殖分析
        3.2.6 線粒體膜電勢檢測
        3.2.7 克隆形成分析
        3.2.8 Western Blot蛋白印跡
        3.2.9 qPCR檢測
        3.2.10 F1FoATP酶活性檢測
        3.2.11 流式細胞儀檢測細胞凋亡
        3.2.12 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    3.3 實驗結果
        3.3.1 非小細胞肺癌同時存在兩種的能量代謝途徑
        3.3.2 BTB的最佳處理濃度及抑制效果
        3.3.3 BTB提高非小細胞肺癌的輻射敏感性
        3.3.4 輻射誘導非小細胞肺癌F1FoATP酶 ATP水解活性
        3.3.5 X線照射聯(lián)合BTB可導致線粒體膜電位(ΔΨm)去極化
        3.3.6 X線照射聯(lián)合BTB誘導更嚴重的細胞凋亡
    3.4 討論
第4章 IF1 誘導輻射后線粒體自噬
    4.1 前言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 試驗藥品與試劑
        4.2.2 實驗儀器
        4.2.3 細胞培養(yǎng)
        4.2.4 輻射條件
        4.2.5 shRNA穩(wěn)定敲低細胞系的建立
        4.2.6 劃痕實驗
        4.2.7 RNA提取與反轉錄為c DNA
        4.2.8 qPCR
        4.2.9 Western Blot
        4.2.10 免疫熒光雙染
        4.2.11 活性氧檢測
        4.2.12 細胞自噬檢測
        4.2.13 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    4.3 實驗結果
        4.3.1 電離輻射后IF1 的動力學表達變化
        4.3.2 電離輻射誘導線粒體自噬
        4.3.3 IF1 敲低后的細胞生理特征
        4.3.4 IF1 敲低的功能驗證
        4.3.5 IF1 敲低抑制電離輻射誘導線粒體自噬
        4.3.6 IF1 敲低提高輻射敏感性
    4.4 討論
第5章 總結與展望
    5.1 總結
    5.2 展望
參考文獻
致謝
作者簡歷及攻讀學位期間發(fā)表的學術論文與研究成果


【參考文獻】：
期刊論文
[1]重離子照射腫瘤細胞的相對生物學效應值[J]. 郭傳玲,王菊芳,金曉東,荊西剛,李仁民,李文建.  輻射研究與輻射工藝學報. 2007(01)



本文編號：3382316